本发明专利技术涉及贮存稳定的抗-TNFR1抗体单可变结构域(dAb)、拮抗剂和多特异性配体，以及这些的方法和用途。抗-TNFR1多肽、抗体单可变结构域(dAb)、拮抗剂和多特异性配体可用于治疗和/或预防炎性疾病，例如关节炎或COPD，也可用于肺部给药、口服给药、递送至肺和递送至患者的GI道。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】稳定的抗-TNFR1多肽、抗体可变结构域和拮抗剂本专利技术涉及抗-肿瘤坏死因子I (TNFR1、p55、⑶120a、P60、TNF受体超家族成员1A、TNFRSF1A)多肽、免疫球蛋白(抗体)单可变结构域和包含这些的拮抗剂。本专利技术还涉及包含或使用这样的抗-TNFRl配体的方法、用途、制剂、组合物和装置。专利技术背景 TNFRl TNFRl是一种跨膜受体，其包含结合配体的胞外区和缺乏内在信号转导活性但可与信号转导分子相缔合的胞内结构域。TNFRl与结合的TNF的复合体包含3条TNFRl链和3条TNF链。(Banner等，Cell, 73(3) 431-445 (1993).) TNF配体以三聚体存在，三聚体被3条TNFRl链结合。(同上)3条TNFRl链在受体-配体复合体中紧密聚簇在一起，并且该聚簇是TNFRl介导的信号转导的前提。事实上，结合TNFRl的多价物质(例如抗-TNFRl抗体)在TNF不存在下可诱导TNFRl聚簇和信号转导，并一般被用作TNFRl激动剂。(参见，例如，Belka 等，EMBO，14(6): 1156-1165 (1995) ; Mandik-Nayak 等，J. Immunol,167: 1920-1928 (2001).)因此，即使结合TNFRl的多价物质阻断TNF α与TNFRl的结合，它们通常也不是TNFRl的有效拮抗剂。本段中的SEQ ID号指的是W02006038027中使用的编号。TNFRl的胞外区包含13个氨基酸的氨基端区段(SEQ ID NO: 603 (人)的氨基酸1_13、SEQ ID NO: 604 (小鼠)的氨基酸I-I3)、结构域I (SEQ ID NO: 603 (人)的氨基酸14HSEQ ID NO: 604 (小鼠)的氨基酸 14_53)、结构域 2 (SEQ ID NO: 603 (人)的氨基酸 54_97、SEQ ID NO: 604(小鼠)的氨基酸54_97)、结构域3 (SEQ ID NO: 603 (人)的氨基酸98_138、SEQ ID NO:604 (小鼠)的氨基酸98-138)和结构域4 (SEQ ID NO: 603 (人)的氨基酸139_167、SEQID NO: 604 (小鼠)的氨基酸139-167)，其后是膜近侧区(SEQ ID NO: 603_(人)的氨基酸168-182、SEQ ID NO: 604 (小鼠)的氨基酸 168-183)。(参见，Banner 等，Cell 73(3)431-445 (1993)和 Loetscher 等，Cell 61(2) 351-359 (1990).)结构域2和 3 与结合的配体(TNFβ，TNFa )接触。(Banner 等，Cell, 73(3) 431-445 (1993).) TNFRl 的胞外区也包含被称为前-配体结合装配结构域或PLAD结构域的区(SEQ ID NO: 603_(人)的氨基酸 1_53、SEQ ID NO: 604 (小鼠)的氨基酸 1-53)) (USA 政府，WO 01/58953; Deng等，Nature Medicine, doi: 10. 1038/nml304 (2005))。TNFRl体内通过包括在结构域4或膜近侧区(SEQ ID NO: 603的氨基酸168-182、SEQ ID NO: 604的氨基酸168-183)中蛋白酶解TNFRl的过程从细胞表面脱落，来产生可溶 形式的TNFRl。可溶性TNFRl保留结合TNF α的能力，并藉此作为TNF α活性的内源性抑制剂起作用。W02006038027.W02008149144 和 W02008149148 公开了抗-TNFRl 免疫球蛋白单可变结构域和包含这些结构域的拮抗剂。这些文献还公开了这样的结构域和拮抗剂用于治疗和/或预防由TNF α介导的病况的用途。提供具有改进贮存稳定性的抗-人TNFRl免疫球蛋白单可变结构域、包含这些结构域的拮抗剂、配体和产品将是合乎需要的。它们的目的将是提供改进的诊断试剂用于检测样品中的人TNFR1，以及或者备选地，提供改进的治疗剂用于治疗和/或预防人和其他哺乳动物中的TNFRl介导的病况和疾病。提供强效中和TNFRl (尤其是人TNFR1)的抗-TNFRl免疫球蛋白单可变结构域、包含这些结构域的拮抗剂、配体和产品将特别合乎需要。 本专利技术的各个方面满足这些所需特性。