本发明专利技术涉及TEM8肽和包含TEM8肽的疫苗，根据本发明专利技术，包含SEQ?ID?NO:3、4、9、23、25、30、60、63或68的氨基酸序列的肽被证明具有细胞毒T淋巴细胞(CTL)诱导能力。因此，本发明专利技术提供了具有选自下组的氨基酸序列的肽：SEQ?ID?NO:3、4、9、23、25、30、60、63和68。该肽可以包含一个、两个或数个氨基酸替换或添加，只要其保持CTL诱导能力即可。而且，本发明专利技术提供了用于治疗和/或预防肿瘤和/或防止其手术后复发的药物制剂，该制剂包括这些肽中的任一种。本发明专利技术的药物制剂包括疫苗。
【技术实现步骤摘要】
·本专利技术涉及生物科学领域，更具体地说是癌症治疗领域。特别地，本专利技术涉及用作癌症疫苗非常有效的TEM8肽和用于治疗和预防肿瘤的药物。
技术介绍
人们已经证明⑶8阳性细胞毒T淋巴细胞(CTL)可识别主要组织相容性复合体(MHC) I类分子上肿瘤相关抗原(TAA)来源的表位肽，然后杀死肿瘤细胞。自从黑素瘤抗原(MAGE)家族作为第一例TAA被发现以来，人们已经通过免疫学方法发现了许多其它的TAA(Boon T, Int J Cancer 1993 May 8，54(2):177-80;Boon T&van der Bruggen P,J ExpMed 1996 Mar 1，183 (3) : 725-9)，而且当前一些TAA正处于作为免疫治疗靶点的临床开发过程中。可诱导强烈并且特异的抗肿瘤免疫应答的新TAA的鉴定，为进一步开发肽疫苗接种策略在各种类型癌症中的临床应用提供了保证(Harris CC, J Natl Cancer Inst1996, 88:1442-5;Butterfield LH et al.，Cancer Res 1999，59:3134-42;VissersJLM et al., Cancer Res 1999，59:5554-9;Van der Burg SH et al. ,J Immunol1996，156:3308-14;Tanaka F et al.，Cancer Res 1997，57:4465-8;Fujie T et al.，IntJ Cancer 1999，80:169-72;Kikuchi M et al.，Int J Cancer 1999，81:459-66;Oiso M etal. , Int J Cancer 1999, 81:387-94) 0迄今为止，已经报道了数种使用这些肿瘤相关抗原衍生肽的临床测定法。不幸的是，目前在这些癌症疫苗试验中仅观察到较低的客观应答率(Belli F et al. , J Clin Oncol 20020ct 15，20(20):4169-80;Coulie PG et al. , TmmunoIRev 2002 Oct, 188:33-42;Rosenberg SA et al.，Nat Med 2004 Sep, 10(9):909-15)。造成这种效力相对较低的一个可能的原因是肿瘤细胞上的人类白细胞抗原(HLA)I类分子的表达缺失或下调。这种缺失或下调在实体肿瘤中经常出现，并且严重阻碍T细胞介导的抗肿瘤应答(Cormier JN et al., Int J Cancer 1998 Feb 9，75 (4) : 517-24; HicklinDJ et al. , Mol Med Today 1999 Apr, 5(4):178-86;Paschen A et al. , Int J Cancer 2003Mar 1，103(6) :759-67)。即使靶定肿瘤相关抗原的癌症疫苗诱导出强力的细胞毒T淋巴细胞(CTL)，当这些CTL不表达足够量的HLA I类分子时，它们也不能识别靶细胞。肿瘤血管发生是肿瘤进程中涉及的关键因素。已经证明，由于内皮细胞上的I类HLA分子不被下调，根据基于内皮细胞的方法，靶定血管内皮生长因子受体(VEGFR)I和2，可以开发出针对肿瘤血管发生的有效疫苗(Wada S et al. , Cancer Res 2005 Jun1,65(11):4939-46;Ishizaki H et al. , Clin Cancer Res 2006 Oct 1，12 (19):5841-9)。