一种香蕉束顶病毒恒温基因扩增快速检测试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术涉及一种香蕉束顶病毒（Banana?bunchy?top?virus，BBTV）恒温基因扩增快速检测试剂盒，其试剂包括：由两对引物构成的引物混合液；浓度为8U/μl的Bst?DNA聚合酶；DNA提取液，所述DNA提取液包含：100mM?Tris-HCl(pH7.4)、1M?KC1、10mM?EDTA和2%(w/v)PVPP；反应缓冲液，所述反应缓冲液包含：10mM?dNTP、10×ThermoPol反应缓冲液、150mM?MgSO4、5mM甜菜碱＝8∶5∶2∶10；核酸染料；阳性对照为蕉条斑病毒基因组DNA；阴性对照：100mMTris-HCl(pH?8.0)和50mM?EDTA。本发明专利技术还涉及该试剂盒的使用方法。该试剂盒通过对样品中香蕉束顶病毒的核酸提取、恒温基因扩增反应、最后通过对反应液颜色的肉眼判断来实现对香蕉束顶病毒高特异性、快速、高效、高灵敏度、简便的分子检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物检测领域，具体的说，本专利技术涉及。
技术介绍
香蕉为芭蕉科芭蕉属植物，是热带亚热带重要的经济作物和粮食作物。香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus, BBTV)是制约我国广东、云南、海南等香蕉主要种植地区产业健康发展的重要因素之一。感病植株生长早期发病病株明显矮缩，叶片狭小，直立状，叶缘黄化，叶质硬脆，易折断，主脉和叶柄表现长短不一，断断续续的深色条纹(俗称“起青筋”)。孕穗后发病，如叶片已出齐，则不现“束顶”，叶片也不狭小、黄化，但幼嫩 叶片主脉仍现“青筋”，抽出的花蕾直生，不结蕉或结蕉性能极差，把柄细长、弯曲，果小而少，果端细如指头，果肉脆、无香味。香蕉束顶病的病原为球状粒体病毒(BBTV)，由香蕉蕉脉蚜(Pentalonia nigronervosa)以持久性方式传播。香蕉束顶病主要是通过吸芽和组培苗带毒，以及香蕉交脉虫牙(Pentalonia nigroneryosa)来传播。香蕉主要通过无性组织培养工厂化生产，香蕉束顶病毒可随着组培中香蕉分化芽的繁殖，若种苗(或蕉头)携带香蕉束顶病毒又未经严格检疫，其病原就可能随组培苗以更快的速本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种香蕉束顶病毒恒温基因扩增快速检测试剂盒，其特征在于，其试剂包括 由两对引物构成的引物混合液，所述两对引物为外引物1-F3，其核苷酸序列如SEQ IDNO 1所示，外引物2-B3，其核苷酸序列如SEQ ID NO 2所示，内引物1-FIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO :3所示，内引物2-BIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO :4所示，所述内引物I-FIP和所述内引物2-BIP的浓度均为40ρπιΟ1/μ 1，所述外引物1-F3和所述外引物2-Β3的浓度分别为5pmol/μ I ； 浓度为8U/ μ I的Bst DNA聚合酶； DNA 提取液，所述 DNA 提取液包含IOOmM Tris-HCl (pH7. 4)、IM KClUOmM EDTA 和 2%(w/v)PVPP ； 反应缓冲液，所述反应缓冲液包含10mM dNTPUOXThermoPol反应缓冲液、150mMMgS04、5mM 甜菜碱=8 5 2 10 ； 核酸染料； 阳性对照香蕉束顶病毒基因组DNA ； 阴性对照100mM Tris-HCKpH 8. O)和 50mM EDTA。2.根据权利要求I所述的香蕉束顶病毒恒温基因扩增快速检测试剂盒，其特征在于，所述核酸染料为1000XSYBR Green I。3.一种香蕉束顶病毒恒温基因扩增快速检测试剂盒的使用方法，该方法包括下列步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄俊生，彭军，郭建荣，郭立佳，杨腊英，王国芬，梁昌聪，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：