利用核糖体操纵子间区探针检测水生动物病原菌的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用核糖体操纵子间区探针组成寡核苷酸微阵列检验多种能够导致水生动物传染病病原菌的方法，其技术原理为分子杂交－酶联免疫显色技术，属于细菌检测技术，其技术方案是用生物信息学方法设计特异性探针，包括设计筛选的３４条用作探针的寡核苷酸序列以及与之配套的ＰＣＲ和杂交反应条件。通过ＰＣＲ扩增并用地高辛标记细菌１６ｓ－２３ｓｒＲＮＡ基因间区序列，并用该ＰＣＲ产物和一组特异性的寡核苷酸探针杂交，经酶联免疫显色显色后，可以从待测样品中，精确检测出是否存在水生动物传染病病原菌。该方法的优点是，省去了重复的细菌培养筛选环节，节约时间；分子杂交鉴定方法不受培养条件和细菌生理状态的影响，较生理生化鉴定方法更为准确。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种利用核糖体操纵子间区探针检测水生动物病原菌的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（１）设计特异性寡核苷酸探针，用于寡核苷酸微阵列检测检测，所设计的特异性寡核苷酸探针序列如下：序列一：星状诺卡氏菌探针Ｎｓｅｒ２ＣＧＡ ＡＧＡＡＧＴＣＴＡＡＴＴＴＣＧＧＴＡ序列二：星状诺卡氏菌探针ＮＳＥＲ１ＧＧＣＡＡＡＣＣＡＴＣＡＧＡＧＣＡＴＧ序列三：巴斯德菌属通用探针ＰＦｉｒｃ１ＴＧＴＴＣＴＴＴＡＡＡＡＡＡ（Ｔ／Ａ）Ｔ（Ｇ／Ａ）ＧＡＡＡＣＡＡＧＣＴ Ｇ序列四：多杀巴斯德氏菌探针２Ｐｍｕｌｉｉ３ＡＡＧＣＧＡＡＡＧＣＡＡＡＡＧＡＧＴＧＡＡＧＣＧＡ序列五：杀鱼巴斯德氏菌探针１Ｐｍｕｌｉｉ２ＣＡＡＴＧＡＡＧＡＧＡＣＡＡＡＡＡＡＣＣＧＡＡＡＴＣＣ序列六：鮰鱼爱德华 氏菌探针Ｅｉｃｔ１ＡＣＣＣＣＧＴＧＴＣＣＣＣＴＴＣＧＴＣＴＡＧＡＧＧ序列七：鮰鱼爱德华氏菌探针２Ｅｉｃｔ２ＴＴＡＣＡＧＣＡＣＧＡＡＧＴＧＡＡＡＣＡＣＣＴＴＣＧ序列八：迟缓爱德华氏菌探针１Ｅｔａｒ１ＧＧＴＡＡＴＡＡ ＧＧＴＡＴＴＧＣＡＧＴＡＡＡＧＴＣ序列九：迟缓爱德华氏菌探针２Ｅｔａｒ２ＡＴＧＧＧＧＣＴＡＴＡＧＣＴＣＡＧＣＴＧＧＧＡＧＡ序列十：耶尔森氏菌属通用探针ＹｅｒＦｉｐ１ＴＡＣＡＧＣＴＧＡＡＡＴＴＴＡＣＣＣＣＧＣＣ 序列十一：鲁氏耶尔森氏菌探针１ＹｅｒＦｉｐ２ＡＧＡＴＧＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＴＧＡ（Ｃ／Ｔ）ＡＡＧＡＣＡ序列十二：气单胞菌属通用探针１ＡＦ＆Ｖａｌｇｉｐ１ＧＣＴＧＡＴＴＴＡＡＡＡＡＧＴＡＧＴＴＣＴＣＡＡＡＣＡＴＴＴＧＴ 序列十三：杀鲑气单胞菌探针１ＡＦ＆Ｖａｌｇｉｐ３ＡＧＣＴＡＣＣＣＧＧＴＴＡＣＣＴＧＣＧＣＧＣ序列十四：杀鲑气单胞菌探针２ＡｓａｌＶａｌｉｐｒＧＣＴＣＧＣＧＣＧＣＡＧＧＴＡＡＣＣＧＧＧＴ序列十五：豚鼠气单胞菌探针１ ＡｃａｖＧｌｉｐ１ＧＣＣＧＣＴＡＧＣＣＴＣＧＣＡＧＧＣＴＣＧＧ序列十六：豚鼠气单胞菌探针２ＡｃａｖＧｌｉｐ２ＧＣＣＴＴＴＡＣＧＡＡＡＡＴＣＡＴＴＧＣＧＡＡ序列十七：温和气单胞菌探针１Ａｓｏｂｃｕｌｉｐ１ＴＡＡＴＧ ＧＣＧＣＴＣＧＧＣＣＴＣＧＣＡＧ序列十八：温和气单胞菌探针２Ａｓｏｂｃｕｌｉｐ２ＣＧＧＣＡＣＴＣＧＣＣＡＴＴＡＣＣＣＡＡＡＡ序...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄熙泰，侯艳梅，刘寅，张立怀，郑泽军，高旗利，周浩，董志珍，李永君，王玉玲，魏晓娜，霍蕾，
申请(专利权)人：南开大学，中华人民共和国天津出入境检验检疫局，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]