一种MTT法检测木霉菌活性的方法技术

本发明专利技术提供一种MTT法检测木霉菌活性的方法，包括以下步骤：（1）制备木霉菌发酵液，所述木霉菌发酵液中厚垣孢子浓度为107-108CFU/mL；（2）测出木霉菌发酵液在570nm处读取OD值，此时，木霉菌的萌发率为100%；（3）配制不同浓度的木霉菌发酵液并测出OD值，根据测量值制作木霉菌萌发率与OD值的标准曲线；（4）测出待测的木霉菌制剂的OD值，将OD值与标准曲线对照，即可得知待测的木霉菌制剂中木霉菌的萌发率。与现有技术相比，本发明专利技术克服了传统的木霉菌厚垣孢子的活性检测一般采用传统的涂平板法，耗时长、易受杂菌污染、工作量大等不足，为木霉菌生防制剂的厚垣孢子活性快速检测提供了可能，提高了检测效率，降低了人们的工作量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种木霉菌活性的检测方法，具体的是通过MTT比色法，检测木霉菌的厚垣孢子存活和生长的一种方法。
技术介绍
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)，甲瓒沉积在细胞中，而死细胞无此功能。用有机溶剂溶解细胞中的甲瓒，用分光光度计在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、 细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。而如今大规模应用的MTT法检测活细胞的方法多是动物细胞、细菌等活性检测，应用于真菌厚垣孢子活性检测的很少，而木霉菌属于真菌。目前，木霉菌厚垣孢子的活性检测一般采用传统的涂平板法，但是检测时间比较长，并且检测过程要防止杂菌污染，工作量大。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种MTT法检测木霉菌活性的方法，以解决现有技术中的木霉菌厚垣孢子的活性检测一般采用传统的涂平板法，检测时间比较长，并且检测过程要防本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种MTT法检测木霉菌活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）、制备木霉菌发酵液，所述木霉菌发酵液中厚垣孢子浓度为107？108？CFU/mL；（2）、取上述木霉菌发酵液200？400？uL，再加入MTT水溶液400？600？uL，于40℃？水浴3？h，之后加入500？uL？1mol/L？浓盐酸终止反应；取上清与异丙醇或者异丁醇混合，静止15？min，12000？r/min离心3？min，取上清用分光光度计在570？nm处读取OD值，此时，木霉菌的萌发率为100%；（3）、将步骤（1）的木霉菌发酵液配制成原浓度的10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈捷，林振亚，余嘉，余传金，范莉莉，李雅乾，吴琼，孙瑞艳，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：