本发明专利技术公开了一种制备抗肿瘤化合物Rasfonin的方法及其专用菌株。该菌株为矛束霉(Doratomyces?sp.)XZ059，其保藏编号为CGMCC?No.5526。本发明专利技术的菌株矛束霉(Doratomyces?sp.)XZ059具有产生抗肿瘤化合物Rasfonin的功能。本发明专利技术制备抗肿瘤化合物Rasfonin的方法，收率高(8.0g粗提物经过分离纯化而得到200mg纯化合物Rasfonin，其纯度为99％以上，收率为2.5％)，而且本发明专利技术方法操作简单、成本低廉、省时省力。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种制备抗肿瘤化合物Rasfonin的方法及其专用菌株。
技术介绍
恶性肿瘤又称为癌症，是威胁人类健康生存的重大恶性疾病。世界卫生组织在第18届国际抗癌联盟大会上的报告表明，今后20年新发肿瘤患者人数将由目前每年1000万增加到1500万，每年由恶性肿瘤而死亡的人数也将由600万增加至1000万，占世界死亡总数的12%。癌症正在成为新世纪人类的第一大杀手。经过各国科学家们40多年的努力，新的抗肿瘤药物不断出现，肿瘤的化学药物治疗出现飞速的发展，患者生命明显延长，生活质量得到明显改善，特别是对白血病、淋巴瘤等的治疗有了突破性进展。但对危害人类健康最严重的、占恶性肿瘤90%以上的恶性肿瘤 如宫颈癌、乳腺癌、肺癌、肝癌及胰腺癌等还缺乏有效治疗药物。此外，抗肿瘤药物的高昂价格、临床治疗中产生的耐药性及给患者带来的毒副作用等都表明，人类迫切需要研究与开发新型、高效的抗癌药物。2000年，由来自日本千叶大学和东京大学的研究者们分别从真菌Taleromycessp. 3656-A1 和真菌 Trichurus terrophilus的固体发酵提取物中分离到一个具有显著肿瘤和免疫抑制活性的化合物，命名为Rasfonin。据报道，Rasfonin对癌基因ras诱导的肿瘤细胞株有显著的抑制活性(IC5tl为0. 16 μ g/mL),并分别对刀豆蛋白A (Con A)和脂多糖(LPS)诱导的小鼠脾脏淋巴细胞增殖有显著的免疫抑制活性(IC5tl分别为 0. 7 和 0. 5 μ g/mL)，由此可见，化合物Rasfonin具有潜在抗癌作用，但是由于从自然资源中获得足够量的Rasfonin十分困难，所以，在很长一段时间内一直没有人能成功研究和开发该化合物。直到2005和2006年，Rasfonin才分别被日本的Ishibashi研究组和美国的Boeckman研究组全合成，但合成方法非常复杂，包含了复杂的有机反应，反应步骤分别是23步和16步，产量非常微小，无法进一步进行抗癌机理的深入研究。因此，开发能够大量制备抗肿瘤化合物Rasfonin的方法，是研究其抗癌机理和评价其能否成为新抗癌药物的首要条件。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一株矛束霉(Doratomyces sp.)。本专利技术所提供的真菌为矛束霉(Doratomyces sp. )XZ059，其保藏编号为CGMCCNo.5526。该菌株已于2011年12月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCCJia :北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No. 5526，分类命名为矛束霉(Doratomyces sp.)，菌株名称为 XZ059。本专利技术的另一个目的是提供一种制备抗肿瘤化合物Rasfonin的方法。本专利技术所提供的制备Rasfonin的方法，包括如下步骤a)将Doratomyces sp.进行固体(稻米)发酵，得到发酵培养物；b)向所述发酵培养产物中加入乙酸乙酯进行提取，得到提取液，将所述提取液减压蒸馏，得到粗提物；c)将所述粗提物进行减压硅胶柱层析分离而得到活性组分溶液，将所述活性组分溶液用高效液相色谱分离得到化合物Rasfonin。所述Rasfonin的化学式如式I所示权利要求1.矛束霉(Doratomycessp.) XZ059，其保藏编号为 CGMCC No. 5526。2.一种制备抗肿瘤化合物Rasfonin的方法,包括如下步骤 a)将Doratomycessp.