而且，由于这些治疗靶点是不依赖肿瘤的，所以耗竭肿瘤微环境中的血管内皮细胞对各种恶性疾病可能有效果。进一步,血流中的淋巴细胞容易接触到肿瘤内皮细胞,并且CTL无需渗透任何其他组织类型即能够直接杀伤内皮细胞。此外,甚至肿瘤血管网络内少量内皮细胞的减退也可以导致脉管完整性的破坏，从而导致大量肿瘤细胞被抑制(Folkman J, NatMed 1995 Jan，l(l):27-31)。因此，肿瘤内皮细胞是癌症免疫治疗的良好靶点。为了以特异而有效的CTL应答抑制肿瘤血管发生，需要在与血管发生相关的分子中选择合适的靶点。人们已发现肿瘤内皮标记(TEM)，包括TEM8，在肿瘤相关内皮中相比在正常组织中被特异提高(St Croix B et al. , Science 2000 Aug 18，289 (5482) : 1197-202)。TEM8转录本在肺和脑肿瘤和肝转移中表达。靶定TEM8的疗法在很多类型的肿瘤类型中可以应用。例如，WO 2005/048943提出了包含编码TEM8胞外域的载体的疫苗和编码肿瘤相关抗原的疫苗的共同使用。然而，该文献没有提供任何证据可以证明TEM8表达载体的引入导致了针对肿瘤相关内皮的CTL的诱导，也没有提供任何有关TEM8蛋白内表位的位置的信息。·专利技术的公开
技术实现思路
靶定肿瘤微环境的癌症治疗，特别是那些靶向于肿瘤血管发生的癌症治疗而言，提高临床效力具有重要的意义。本专利技术聚焦于将肿瘤血管作为抗肿瘤免疫治疗的靶标。特别地，本专利技术靶定肿瘤内皮标志8 (TEM8) (GenBank登录号为NP_115584(SEQ ID N0:76)，由GenBank登录号为NM_032208 (SEQ ID NO: 75)的基因编码)，因为TEM8被认为在多种肿瘤类型的血管内表达。本专利技术提供包含表位肽的TEM8基因产物，所述表位肽引发特异针对应答分子的CTL。用来源于TEM8的能结合HLA-A*2402或HLA_A*0201的候选肽刺激获自健康供体的外周血单个核细胞(PBMC)。本专利技术进一步提供了已经建立的CTL，它们特异识别用相应候选肽冲击(pulse)过的HLA-A24或HLA-A02阳性靶细胞；还提供了 HLA-A24或HLA-A02限制性表位肽，这些表位肽能够诱发针对在肿瘤血管上表达的TEM8的强力和特异的免疫应答。这些结果证明，TEM8具有强烈的免疫原性，并且其表位是用于肿瘤免疫治疗的有效的靶标。因此，本专利技术提供了一种分离的具有细胞毒T细胞诱导能力的九肽或十肽，其中所述九肽或十肽包括选自SEQ ID NO: 76所示氨基酸序列的氨基酸序列。具体地，本专利技术提供了包含选自SEQ ID N0:3、4、9、23、25、30、60、63和68的氨基酸序列，并且具有CTL诱导能力的肽。本专利技术的肽涵盖有一个、两个或多个氨基酸被替换或添加的肽，只要经过修饰的肽依然保持原始的CTL诱导能力即可。当施加给受试者时，本专利技术的肽被呈递在抗原呈递细胞的表面上，然后诱导靶向于各个肽的CTL。因此，根据本专利技术的一个方面，还提供了可呈递任何本专利技术肽的抗原呈递细胞和外来体，以及用于诱导抗原呈递细胞的方法。通过施用本专利技术的TEM8多肽或编码这些多肽的多核苷酸、以及呈递TEM8多肽的外来体和抗原呈递细胞，可诱发抗肿瘤免疫应答。因此，本专利技术提供包含所述多肽或编码它们的多核苷酸以及外来体和抗原呈递细胞作为有效成分的药物制剂。本专利技术的药物制剂可用作疫苗。而且，本专利技术提供了用于治疗和/或预防(例如阻止)癌症(肿瘤)，和/或预防其手术后复发的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的具有细胞毒T细胞诱导能力的九肽或十肽，其中所述九肽或十肽包含选自SEQ？ID？NO:76的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：角田卓也，大泽龙司，
申请(专利权)人：肿瘤疗法科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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