含有乙脑E蛋白C末端中和表位基因的融合蛋白及其疫苗制造技术

本发明专利技术属于生物基因工程领域，要解决现有技术中的治疗猪乙脑的疫苗病毒滴度低、保持能力不佳的技术问题。提供了一种融合蛋白，由乙脑E蛋白C末端的中和表位基因和M.Thsp70基因构成，本发明专利技术还提供了含有上述融合蛋白基因的载体，含有上述蛋白的疫苗以及上述载体的制备方法，载体的制备方法是先合成乙脑E蛋白C末端的中和表位基因，将中和表位基因克隆入原核表达载体，然后以人结核杆菌H37Rv标准株的基因组为模板扩增出M.Thsp70基因，将hsp70基因克隆入原核表达载体，从而得到融合蛋白表达载体，再纯化获得表达蛋白，制备用于预防乙脑的疫苗。本发明专利技术疫苗的中和抗体效价高于弱毒苗，易于大规模、高效、快速生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物基因工程领域，尤其涉及一种含有乙脑E蛋白C末端中和表位基因的融合蛋白及其疫苗。
技术介绍
猪是乙脑主要的传染源之一，它与蚊形成了“蚊、猪”的循环传播模式。同时，乙脑也是严重危害养猪业的重大疫病之一，该病引起妊娠母猪流产和死胎，公猪发生睾丸炎，仔猪因脑炎病死，直接影响猪群数量的扩大，给养猪业的持续高产发展造成了巨大的经济损失，并极大的限制了肉产品的出口创汇；在我国目前用于猪乙脑治疗的疫苗是BHK细胞上培养的弱毒苗，但是存在病毒滴度低，保持能力不佳等缺点，所以对研制乙脑基因工程疫苗的要求越来越迫切；乙脑病毒的结构蛋白有C、PrM/M和E蛋白三种。E蛋白是病毒的包膜蛋白，含有病毒的抗原决定簇，由500个aa残基组成，分子量为53kDa。E蛋白是疏水性的，富含有甘氨酸和丙氨酸，仅有一个糖基化位点(Asnl54-X-Ser)。E蛋白是毒粒表面的重要成份，由它形成的表面抗原决定簇，具有血凝活性和中和活性。E蛋白与病毒的毒力、宿主范围、组织嗜性、膜融合、保护性免疫、血凝反应和血清特异性有关。E蛋白C末端的中和表位位于E蛋白上373aa_399aa，共27个氨基酸，已研究发现，用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
2012.03.05 CN 201210053992.51.一种分离的乙脑E蛋白C末端的中和表位基因，其基因序列如SEQ ID N0:1所示。2.权利要求I所述的基因编码的一种分离的蛋白，其氨基酸序列如SEQID N0:2所示。3.一种融合蛋白，由乙脑E蛋白C末端的中和表位基因和M. T hsp70基因构成，其氨基酸序列如SEQ ID NO 4所示。4.一种编码权利要求3所述的融合蛋白的基因，其基因序列如SEQ ID N0:3所示。5.一种载体，其特征在于含有权利要求I或4所述的基因序列。6.一种工程菌，其特征在于含有权利要求I或4所述的基因序列。7.如权利要求5所述的载体，其特征在于其基因序列如SEQID N0:5所示。8.权利要求5所述的载体表达的蛋白，其特征在于其氨基酸序列如SEQID NO 6所示9.一种用于预防乙脑的疫苗，其特征在于含有权利要求2或者3所述的蛋白、或者权利要求5所述的载体表达的蛋白。10.一种用于预防乙脑的疫苗，其特征在于含有权利要求6所述的工程菌。11.权利要求5所述的载体的制备方法，其特征在于包括一个人工合成乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛菲菲，王建，刘佩红，周锦萍，刘健，杨显超，
申请(专利权)人：上海市动物疫病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：