一种从鸭胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法技术

本发明专利技术提供了一种从鸭胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法，具体是以溶解萃取鸭胆膏粗品后进行乙酸乙酯萃取、超滤除杂。本发明专利技术的方法具有以下优点：1）扩大鹅去氧胆酸的原料来源，提供了一种从鸭胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法；2）利用传统方法从鸭胆汁中提取出的鹅去氧胆酸含量很低，只有60%左右，利用本发明专利技术的方法得到的鹅去氧胆酸HPLC含量达96%以上，提高了鹅去氧胆酸的提取效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生化分离提纯，特别是涉及。
技术介绍
鶴去氧胆酸(3α，7 α - 二轻基 _5 β -胆烧酸，Chenodeoxycholie Acid,简称 CDCA)具有纠正胆固醇饱和胆汁的作用。1972年由英国正式开辟了溶解胆固醇类结石的治疗，鹅去氧胆酸作为第一个纠正饱和胆汁和溶解胆石的药物被应用。现在已知在很多动物和人的胆汁、肝、肾等组织中都含有鹅去氧胆酸。鹅去氧胆酸还可作为合成熊去氧胆酸(3 α，7 β - 二羟基_5 β -胆烷酸)和其他甾体化合物的中间体。熊去氧胆酸能促进胆汁固体成分的分泌，是一种强有力的利胆药物，用 于治疗各种胆疾及消化道疾病，研究发现熊去氧胆酸能溶解X射线可透射的胆石，而且毒性小，用量少，市场前景广阔。鹅去氧胆酸主要动物胆汁中提取，目前大多数厂家都是从鸡胆汁中和猪胆汁中提取，还缺少利用鸭胆汁中鹅去氧胆酸的工艺方法，而我国鸭养殖量巨大，可作为鹅去氧胆酸的原料的新的来源。鸡胆汁中鹅去氧胆酸约为80%，含量高，提取简单，利用传统的溶媒提取法即可获得较高纯度(96%以上)的鹅去氧胆酸，而鸭胆汁中鹅去氧胆酸含量大约为4(Γ50%，传统的溶媒提取法不能得到较高纯度的鹅去氧胆酸，需要针对其特点开发新的提纯方法。
技术实现思路
为扩大鹅去氧胆酸的原料来源，提高家禽胆汁资源的利用效率，本专利技术旨在提供。本专利技术提供，具体步骤如下I)溶解萃取在鸭胆膏粗品中加入萃取剂，具体为鸭胆膏粗品5倍重量的氯仿、5 20倍重量的甲醇、5 10倍重量的水，加热回流f 2小时，冷却至2(T25°C，静置分层，得到氯仿相和甲醇/水相，蒸发回收甲醇，剩下的水相以质量百分含量17 20%的盐酸(用质量百分含量为38%的浓盐酸与水的体积比为1:1配得的盐酸)调pH至2，结晶，离心，得到鹅去氧胆酸A品；2)乙酸乙酯萃取将鹅去氧胆酸A品用5 10倍质量的氢氧化钠溶液溶解，溶液中氢氧化钠的质量百分含量为5 10%，冷却至2(T25°C，加入乙酸乙酯，加入量为每克鹅去氧胆酸A品加5 10ml，调pH至7. 2 . 6，分层得到乙酸乙酯相，向水层中继续加入乙酸乙酯，加入量为每克鹅去氧胆酸A品加5 10ml，调pH至6. 8 7. 