一种降解苯酚的基因工程菌及其构建方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种降解苯酚的基因工程菌及其构建方法和应用，含有铜绿假单胞杆菌PA01中苯酚羟化酶大亚基N的基因保守序，构建步骤包括(l)PCR扩增苯酚羟化酶基因；(2)重组质粒的构建；(3)转化，还包括其在降解苯酚中的应用。本发明专利技术从铜绿假单胞杆菌Pseudomonas?aeruginosa?PA01基因组中克隆到一个编码苯酚羟化酶基因，通过DNA重组技术在体外克隆表达构建得到苯酚降解菌，并进一步验证本重组菌降酚特性，获得了对苯酚的具有较强降解能力的遗传工程菌，这将对苯酚降解菌的工业化生产提供新的理论依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物菌种构建领域，尤其是一种降解苯酚的基因工程菌及其构建方法和应用。
技术介绍
苯酚是ー种有毒有机的化工原料，是エ业废水废渣中的主要污染物，我国把苯酚列入严重污染环境和危害人体健康优先污染物的“黑名単”之中。 目前，采用微生物降解含酚废水因耗能少、成本较低、二次污染少等优点成为了处理含酚废水的常用的方法之一。研究学者从自然界中筛选分离出来能够降解苯酚的高效微生物菌种，通过研究其降解特性、降解条件、对苯酚的耐受性以及降解效率，进而有针对性地将菌剂投入到污水处理系统中，得到较好的处理效果。杨彦希等从炼油厂附近严重污染的废水和土壌中通过富集分离筛选到12株丝孢酵母及假丝酵母，这12株菌都能够以苯酚为唯一碳源生长，24-28h内降解苯酚质量浓度可高达1200mg/L,其中一菌株降解苯酹质量浓度最高可达1700mg/L。袁丽娟等从ー绝缘材料厂的污水中分离得到一株可高效降解苯酹的菌株Bacillus simplex JY01,在接种量为2%，pH为6. 0-9. 0，温度为18°C _36°C的条件下，在30h内，当苯酚浓度为IlOOmg/L和1300mg/L时，其降解率分别为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种降解苯酚的基因工程菌，其特征在于含有苯酚羟化酶基因。2.根据权利要求I所述的降解苯酚的基因工程菌，其特征在于所述苯酚羟化酶基因来自铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa PAOl。3.根据权利要求I所述的降解苯酚的基因工程菌，其特征在于所述基因工程菌的宿主菌为枯草芽抱杆菌Bacillus subtilis DB1342。4.一种如权利要求I或2或3所述的降解苯酚的基因工程菌的构建方法，其特征在于步骤如下 (1)PCR扩增苯酚羟化酶基因 从GenBank数据库中检索出铜绿假单胞杆菌PAOl中苯酚羟化酶大亚基N的基因保守序列，利用DNAMAN软件设计引物进行扩增获得目的片段，正向引物见序列1，反向引物见序列2，PCR扩增获得苯酚羟化酶基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵华，陈坤，杨晶，张同存，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：