正交Q-核糖体制造技术

本发明专利技术涉及包含位于A1196的突变的16S?rRNA，还涉及进一步包含位于C1195和/或A1197的突变的16S?rRNA，还涉及包含(i)C1195A和A1196G、或(ii)C1195T、A1196G和A1197G或(iii)A1196G和A1197G的16S?rRNA。本发明专利技术还涉及包含这类16S?rRNA的核糖体及其用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于四联密码子的翻译的核糖体。
技术介绍
由于64个三联体密码子各自都被用来编码天然氨基酸或多肽的终止，因此需要新的空白密码子用于细胞遗传密码的扩展。原则上，四联体密码子可能提供256个空白密码子。在化学计量学上经氨酰化扩展的反密码子tRNA已经通过输入先前氨酰化的tRNAa15在体外系统和有限的体内系统中用于以非常低的效率应答4碱基密码子而引入非天然氨基酸n_13。这是本领域的一个问题。 在一种情况下，4碱基的抑制子和琥珀密码子已经以非常规的方法低效率地用于 编码两种普通的氨基酸16。事实上，天然核糖体解码四联体密码子的低效率已严重限制了它们用于遗传密码的扩展，这是本领域的一个问题。本专利技术旨在克服与现有技术有关的问题。
技术实现思路
本专利技术的专利技术人突变了某些核糖体组分用以产生具有翻译四联体密码子的新技能的核糖体。突变集中于16S rRNA。本专利技术产生的核糖体有时也被称为四联体核糖体或Q-核糖体(RiboQ)。一方面，本专利技术涉及包含位于A1196的突变的16S rRNA。一方面，本专利技术涉及包含位于A1196的突变和选自C1195T、A1197G、C1195A的至少一种进一步的突变的16S rRNA。另一方面，本专利技术涉及进一步包含位于Cl 195和/或Al 197的突变的上文所述的16S rRNA。另一方面，本专利技术涉及上文所述的16S rRNA，其包含(i)C1195A 和 A1196G ;或者(ii)C1195T、A1196G 和 A1197G ;或者(iii)A1196G 和 A1197G。另一方面，本专利技术涉及能够翻译四联体密码子的核糖体，所述核糖体包含如上所述的 16S rRNA。另一方面，本专利技术涉及如上述的16S rRNA在翻译包含至少一个四联体密码子的mRNA中的用途。具体实施例方式一方面，本专利技术涉及包含位于A1196的突变的16S rRNA。合适地，所述突变是A1196G。另一方面，本专利技术涉及进一步包含位于Cl 195和/或Al 197的突变的如上所述的16S rRNA。另一方面，本专利技术涉及如上所述的16S rRNA，其包含(1)(1195六和六11966;或者 (2) Cl 195T、Al 196G 和 Al 197G ;或者(3)A1196G 和 A1197G。 另一方面，本专利技术涉及如上所述的16S rRNA，其进一步包含A531G和U534A。另一方面，本专利技术涉及能翻译四联体密码子的核糖体，所述核糖体包含如上所述的 16S rRNA。另一方面，本专利技术涉及如上述的16S rRNA在翻译包含至少一个四联体密码子的mRNA中的用途。合适地，本专利技术包含位于A1196的突变的16S rRNA包括A1196G。该特定突变是本文例示的各优选16S rRNA，例如Q1、Q2、Q3和Q4(均具有A1196G，即在1196位为G)所共有的。合适地,本专利技术的16S rRNA还包含位于Al 197的突变。合适地,本专利技术包含位于A1197突变的16S rRNA包括A1197G。该特定突变是本文例示的75%的优选16S rRNA，例如Q1、Q2和Q3(均具有A1197G，即在1197位为G)所共有的。合适地，本专利技术的16S rRNA包含位于A1196的突变和位于A1197的突变。最合适地，本专利技术的16S rRNA包含A1196G和A1197G。Ql、Q2和Q3均包含该突变组合。合适地，本专利技术的16S rRNA可以包含位于C1195的突变。该突变可以是C1195T或者C1195A。合适地，本专利技术的包含Cl 195突变的16S rRNA还包含Al 196突变，例如Al 196G。合适地，当本专利技术的16S rRNA包含A1197G时，其还包含C1195T。