人源化抗IL-22RA抗体制造技术

本发明专利技术涉及抗人IL-22RA的人源化抗体及它们在治疗银屑病和其他免疫-介导疾病如银屑病关节炎和特发性皮炎中的应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及人源化抗IL-22RA抗体及其在治疗银屑病和其他免疫-介导疾病如银屑病关节炎和特发性皮炎中的应用。_2]
技术介绍
IL-22RA(也称为 IL22R、IL22R1、IL22RA1、CRF2_9 和 Zcytorll)属于 II 型细胞因子受体家族，是IL-20、IL-22和IL-24受体的一种组分。由于它们的结构相似，IL-20、IL-22和IL-24与IL-19和IL-26 一起加上IL-IO都属于所谓的“ IL-10家族”(Kunz S等· 2006)。IL-10是免疫应答反应的主要调节剂，可介导巨噬细胞、T细胞和免疫系统其他细胞促炎症 细胞因子表达下调(Moore Kff等.2001)。在体外，不仅活化的免疫细胞而且角质形成细胞均能程度相似地产生IL-20和IL-24。在体内，发炎组织优先表达这些细胞因子。IL-20和IL-24可通过二种受体复合体IL-20RA/IL-20RB和 IL-22RA/IL-20RB传递信号(Langer JA等.2004)。几种组织，特别是皮肤、生殖和呼吸系统组织及各种腺体，看来是这些介导因子的主要靶标(Kunz S等，2006)。发现⑶4+T细胞在激活时上调IL-22基因的表达，它与IL-10的氨基酸序列有22 %相同，因此，它最初的名字称为IL-10相关的T细胞产生的可诱导因子(IL-TIF) (DumoutierL等.2000)。不象IL-10能调节免疫细胞的功能，IL-22可调控组织对免疫系统的应答反应。IL-22通过在各种组织中高表达但在免疫细胞中不可检测的IL-22RA和IL-10RB所形成的异质二聚体受体来传递信号。最初认为，IL-22系通过其IL-22RA结合位点结合于IL-22RA的胞外结构域，后来发现，IL-10RB结合于IL-22与IL-22RA相互反应所产生的区域，形成对IL-22有高亲和力的细胞因子受体复合体(Li J等.2004)。由于许多不同类型的细胞能广泛表达IL-10RB，而IL-22RA表达是决定细胞IL-22应答反应的限制性组分。IL-22RA在肝脏以及皮肤、肺、胰腺和其他外周组织中强表达(Wolk K等.2004 ；Aggarwal S等.2001)。不同细胞系的广泛筛选揭示了只有表达IL-22RA的细胞才对IL-22应答，提示没有能介导IL-22信号传递的可替代受体。称为IL-22结合蛋白的可溶性受体(IL-22BP ;也称为IL22BP、IL22RA2、IL-22R- a 2、CRF2X、CRF2_S1和CRF2-10)也能结合IL-22，作为天然的蛋白拮抗剂从而提供IL-22活性的全面调节(Kotenko SV等.2003)。在包含浸润性活化T细胞的各种慢性炎症疾病(例如银屑病、银屑病关节炎和特发性皮炎)病人的患病组织中发现了 IL-22。最常将IL-22描述为促-炎症细胞因子，因为它在慢性炎症疾病病人的病灶中表达，诱生了促炎细胞因子，如 IL-6、IL-8 和 TNF-α (W0Ik K 等· 2004 ；Andoh A 等· 2005 ; Ikeuchi H 等· 2005 ;Nograles KE等· 2009a. ；Nograles KE等· 2009b)。最近Zheng等人证明，在银屑病小鼠模型中IL-22对介导IL-23-诱导的皮炎至关重要，表明其有促炎症作用(Zheng Y等.2007)。鉴于IL-22的生物学作用包括诱导角质形成细胞增生，诱导某些组织产生趋化因子和促炎细胞因子，可采用能阻断、抑制、降低或中和IL-22活性的拮抗剂，例如通过干扰其与受体的结合，而防止病原性细胞渗入炎症部位。在2005年10月21日提交的PCT专利申请WO2006/047249中已描述了小鼠抗人IL-22RA单克降抗体。然而，小鼠抗体可有免疫原性，故需要人源化的抗人IL-22RA抗体。用于人类治疗时人源化抗体通常至少有三个潜在的优点优于小鼠抗体(I)由于需要其发挥效应的是人，故人源化抗人IL-22RA抗体能与人免疫系统的其他部分更好地相互作用(例如，通过补体依赖的细胞毒(CDC)或抗体依赖的细胞毒(ADCC))更有效地摧毁靶细胞；(2)人免疫系统应不会识别人源化抗体的框架区或恒定区为异物，因此对注入抗体的抗体应答反应应低于对完全异源的小鼠抗体的抗体应答反应；和(3)已报导注入的小鼠抗体在人体循环中的半衰期比人抗体的半衰期短得多。