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用23S核糖体基因探针阵列检测水生动物病原菌的方法技术

技术编号:2584927 阅读:299 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了一种用23S核糖体基因探针阵列检验多种能够导致水生动物传染病病原菌的方法,其技术原理为分子杂交-酶联免疫显色技术,属于细菌检测技术,其技术方案是用生物信息学方法设计特异性探针,包括设计筛选的34条用作探针的寡核苷酸序列以及与之配套的PCR和杂交反应条件。通过PCR扩增并用地高辛标记细菌23srRNA基因内部分序列,并用该PCR产物和一组特异性的寡核苷酸探针杂交,经酶联免疫显色显色后,可以从待测样品中,精确检测出是否存在水生动物传染病病原菌。该方法的优点是,省去了重复的细菌培养筛选环节,节约时间;分子杂交鉴定方法不受培养条件和细菌生理状态的影响,较生理生化鉴定方法更为准确。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种细菌检验技术,具体地讲是运用核酸分子杂交反应检测致病细菌,特别是水生动物病原菌(包括杀鲑气单胞菌、嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌、鮰鱼爱德华氏菌、杀鱼肠球菌、链球菌、嗜冷屈挠杆菌、柱状屈挠杆菌、多杀巴斯德氏菌、杀鱼巴斯德氏菌、恶臭假单胞菌、荧光假单胞菌、丁香组假单胞菌、霍乱弧菌、拟态弧菌、哈维弧菌、创伤弧菌、副溶血弧菌、河流弧菌、弗氏弧菌、溶藻弧菌等23种细菌)的技术。
技术介绍
目前,水生动物病原微生物检测方法基本上依靠生化鉴定和培养鉴定。这些鉴定费时费力,并且又是在种水平的鉴定上结果并不可靠。随着分子生物学鉴定方法的发展,基于这些方法的细菌分类正在逐渐被修正。这一状况从侧面说明了建立分子生物学鉴定方法的必要性。相关研究在国际上已广泛开展,国内这方面研究也在逐渐兴起。在水生动物病原微生物检测方面,国内基本上采用的是生化方法,鲜有芯片或微阵列应用的文献报道,国际上虽有水生动物致病微生物检验芯片的研究报道,但其检测的范围并不全面。从技术层面讲,目前细菌分子检测运用最多DNA靶点是16S rRNA基因。但在许多情况下,相近种之间在16S rRNA本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用23S核糖体基因探针阵列检测水生动物病原菌的方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:(1)设计特异性寡核苷酸探针,用于寡核苷酸微阵列检测检测,所设计的特异性寡核苷酸探针序列如下:序列一:(气单胞菌属通用探针AFp1)CT CAGTAGCGGCGAGCGAACG序列二:(杀鲑气单胞菌探针Asal1)TATCGTTACATGAATACATAGTGTAACGAG序列三:(嗜水气单胞菌探针Ahyr1)TAAGTGAATACATAGCTTAACGAGG CGA序列四:(豚鼠气单胞菌探针Acav1)TTACTGAATACATAGGTAATAG...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:黄熙泰侯艳梅刘寅张立怀郑泽军高旗利周浩董志珍李永君王玉玲魏晓娜霍蕾
申请(专利权)人:南开大学中华人民共和国天津出入境检验检疫局
类型:发明
国别省市:12[中国|天津]

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