一种快速逆转录microRNA文库的方法技术

技术编号:8076233 阅读:474 留言:0更新日期:2012-12-13 01:12
本发明专利技术公开了一种快速逆转录microRNA文库的方法。本发明专利技术方法是在逆转录时通过使用PolyA加尾酶,在所有miRNA的末端增加一段PolyA序列,同时将逆转录引物中与miRNA特异性结合的部分换成可以与PolyA序列相结合的PolyT序列,并将加PolyA尾和逆转录合为一步进行,使所有miRNA的逆转录可以使用相同的逆转录引物,从而一次性完成全部miRNA的逆转录。使用本发明专利技术方法可以极大的简化实验步骤,为实验带来方便,适于实验室推广应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学领域,具体涉及。
技术介绍
miRNA的逆转录一般是使用茎环结构和含有6个碱基的特异性序列设计合成特异性引物(如图I所示),但由于其碱基的特异性结合,故此方法每一次逆转录只能完成I种或几种末端碱基序列相同的miRNA的逆转录,当需要检测多个miRNA的表达情况是,这种方法就变得尤为繁杂,需要对每一种miRNA引物单独设计和逆转录。
技术实现思路
本专利技术的目的在于为了克服需要逆转录多个miRNA时增大的繁杂工作量,提供一种简单、快速逆转录microRNA文库的方法。本专利技术上述目的通过以下技术方案予以实现 在逆转录时通过使用Poly A加尾酶,在所有miRNA的末端增加一段Poly A序列,同时将逆转录引物中与miRNA特异性结合的部分换成可以与Poly A序列相结合的Poly T序列,并将加Poly A尾和逆转录合为一步进行,使所有miRNA的逆转录可以使用相同的逆转录引物,从而一次性完成全部miRNA的逆转录。与现有技术相比,本专利技术具有如下有益效果 本专利技术将加Poly A尾和逆转录合为一步进行,使所有miRNA的逆转录使用相同的逆转录引物,本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速逆转录microRNA文库的方法,其特征在于所述方法是在逆转录时通过使用Poly?A加尾酶,在所有miRNA的末端增加一段Poly?A序列,同时将逆转录引物中与miRNA特异性结合的部分换成与Poly?A序列相结合的Poly?T序列,并将加Poly?A尾和逆转录合为一步进行,使所有miRNA的逆转录使用相同的逆转录引物,从而一次性完成全部miRNA的逆转录。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:万峻杨旸张超于波关明张伟董小林
申请(专利权)人:深圳北京大学香港科技大学医学中心
类型:发明
国别省市:

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