一种乙酰化壳三糖的制备方法技术

本发明专利技术属于海洋化学工程技术，具体涉及一种N-乙酰化壳三糖和N，N’-二乙酰化壳三糖的制备及分离纯化方法。具体为，首先制备全脱乙酰化壳三糖，后将全脱乙酰化壳三糖溶于甲醇/水溶液中，加入一定量的乙酸酐室温下进行乙酰化修饰得到N-乙酰化壳三糖混合物，然后将混合物用离子交换色谱柱CM?Sephadex?C-25或CM?Sepharose?Fast?Flow以0-1M浓度的NaCl溶液在pH4-6，流速为2-5mLmin-1的条件下进行分离纯化，收集洗脱液，将洗脱组分分别经活性碳萃取脱盐后浓缩，即得到N-乙酰化壳三糖和N，N’-二乙酰化壳三糖。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于海洋化学工程技术，具体涉及ー种こ酰化壳三糖的制备方法。
技术介绍
壳寡糖，又称低聚葡萄糖胺、低聚氨基葡萄糖，是ー种由D-氨基葡萄糖和N-乙酰-D氨基葡萄糖通过β -1，4糖苷键连接而成线性寡糖。壳寡糖被发现具有多种生理活性，如抗肿瘤，抗菌，抗炎，抗氧化，调节血糖血脂，增强免疫力，活化肠道菌群等。目前，壳寡糖主要通过壳聚糖的酸解，氧化降解，或酶解三种技术得到。然而，这些技术制备的壳寡糖产物是ー个非常复杂的混合物，其中含有各个分子量和各种こ酰度的壳寡糖。而大部分壳寡糖的生物活性都是采用这些混合物进行实验，这很难知道具体是哪个或哪些壳寡糖分子在生物活性试验中起作用。因此，为了进ー步研究壳寡糖的生物活性，从壳寡糖混合物中分离得到带有准确脱こ酰度和窄聚合度的壳寡糖是十分必要的。 壳寡糖的生理活性受其聚合度和こ酰度的影响。已有报道部分こ酰化的壳寡糖比全脱こ酰化和全乙酰化的壳寡糖能够更好的诱导植物产生抗性反应。另外，壳寡糖的こ酰度决定了其单糖序列排布，影响其与蛋白相互作用的特异性。部分こ酰化单ー聚合度壳寡糖制备与分离对于研究壳寡糖的活性机制具有重要的意义。本专利技术以全脱こ酰化壳三糖为原料，研究了两种部分こ酰化壳三糖(N-こ酰化壳三糖和N，N’ - ニこ酰化壳三糖)的制备和分离方法，为更高聚合度部分こ酰化壳寡糖単体系列的制备提供了一个很好的途径，这对壳寡糖的进ー步活性筛选及活性机制的阐明具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种こ酰化壳三糖的制备。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为一种こ酰化壳三糖的制备方法，将全脱こ酰化壳三糖进行こ酰化后得到N-こ酰化壳三糖混合物，所得N-こ酰化壳三糖混合物溶解后用离子交換色谱柱以O-IM浓度的NaCl溶液，Z-SmLmirT1流速下进行分离纯化,收集0_15min, 16_35min的洗脱液,将洗脱组分分别经活性碳萃取脱盐后浓縮，即得到N，N’ - ニこ酰化壳三糖和N-こ酰化壳三糖。所述离子交换色谱柱为CM Sephadex C-25 (购自 GE Healthcare Bio-SciencesAB)或 CM Sepharose Fast Flow (购自 GE Healthcare Bio-Sciences AB)。所述N-こ酰壳三糖和N，N’ - ニこ酰壳三糖，其结构如下所示N-こ酰壳三糖权利要求1.一种こ酰化壳三糖的制备方法，其特征在于将全脱こ酰化壳三糖进行こ酰化后得到N-こ酰化壳三糖混合物，所得N-こ酰化壳三糖混合物溶解后用离子交換色谱柱以O-IM浓度的NaCl溶液，Z-SmLmirr1流速下进行分离纯化，收集0-15min，16-35min的洗脱液，将洗脱组分分别经活性碳萃取脱盐后浓縮，即得到N，N’ - ニこ酰化壳三糖和N-こ酰化壳三糖。2.按权利要求I所述的こ酰化壳三糖的制备方法，其特征在于所述离子交换色谱柱为 CM Sephadex C-25 或 CM Sepharose Fast Flow。3.按权利要求I所述的こ酰化壳三糖的制备方法，其特征在于所述N-こ酰壳三糖和N，N’ - ニこ酰壳三糖，其结构如下所示N-こ酰壳三糖4.按权利要求I所述的こ酰化壳三糖的制备方法，其特征在于所述将全脱こ酰化壳三糖进行こ酰化后得到N-こ酰化壳三糖混合物具体为将全脱こ酰化壳三糖在过量的甲醇/水(1:1)反应体系中，加入こ酸酐在室温下反应15-240min，反应后收集反应液冷冻干燥得到固体样品，待用；其中，壳三糖与こ酸酐的质量体积比为1:0. 2-1。5.按权利要求I或4所述的こ酰化壳三糖的制备方法，其特征在于将所述全脱こ酰化壳三糖于pH=3-6的酸性溶液中溶解，用孔径为O. 45 μ m的微孔滤膜过滤，待用。全文摘要本专利技术属于海洋化学工程技术，具体涉及一种N-乙酰化壳三糖和N，N’-二乙酰化壳三糖的制备及分离纯化方法。具体为，首先制备全脱乙酰化壳三糖，后将全脱乙酰化壳三糖溶于甲醇/水溶液中，加入一定量的乙酸酐室温下进行乙酰化修饰得到N-乙酰化壳三糖混合物，然后将混合物用离子交换色谱柱CM Sephadex C-25或CM Sepharose Fast Flow以0-1M浓度的NaCl溶液在pH4-6，流速为2-5mLmin-1的条件下进行分离纯化，收集洗脱液，将洗脱组分分别经活性碳萃取脱盐后浓缩，即得到N-乙酰化壳三糖和N，N’-二乙酰化壳三糖。文档编号C07H5/06GK102827212SQ20121025973公开日2012年12月19日 申请日期2012年7月25日 优先权日2012年7月25日专利技术者李鹏程, 李克成, 邢荣娥, 刘松, 于华华, 秦玉坤, 李荣峰 申请人:中国科学院海洋研究所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种乙酰化壳三糖的制备方法，其特征在于：将全脱乙酰化壳三糖进行乙酰化后得到N？乙酰化壳三糖混合物，所得N？乙酰化壳三糖混合物溶解后用离子交换色谱柱以0？1M浓度的NaCl溶液，2？5mLmin？1流速下进行分离纯化，收集0？15min，16？35min的洗脱液，将洗脱组分分别经活性碳萃取脱盐后浓缩，即得到N，N’？二乙酰化壳三糖和N？乙酰化壳三糖。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李鹏程，李克成，邢荣娥，刘松，于华华，秦玉坤，李荣峰，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：