2，分层得到乙酸乙酯相，合并两次乙酸乙酯相，加入鹅去氧胆酸A品5%重量的活性炭回流脱色f 2小时，过滤除去活性炭，蒸发回收乙酸乙酯，剩下即为鹅去氧胆酸B品；3)超滤除杂取鹅去氧胆酸B品溶解到1(Γ20倍重量的水中，以过截留分子量为3K-100K的超滤膜后，用质量百分含量17 20%的盐酸调节pH至2 3，过滤干燥得到白色的鹅去氧胆酸。其中，鸭胆膏粗品的制备方法为新鲜的鸭胆汁，按50g/L加入氢氧化钠，煮沸24小时进行皂化，以质量百分含量38%的浓盐酸调pH至2，结晶，得到膏状物，将膏状物用1(Γ20倍质量的乙醇溶解，加入膏状物重量10%的活性炭脱色2小时，过滤除去活性炭，蒸发回收乙醇，浓缩得到鸭胆膏粗品。其中，鸭胆膏粗品可用同质量钙盐法制备得到的鹅去氧胆酸粗品替代。钙盐法制备得到的鹅去氧胆酸粗品的方法为新鲜的鸭胆汁，按胆汁量50g/L加入氢氧化钠，煮沸24小时进行皂化，后加入胆汁重量5%的氯化钙，析出总胆酸钙盐沉淀，离心弃去滤液，总胆酸钙盐用40倍质量的水清洗，弃去不溶物，水溶液用用质量百分含量17 20%的盐酸调pH至2，析出鹅去氧胆酸粗品，过滤，干燥，得到鹅去氧胆酸粗品。其中，步骤I)所述的在鸭胆膏粗品中加入萃取剂，优选为鸭胆膏粗品5倍重量的氯仿、10倍重量的甲醇、5倍重量的水；所述的加热回流，优选为2小时。 其中，步骤2)所述的将鹅去氧胆酸A品用氢氧化钠溶液溶解，优选为加入鹅去氧胆酸A品5倍质量的氢氧化钠溶液，冷却至25 °C。其中，步骤2)先后两次加入乙酸乙酯的量分别为每克鹅去氧胆酸A品的加入IOml乙酸乙酯和每克鹅去氧胆酸A品的加入5ml乙酸乙酯。其中，步骤2)所述的调pH，优选用醋酸，先后两次分别调pH为7. 5和6. 8。其中，步骤2)所述的活性碳活性炭回流脱色，回流脱色时间优选I小时。其中，步骤3)所述的取鹅去氧胆酸B品溶解到水中，水量优选为鹅去氧胆酸B品重量的15倍。其中，步骤3)所述的超滤膜，优选截留分子量为IOK的超滤膜。本专利技术的药物组合物具有以下优点I)扩大鹅去氧胆酸的原料来源，提供了。2)利用传统方法从鸭胆汁中提取出的鹅去氧胆酸含量很低，只有60%左右，利用本专利技术的方法得到的鹅去氧胆酸HPLC含量达96%以上，提高了鹅去氧胆酸的提取效率。附图说明图I为鹅去氧胆酸标准品核磁共振氢谱图。图2为鹅去氧胆酸制备样品的核磁共振氢谱图。图3为鹅去氧胆酸标准品红外吸收图谱图。图4为鹅去氧胆酸制备样品的红外吸收图谱图。具体实施例方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例I从鸭胆汁制备鸭胆膏粗品取新鲜的鸭胆汁50kg (体积为50L)置于不锈钢反应釜内，按胆汁量50g/L加入氢氧化钠，即加入2. 5kg氢氧化钠，加热煮沸24小时进行皂化，以质量百分含量38%的浓盐酸调pH至2，结晶，得到褐色膏状物大约5kg，将膏状物用50kg的乙醇溶解，加入O. 5kg的活性炭回流脱色2小时，过滤除去活性炭，蒸发浓缩回收乙醇，浓缩得到鸭胆膏粗品5kg。实施例2钙盐法制备鹅去氧胆酸粗品新鲜的鸭胆汁IOOkg置于不锈钢反应釜内，按胆汁量50g/L加入氢氧化钠，即加入5kg氢氧化钠，加热煮沸24小时进行皂化，而后加入胆汁重量5%的氯化钙，即5kg的氯化钙，析出总胆酸钙盐沉淀，离心弃去滤液，得到总胆酸钙盐。