本发明专利技术公开紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖，其特征在于，所述均一多糖的总糖含量为大于95％，且所述均一多糖的分子量为3000～10000道尔顿，优选7762.23道尔顿。本发明专利技术也公开上述均一多糖的制备方法。本方法提供的紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖的多糖含量更高、给药剂量更低、纯度更高，且其制备工艺亦适于工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖GS-B-W-1、其制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的用途。
技术介绍
食药用真菌具有抗肿瘤抗病毒、降血脂、延缓衰老、护肝排毒、促进核酸和蛋白质生物合成等多种功效，在中国有悠久的使用历史。国内外大量研究表明，真菌多糖是从真菌子实体、菌丝体、发酵液中分离得到的，为真菌类药物的药效部位，是能够控制细胞分裂分化，调节细胞生长衰老的一类活性多糖。紫芝(Ganoderma sinense)作为灵芝属真菌(2005版中国药典)，其有较明显的抗肿瘤、提高免疫力的功效。由于其制备工艺不明确，多糖含量较低(一般<60%)。另外紫 芝粗多糖组分复杂，主要药效部位和组分尚未阐明。且由于紫芝子实体资源稀少，市场上少见紫芝产品。紫芝粗多糖溶解度很差，粘度较大，颜色深，味重，其分子量从几千到上千万，分子量跨度很大，难找到合适的质量控制方法。研究表明，分子量是影响多糖组分药效的主要因素之一，若能将粗多糖分离纯化得到均一多糖，阐明其构效关系，不仅能提高药效水平，并且对质量控制有很大的帮助。中国专利200710045369. 4 “一种紫芝发酵方法及制得的紫芝菌丝体”公开了一种紫芝液体深层发酵产生菌丝体的方法，该菌丝体用水提醇沉法提取得到的粗多糖含量在39 75%，其体内药理实验中，口服剂量为40mg/kg/天时有一定抗肿瘤活性。中国专利200710045368.x “紫芝菌丝体胞内多糖及其制备方法和应用”公开了一种从紫芝液体深层发酵产生的菌丝体中提取制备得到粗多糖的方法。该方法涉及的水提醇沉法提取得到粗多糖含量在39 75%。其药理实验的剂量也为40mg/kg/天(给药方式口服喂药)。杨国红，杨义芳，金隽迪(紫芝液体深层发酵的抗肿瘤活性部位研究.中草药，2008，39 (6)877-880)对紫芝液体深层发酵的抗肿瘤活性多糖进行了研究，从紫芝菌丝体中提取得到胞内多糖，其药理实验的剂量也为40mg/kg/天(给药方式口服喂药)。然而，以上专利申请和文章均未涉及多糖分子量、纯度及结构解析方面的研究。鉴于现有技术的状况，需要寻找多糖含量高、具有明显的抗肿瘤活性且给药剂量比常规方法提取得到的粗多糖的更低的紫芝菌丝体抗肿瘤多糖组分。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种多糖含量高、抗肿瘤活性更明显且给药剂量更低的紫芝菌丝体抗肿瘤多糖组分。如本专利技术所使用，“液体深层发酵”是发酵工业上常用的一种发酵方法，它的培养基是液态的。如本专利技术所使用，“菌丝体”是菌丝集合在一起构成一定的宏观结构。如本专利技术所使用，“均一多糖”是单糖通过聚合而成的多糖，聚合的糖有特定的结构单元。均一多糖可分为相同单糖形成的聚糖和不同单糖形成的杂多糖。本专利技术的第一个目的在于提供一种紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖，将其命名为GS-B-W-1，其特征在于，所述均一多糖的总糖含量为大于95%，优选为大于98. 5% ;且所述均一多糖GS-B-W-I的分子量为3000-10000道尔顿，优选为7762. 23道尔顿。根据本专利技术的一个优选的实施方式，经TLC和HPLC分析可以得知，所述均一多糖GS-B-W-I中的多糖主要由半乳糖和葡萄糖组成，所述半乳糖、葡萄糖的摩尔比为I.8-2. 2 1，优选 I. 98 I。进一步,经高点酸氧化及Smith降解分析得知，所述均一多糖GS-B_W_1是具有分支的(I — 4) - α -葡萄糖和半乳糖的聚糖，其主链上联有I — 6连接的半乳糖，和少量未知单糖。 本专利技术的第二个目的在于提供一种紫芝液体深层发酵菌丝体提取物，其包含以上所述的均一多糖，所述均一多糖的总糖含量为大于95%，优选为98. 