进行固体(稻米)发酵，得到发酵培养物； b)向所述发酵培养产物中加入乙酸乙酯进行提取，得到提取液，将所述提取液减压蒸馏，得到粗提物； c)将所述粗提物进行减压硅胶柱层析分离而得到活性组分溶液，将所述活性组分溶液用高效液相色谱分离得到化合物Rasfonin。所述Rasfonin的化学式如式I所示3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述发酵中使用的培养基是稻米； 所述发酵的条件为温度为25°C，静置培养，时间为40d。4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于所述方法中，在所述发酵后，包括如下提取步骤用不溶于水的且在25°C是液态的有机溶剂对所述含有Rasfonin的发酵培养产物进行浸泡提取三次，得到提取液，将所述提取液减压蒸馏，得到粗提物8. Og ； 所述不溶于水的且在25°C是液态的有机溶剂为乙酸乙酯。5.根据权利要求2、3或4所述的方法，其特征在于所述方法中，在所述得到粗提物后，将粗提物用正己烷-二氯甲烷-甲醇体系进行减压硅胶柱层析，所用流动相为正己烷二氯甲烷(v/v) = 100 0,99 1,97 3,95 5,92 8,90 10,85 15,80 20，75 25,70 30,60 40,50 50,40 60,30 70,20 80，10 90,0 100 ;二氯甲烷甲醇(v/v) = 200 1,100 1,100 I. 5，100 2，100 2. 5，100 3，100 4，100 5,0 100;共计26个梯度，每个梯度的洗脱体积均为400mL，将每个梯度的洗脱液减压蒸馏，按照极性由小到大的顺序将粗提物分成26个组分，在活性跟踪指导下，发现在二氯甲烷甲醇=100 2. 5 (v/v)作为流动相洗脱得到的组分有抑制活性，收集活性组分(400mg)； 所述用减压硅胶柱分离纯化中，所用的填料为薄层层析硅胶H ; 所述减压娃胶柱的大小为高40cm和直径6cm ； 所述减压硅胶柱中装125g硅胶。6.根据权利要求2-5中任一所述的方法，其特征在于所述方法中，在所述用减压硅胶柱分离纯化后，包括高效液相色谱分离的步骤；所述高效液相色谱分离条件是采用Agilent 1260型半制备高压液相色谱仪，Agilent C18反相半制备色谱柱(5 y m、9. 4x250mm)，流速2. OmL/min，用甲醇和水作为流动相，以甲醇与水的体积比为75 25的混合溶液进行等度洗脱，洗脱时间为25min，收集保留时间为17. 45min的洗脱峰，得到抗肿瘤化合物 Rasfonin 共 200mg。7.根据权利要求2-6中任一所述的方法，其特征在于所述用减压硅胶柱分离纯化中，是将所述含有Rasfonin的发酵培养产物的乙酸乙酯粗提物进行分离纯化； 所述高效液相色谱分离中，是将所述用二氯甲烷和甲醇的体积比为100 2. 5的混合溶液洗脱下来的溶液浓缩组分进行分离。全文摘要本专利技术公开了一种制备抗肿瘤化合物Rasfonin的方法及其专用菌株。该菌株为矛束霉(Doratomyces sp.)XZ059，其保藏编号为CGMCC No.5526。本专利技术的菌株矛束霉(Doratomyces sp.)XZ059具有产生抗肿瘤化合物Rasfonin的功能。本专利技术制备抗肿瘤化合物Rasfonin的方法，收率高(8.0g粗提物经过分离纯化而得到200mg纯化合物Rasfonin，其纯度为99％以上，收率为2.5％)，而且本专利技术方法操作简单、成本低廉、省时省力。文档编号C12P17/06GK102807955SQ20111045315公本文档来自技高网...
【技术保护点】
矛束霉(Doratomyces？sp.)XZ059，其保藏编号为CGMCC？No.5526。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：车永胜，李彦，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所，
类型：发明
国别省市：
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