推测注入的人源化抗体半衰期与天然的人抗体更相似，故可给予较少剂量和较少次数。因此，鉴于以上所述，治疗IL-22介导的炎症，如银屑病、银屑病关节炎和特发性皮炎，需要人源化的抗人IL-22RA抗体。专利技术概沭第一方面，本专利技术提供结合人IL-22RA的人源化抗体。本专利技术的人源化抗体包含a)含有分别由氨基酸序列SEQ ID NO :1、2和3组成的H-CDR1、H_CDR2和H-CDR3的重链可 变区，和b)含有分别由氨基酸序列SEQ ID NO :4、5和6或分别由氨基酸序列SEQ I D NO 4、5和7组成的L-⑶R1、L-⑶R2和L-⑶R3的轻链可变区。另一方面，本专利技术提供本说明书所述的抗体，此抗体中a)所述重链可变区包含分别由氨基酸序列SEQ ID NO :8、9、10和11组成的框架区H-FRl、H-FR2、H-FR3和H-FR4 ;和b)所述轻链可变区包含分别由氨基酸序列SEQ ID N0:12、13、14 和 15 组成的框架区 L-FR1、L-FR2、L-FR3 和 L-FR4。在另一方面，本专利技术提供本说明书所述的抗体，此抗体中a)所述重链可变区由氨基酸序列SEQ ID NO 16组成山)所述轻链可变区由氨基酸序列SEQ ID N0:17组成。在另一方面，本专利技术提供本说明书所述的抗体，此抗体包含a)由氨基酸序列SEQ ID NO 18组成的重链恒定区；和b)由氨基酸序列SEQ ID NO 19组成的轻链恒定区。另一方面，本专利技术提供结合人IL-22RA的人源化抗体，其包含由氨基酸序列SEQ IDNO 20组成的重链和氨基酸序列SEQ ID NO 21组成的轻链。另一方面，本专利技术提供一种多聚核苷酸，如DNA，其编码本专利技术人源化抗体的重链。优选所述多聚核苷酸包含或由序列SEQ ID NO 22组成。另一方面，本专利技术提供一种多聚核苷酸，如DNA，其编码本专利技术人源化抗体的轻链。优选所述多聚核苷酸包含或由序列SEQ ID NO 23组成。另一方面，本专利技术提供一种多聚核苷酸，如DNA，其编码本专利技术人源化抗体的重链和轻链。另一方面，本专利技术提供一种载体，更具体地说，一种表达载体，其包含a)编码本专利技术人源化抗体重链的多聚核苷酸，和b)编码本专利技术人源化抗体轻链的多聚核苷酸。另一方面，本专利技术提供一种载体，更具体地说，一种表达载体，其包含编码本专利技术人源化抗体重链和轻链的多聚核苷酸。另一方面，本专利技术提供宿主细胞，优选CHO细胞，其包含转染的本专利技术载体，具体说，本专利技术的表达载体。另一方面，本专利技术提供制备本专利技术人源化抗体的方法，该方法包括培养本专利技术的宿主细胞，优选CHO细胞，和分离本专利技术的人源化抗体。另一方面，本专利技术提供本专利技术的人源化抗体作为药物的应用，具体用于治疗银屑病、银屑病关节炎或特发性皮本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.11.19 EP 09176525.5;2009.11.20 US 61/262,9981.一种结合人IL-22RA的人源化抗体，包含 a)含有分别由氨基酸序列SEQID NO :1、2和3组成的H-CDR1、H_CDR2和H-CDR3的重链可变区，和 b)含有分别由氨基酸序列SEQID NO :4、5和6或分别由氨基酸序列SEQ ID NO :4、5和7组成的L-CDRl、L-CDR2和L-CDR3的轻链可变区。2.如权利要求I所述的人源化抗体，其中 a)所述重链可变区包含分别由氨基酸序列SEQID NO :8、9、10和11组成的框架区H-FRl、H-FR2、H-FR3 和 H-FR4 ;和 b)所述轻链可变区包含分别由氨基酸序列SEQID NO : 12、13、14和15组成的框架区L-FRl、L-FR2、L-FR3 和 L-FR4。3.如权利要求I或2所述的人源化抗体，其中 a)所述重链可变区由氨基酸序列SEQID NO 16组成； b)所述轻链可变区由氨基酸序列SEQID NO 17组成。4.如权利要求1-3中任何一项所述的人源化抗体，其中所述抗体包含 a)由氨基酸序列SEQID NO 18组成的重链恒定区；和 b)由氨基酸序列SEQID NO 19组成的轻链恒定区。5.一种结合人IL-22RA的人源化抗体，其包含由氨基酸序列SEQ ID NO :20组成或包括氨基酸序列SEQ ID NO :20的重链和由氨基酸序列SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·贝克曼，C·约翰逊莱杰，
申请(专利权)人：默克雪兰诺有限公司，
类型：发明
国别省市：