总胆酸钙盐利用40kg的水清洗，弃去水不溶物，水溶液用17 20%的盐酸调pH至2，即析出鹅去氧胆酸粗品，过滤，干燥，得到鹅去氧胆酸粗品。 实施例3分离提纯鹅去氧胆酸I)溶解萃取称取实施例I中得到的鸭胆膏粗品100g，加入氯仿500g、甲醇500g、水500g，加热回流I小时，待其完全溶解后，冷却至25°C，静置分层，得到氯仿相和甲醇/水相，蒸发回收甲醇，剩下的水相以质量百分含量17 20%的盐酸调pH至2，结晶，离心，得到鹅 去氧胆酸A品；2)乙酸乙酯萃取将鹅去氧胆酸A品用5倍质量的5%氢氧化钠溶液溶解，冷却至20°C，加入乙酸乙酯，加入量为每克鹅去氧胆酸A品加5ml，调pH至7. 2，分层得到乙酸乙酯相，向水层中继续加入乙酸乙酯，加入量为每克鹅去氧胆酸A品加5ml，调pH至6. 8，分层得到乙酸乙酯相，合并两次乙酸乙酯相，加入鹅去氧胆酸A品5%重量的活性炭，回流脱色I小时，过滤除去活性炭，蒸发回收乙酸乙酯，得到鹅去氧胆酸B品；3)超滤除杂取鹅去氧胆酸B品溶解到15倍重量的水中，通过截留分子量为3K的超滤膜后，用质量百分含量17%的盐酸调节pH至3，过滤干燥得到白色的鹅去氧胆酸。上述方法得到的鹅去氧胆酸，经HPLC含量测定为96. 9%。绘制了本实施例所得鹅去氧胆酸的核磁共振氢谱(见图I、图2)，图I为鹅去氧胆酸标准品核磁共振氢谱，其中标准品由中国药品生物制品检定所提供，本实施例的鹅去氧胆酸的核磁共振氢谱见图2，由此可见，本实施例鹅去氧胆酸的核磁共振氢谱特征峰与鹅去氧胆酸标准品的特征峰基本相同，说明得到的物质即高含量的鹅去氧胆酸。还绘制了本实施例所得鹅去氧胆酸的红外吸收图谱(见图3、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从鸭胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法，具体步骤如下：1）溶解萃取：在鸭胆膏粗品中加入萃取剂，具体为鸭胆膏粗品5倍重量的氯仿、5~20倍重量的甲醇、5~10倍重量的水，加热回流1~2小时，冷却至20~25℃，静置分层，得到氯仿相和甲醇/水相，蒸发回收甲醇，剩下的水相以质量百分含量17~20%的盐酸调pH至2，结晶，离心，得到鹅去氧胆酸A品；2）乙酸乙酯萃取：将鹅去氧胆酸A品用5~10倍质量的氢氧化钠溶液溶解，溶液中氢氧化钠的质量百分含量为5~10%，冷却至20~25℃，加入乙酸乙酯，加入量为每克鹅去氧胆酸A品加5~10ml，调pH至7.2~7.6，分层得到乙酸乙酯相，向水层中继续加入乙酸乙酯，加入量为每克鹅去氧胆酸A品加5~10ml，调pH至6.8~7.2，分层得到乙酸乙酯相，合并两次乙酸乙酯相，加入鹅去氧胆酸A品5%重量的活性炭回流脱色1~2小时，过滤除去活性炭，蒸发回收乙酸乙酯，剩下即为鹅去氧胆酸B品；3）超滤除杂：取鹅去氧胆酸B品溶解到10~20倍重量的水中，以过截留分子量为3K？100K的超滤膜后，用质量百分含量17~20%的盐酸调节pH至2~3，过滤干燥得到白色的鹅去氧胆酸。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陆其华，周大海，
申请(专利权)人：苏州天绿生物制药有限公司，山东天绿制药有限公司，
类型：发明
国别省市：