合适地，当本专利技术的16SrRNA包含A1196G和A1197G时，其还包含C1195T。合适地，当本专利技术的16S rRNA包含A1196G并且A1197为野生型(即在1197为A)时，其还包含C1195A。可以存在或者可以不存在更进一步的突变。Ribo-X 和 Ribo-Q本文的Ribo-Q 16S rRNA序列已经由Ribo-X作为起始16S rRNA序列而制备。Ribo-X是本领域技术人员所熟知的已公布的16S rRNA序列。更具体地，Ribo-X指的是与野生型相比具有两个取代，即A531G和U534A的16SrRNA序列。所以，合适地，本文中所描述的每个Ribo-Q 16S rRNA序列除了具有本文讨论的每个更进一步的突变或取代之外,还具有A531G和U534A。应该认为，除非文中指明，否则本专利技术的16rRNA除了具有所讨论的其他任何突变外还均具有A531G和U534A。因此，合适地，本专利技术的16SrRNA与野生型相比均包含至少3个突变，即A1196、A531G和U534A，最合适的是A1196G、A531G和U534A。在需要任何更多细节的情况下，Ribo-X在PCT/GB2007/004562 (W02008/065398公开)中有深入讨论。该文献(尤其是Ribo-X 16S rRNA序列的细节)通过引用专门并入本文，其中Ribo-X 16SrRNA是“背景”或亲本序列，本专利技术的Ribo-Q 16S rRNA由此衍生和/或产生。合适地，本专利技术的16S rRNA 包含 A1196G 和 A1197G(Ribo-Ql、Ribo-Q2、Ribo-Q3)。合适地，本专利技术的16S rRNA 包含 C1195T 和 A1196G 和 A1197G(Ribo-Q3)。合适地，本专利技术的16S rRNA 包含 C1195T 和 A1196G(Ribo-Q4)。在一个实施方式中，本专利技术的16S rRNA由野生型16S rRNA序列与A531G、U534A、A1196G 以及 A1197G(Ribo-Ql)所组成。在一个实施方式中，本专利技术的16S rRNA由野生型16S rRNA序列与A531G、U534A、A1196G、A1197G以及多达八个进一步的突变/取代组成(Ribo_Q2)。在一个实施方式中，本专利技术的16S rRNA由野生型16S rRNA序列与A531G、U534A、C1195T、A1196G 以及 A1197G(Ribo_Q3)组成。在一个实施方式中，本专利技术的16S rRNA由野生型16S rRNA序列与A531G、U534A、C1195T 以及 A1196G(Ribo-Q4)组成。 本专利技术涉及通过四联体解码核糖体的演化来编码多种非天然氨基酸。定义本文所使用的术语“正交(orthogonal) ”是指与其它核酸合作的能力不同于天然的内源性核酸的核酸，例如rRNA或mRNA。正交mRNA、rRNA和tRNA以高效合作的匹配组(关连组)提供。例如，当正交rRNA作为核糖体的一部分时，它将高效地翻译匹配的关连正交mRNA，而非天然的内源性mRNA。为了简化，包含正交rRNA的核糖体在本文中被称为“正交核糖体”，并且正交核糖体将高效翻译关连的正交mRNA。正交密码子或正交mRNA密码子是存在于正交mRNA中的密码子，它仅被关连的正交核糖体翻译，或者与天然的内源性核糖体相比被关连的正交核糖体更有效地翻译，或者被关连的正交核糖体翻译不同于天然的同源性核糖本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.12.21 US 61/288,421;2009.12.21 GB 0922351.21.包含位于Al196的突变的16S rRNA。2.根据权利要求I所述的16SrRNA，其中，所述突变是A1196G。·3.根据权利要求I或2所述的16SrRNA，其进一步包含位于Cl 195和/或Al 197的突 变。4.根据前述任一项权利要求所述的16SrRNA，其包含 (i)C1195A和 A11...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾森·钦，王凯航，海因茨·诺伊曼，
申请(专利权)人：医药研究委员会，
类型：发明
国别省市：