专利技术概述 在一个方面，本专利技术提供一种抗-TNFa I型受体(TNFR1 ；p55)免疫球蛋白单可变结构域，其包含与 DOMlh-574-188、D0Mlh_574_189、D0Mlh-574-190、D0Mlh_574_191、DOMlh-574-192、D0Mlh_574_195、D0Mlh_574_196、D0Mlh-574-201、D0Mlh-574-202、D0Mlh-574-203、D0Mlh-574-204、D0Mlh-574-205、D0Mlh-574-206、D0Mlh-574-207、D0Mlh-574-208、D0Mlh-574-209、D0Mlh_574_211、D0Mlh_574_212、DOMlh-574-213 或DOMlh-574-214的氨基酸序列具有至少95、96、97、98或99%同一性(或100%同一性)的氨基酸序列，其中该单可变结构域在PBS中40°C孵育40小时后具有〈I. O、〈O. 9、〈O. 8、〈O. 7、〈O. 6、〈O. 5或〈O. 4的0D32(i。在一个实施方案中，单可变结构域具有通过以下测试测定的〈I. O、〈O. 9、〈O. 8、〈O. 7、〈O. 6、〈O. 5 或〈O. 4 的 OD320 a)将100μ I在PBS (磷酸缓冲盐水)中的lmg/ml单可变结构域分配在PCR板上； b)将该板在40°C孵育40小时；和 c)移除50μI的等分试样并例如在微量培养板读数器(例如，来自MolecularDevices的一种)中测量OD320。在一个方面，本专利技术提供一种抗-TNFa I型受体(TNFR1 ；p55)免疫球蛋白单可变结构域，其包含与 DOMlh-574-188、D0Mlh_574_189、D0Mlh-574-190、D0Mlh_574_191、DOMlh-574-192、D0Mlh_574_193、D0Mlh_574_194、D0Mlh_574_195、D0Mlh_574_196、D0Mlh-574-201、D0Mlh-574-202、D0Mlh-574-203、D0Mlh-574-204、D0Mlh-574-205、D0Mlh-574-206、D0Mlh-574-207、D0Mlh-574-208、D0Mlh-574-209、D0Mlh_574_211、DOMlh-574-212,DOMlh-574-213 或 DOMlh-574-214 的氨基酸序列具有至少 95、96、97、98 或99%同一性(或100%同一性)的氨基酸序列。在一个方面，本专利技术提供一种抗-TNF a I型受体(TNFR1 ;p55)免疫球蛋白单可变结构域，其包含与选自 DOMlh-574-188、D0Mlh_574_189、D本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.10.27 US 61/255,2351.一种抗-TNFa I型受体(TNFR1 ;p55)免疫球蛋白单可变结构域，其包含与以下的氨基酸序列具有至少95、96、97、98或99%同一性(或100%同一性)的氨基酸序列:DOMlh-574-188、DOMlh-574-189、D0Mlh-574-190、DOMlh-574-191、DOMlh_574_192、DOMlh-574-195、DOMlh_574_196、D0Mlh-574-201、D0Mlh-574-202、D0Mlh-574-203、D0Mlh-574-204、D0Mlh-574-205、D0Mlh-574-206、D0Mlh-574-207、D0Mlh-574-208、D0Mlh-574-209、DOMlh-574-211、DOMlh_574_212、DOMlh_574_213 或 DOMlh_574_214，其中所述单可变结构域在PBS中40°C孵育40小时后具有〈I. 0、〈0. 9、〈0. 8、〈0. 7、〈0. 6、〈0. 5或〈O. 4 的 OD320。2.一种多特异性配体，其包含权利要求I的免疫球蛋白单可变结构域，并任选包含至少一种与血清白蛋白(SA)特异性结合的免疫球蛋白单可变结构域。3.权利要求2的多特异性配体，其中所述配体包含⑴权利要求I的抗-TNFa I型受体(TNFR1 ；p55)免疫球蛋白单可变结构域，(ii)至少一种与SA特异性结合的抗-血清白蛋白(SA)免疫球蛋白单可变结构域，其中所述抗-SA单可变结构域包含与D0M7h-ll-3的序列具有至少80、85、90、95、96、97、98或99%同一性(或100%同一性)的氨基酸序列，和(iii)任选其中在抗-TNFRl单可变结构域和抗-SA单可变结构域之间提供接头。4.权利要求3的配体，其中所述接头包含氨基酸序列AST(任选是ASTSGPS)，或者其中所述接头是六5(645)11，其中11是1、2、3、4、5、6、7或8，例如AS(G4S)3。5.一种TNFRl拮抗剂，其包含任何前述权利要求的单可变结构域或多特异性...
【专利技术属性】
技术研发人员：I德西尔瓦，A塞普，AA施托普，
申请(专利权)人：葛兰素集团有限公司，
类型：发明
国别省市：
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