5且所述均一多糖的分子量为3000-10000道尔顿，优选为7762. 23道尔顿。本专利技术结合膜技术和柱层析将不同分子量多糖分离，从而得到紫芝液体深层发酵菌丝体抗肿瘤均一多糖GS-B-W-I，该均一多糖GS-B-W-I在降低给药剂量、并且不增加毒性的前提下能达到与传统方法得到的紫芝液体深层发酵菌丝体多糖相当的药效。超滤技术是指常温下以一定压力和流量，利用不对称微孔结构和半透膜分离介质、以错流方式进行过滤，使溶剂及小分子物质通过，高分子物质被滤膜阻留，从而达到分离过程无相变、分离效率高、无需添加化学试剂无污染、无需加热、能耗低、条件温和不破坏成分、操作方便、流程短的特点。利用膜技术能将不同分子量的样品分割开。柱层析能按照不同的原理将复杂的混合物分离纯化，已得到单一组分为目的。而分离纯化的关键在于所选的填料，根据本专利技术的一个优选的实施方式，本专利技术所选择的两个填料分别是阴离子交换树脂和葡聚糖凝胶，前者是根据被分离组分离子交换能力的差别而实现分离，后者根据被分离组分分子的线团尺寸而进行分离。本专利技术的第三个目的在于提供上述紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖GS-B-W-I的制备方法，其特征在于，包括如下步骤紫芝液体深层发酵菌丝体经水提醇沉得到粗多糖，粗多糖经超滤、浓缩和柱层析，得到紫芝液体深层菌丝体均一多糖GS-B-W-I。上述制备方法简单易行、生产周期短、成本较低廉。根据本专利技术的一个优选的实施方式，超滤步骤通过超滤膜进行。选择截留分子量为1-5万的超滤膜。更优选地，所述超滤膜的截留分子量为3万。根据本专利技术的一个优选的实施方式，所述超滤膜可由聚酰胺聚醚砜膜或醋酸纤维素制成。根据本专利技术的一个优选的实施方式，浓缩步骤通过纳滤膜进行。优选由聚酰胺复合材料构成的纳滤膜。优选截留分子量为150-300的纳滤膜。根据本专利技术的一个优选的实施方式，柱层析步骤通过加负压进行。采取的仪器设备为螺动泵，自动收集仪。根据本专利技术的一个优选的实施方式，本专利技术所选择的两个填料分别是阴离子交换树脂和葡聚糖凝胶。根据本专利技术的一个特别优选的实施方式，柱层析选择的填料阴离子交换树脂为DEAE-cellulose 52。根据本专利技术的一个特别优选的实施方式，柱层析选择的填料葡聚糖凝胶的型号为Sephadex_50o本专利技术制备均一多糖GS-B-W-I的具体步骤如下紫芝菌丝体(本专利技术所述“紫芝菌丝体”根据中国专利200710045369. 4“一种紫芝发酵方法及制得的紫芝菌丝体”中公开的方法所得)加水提取，提取液减压浓缩后，醇沉(通常使用乙醇)，沉淀部分干燥至恒重后，再溶解于水，过滤，用一定分子量的超滤膜超滤，再用一定分子量的纳滤膜分别浓缩得到截留液和透过液，将上述透过液冷冻干燥，得到分子量小于3万的紫芝菌丝体多糖组分GS-B ；再经过阴离子交换树脂，葡聚糖凝胶柱得到紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖GS-B-W-I。本专利技术利用膜技术和柱层析将紫芝液体深层发酵菌丝体粗多糖纯化成均一多糖，药理实验表明纯化后均一多糖GS-B-W-I有明显的抗肿瘤作用的活性。 本专利技术方法得到的紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖GS-B-W-I含量为大于95%，优选为98.5% (苯酚-硫酸法检测)，其分子量为7762. 23Da。将该均一多糖部位进行药理实验，GS-B-W-I在低浓度下即有显著的促进的T淋巴细胞增殖活性，而对LPS诱导小鼠脾脏B淋巴细胞增殖反应中，GS-B-W-I呈一定的量效关系，且未见对给药动物的毒性反应。因此，本专利技术的第三个目的在于提供上述紫芝液体深层发酵菌丝体均本文档来自技高网...
【技术保护点】
紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖，其特征在于，所述均一多糖的总糖含量为大于95％，优选为大于98.5％；且所述均一多糖的分子量为3000？10000道尔顿，优选7762.23道尔顿。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨义芳，牛莉鑫，金隽迪，
申请(专利权)人：上海医药工业研究院，
类型：发明
国别省市：
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