本发明专利技术涉及一种胶乳增强免疫比浊法测定人甲胎蛋白含量的试剂盒。本发明专利技术提供的试剂盒包括甲胎蛋白R1试剂、甲胎蛋白R2试剂和甲胎蛋白校准品，其中甲胎蛋白R1试剂包含电解质、促凝剂、稳定剂、表面活性剂、防腐剂及缓冲液；甲胎蛋白R2试剂包含抗人甲胎蛋白的多克隆抗体包被胶乳颗粒、电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂及缓冲液；甲胎蛋白校准品包含防腐剂、电解质、稳定剂、甲胎蛋白抗原及缓冲液。本试剂盒特异性强、灵敏度高、均一稳定、快速简便，可用于各种生化分析仪。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种利用胶乳增强免疫比浊方法测定人体体液(包括血清和羊水)中甲胎蛋白含量的试剂盒，属于医学免疫体外诊断领域。
技术介绍
甲胎蛋白(a-fetoprotein,或AFP),分子量为68kD,是一条多肽链糖蛋白，由590个氨基酸组成，含糖量4%。甲胎蛋白的基因位于常染色体的4qll q22区域，基因约有20kb长，含15个外显子，14个内含子，与血清白蛋白、维生素D结合蛋白为同一家族，与白蛋白有50%的氨基酸相同，等电点4. 7 4. 8，电泳时位于白蛋白与α -球蛋白之间。在胎儿发育过程中，肝脏是合成甲胎蛋白的主要场所，其次是卵黄囊，来自内胚层的胃肠道粘膜也可以合成少量的甲胎蛋白。人体胚胎的第6周开始合成，12 14周合成达到高峰，血清的浓度为I 3mg/mL，以后逐渐降低，出生时血清浓度约为19 100 μ g/mL，一年后,血清浓度降至正常水平,约为5. 8ng/mL。正常人血清中甲胎蛋白含量极少，低于20ng/ml。但在原发性肝癌、肝炎、肝硬化及卵黄囊肿瘤等患者中，甲胎蛋白会有不同程度的升高，有的甚至升高上千倍以上；孕期母体的血清或羊水中甲胎蛋白也高于正常人，因受胎儿血中高浓度甲胎蛋白波动影响，不同孕期甲胎蛋白浓度有规律的变化。甲胎蛋白作为一种肿瘤标志物，其含量变化与多种疾病有关，包括肝细胞癌、卵黄囊肿瘤、非内胚层胃肠道癌、生殖细胞癌等。甲胎蛋白在临床诊断上主要用于以下三方面I.肝细胞癌早期诊断，高危人群的筛查、分期及预后的诊断、疗效检测；2.卵黄囊肿瘤早期诊断，且与治疗效果相关，其上升与下降可反映内胚窦瘤的生长状况、病情进展与缓解；3.产科检查筛查神经管缺陷、非整倍体的实验室标志物。甲胎蛋白的检测方法较多，传统的包括酶联免疫吸附实验(ELISA)、放射免疫分析(RIA)、时间分辨荧光(TRFIA)、化学发光(CLIA)免疫分析方法等。其中，化学发光方法的灵敏度和线性都较高，检测范围可以达到I 1000ng/mL，但试剂成本相对较高且配套的大型仪器比较昂贵。酶联免疫法应用较普遍，但该方法为非均相免疫检测系统，其优点在于通过使用过量的固定化抗体和标记抗体，实现高灵敏度和较高水平的精确性；缺点在于测定过程中需要进行洗涤分离步骤，耗时长，缺少单位测试运行时间；自动化程度不高，批间差和重复性相对较大；针对不同的步骤需要配备多种专门的设备，一定程度上增加了产品的成本。近年来 ，由于不断增长的检测数量，临床上迫切需要一种更为简便、快速的方法取代传统的检测方法。胶乳增强免疫比浊法检测甲胎蛋白是基于均相免疫分析测定系统的一种方法，在普通的生化分析仪上即可完成反应全程，可实现快速、高高通量样本的检测。由于甲胎蛋白在正常人体内含量相对较低，利用胶乳增强免疫比浊均相免疫分析测定时，一般采用较高的样本量来弥补此法灵敏度低的缺陷；但灵敏度得以提高的同时又将面临高的样本量引入的干扰物质，如类风湿因子、补体等，造成的非特异性反应。为克服高样本引入的非特异性反应，现在市售的胶乳比浊法检测甲胎蛋白试剂盒通常采取用多克隆抗体IgG酶切得到的F(ab) ’ 2包被胶乳颗粒，在一定程度上降低了非特异性反应。但F(ab)’ 2需要由IgG经酶切纯化后方可使用，酶切制备工艺中会损失一部分抗体且对抗体活性也有一定程度影响，更重要的是试剂制备过程进一步复杂对控制试剂批间差设置了不可逾越的障碍。试剂批间差的主要影响因素由原来单纯的交联工艺控制，扩大到酶切纯化抗体工艺控制。该法不仅推高了试剂成本，批间差较大，并且开瓶后稳定性较差，从而限制了此类试剂在临床上的推广。IgY类抗体是一类来源禽类，如鸡、鸭、鹅等体内产生的主要抗体形式。研究证实，来源于禽类的抗体(IgY)与哺乳动物产生的抗体(主要为IgG)相差较大。IgY不能激活人体补体系统，不与类风湿因子或Fe受体相结合，能有效避免在免疫检测过程中产生假性结果，保证了试剂的较高特异性。同时，在遗传上与人类进化关系差别较大的禽类产生的抗体具有比哺乳动物多克隆抗体更高亲和性，此类抗体效价高用量相对降低，试剂成本方面也 有一定优势。综上，若将IgY抗体应用于胶乳增强免疫比浊法，代替F(ab) ’2来检测人体甲胎蛋白的含量，不仅保证了试剂的特异性也简化了生产工艺，便于控制试剂批间差，还可以有效降低成本，临床推广具有显著的优势。随着蛋白分离纯化技术手段不断发展，IgY的分离纯化技术也趋于完善。但目前将其应用到临床检测试剂盒的并不多见，经分析可能原因主要有以下几点抗体方面，国内抗体发展比较缓慢目前尚处于初级阶段，常规商业化抗体多依赖进口，IgY的生产商基本上没有；国外，主要以欧美为主，抗体技术已经很成熟，可以大量供应高质量抗体，但IgY目前市场份额较少，供应的厂家较少且供应量有限，售价较高多应用于科研，不适于作为试剂制造的生产原料；目前，市售甲胎蛋白检测试剂盒主方法较多，以化学发光法、酶联免疫、放射免疫为主，胶乳增强法应用于甲胎蛋白检测发展较慢市场份额有限，与市场投入不够有关。因此，目前仍需要能有效降低成本且可应用于临床检测的试剂盒。本专利技术使用的IgY抗体为亲和纯化自制而得，纯度和效价均满足胶乳法原料的要求，成本优势突出。因此，本专利技术胶乳增强免疫比浊法检测甲胎蛋白试剂盒突出优点在于特异性较高的鸡抗人甲胎蛋白多克隆抗体的使用能有效的降低试剂成本，同时又能具备灵敏度高、均一稳定使用简便，批间差易于控制适合产业化等特点，具有良好的市场应用前景。
技术实现思路
本专利技术提供一种胶乳增强免疫比浊法测定人体体液(包括血清和羊水)中甲胎蛋白含量的试剂盒，所述甲胎蛋白试剂盒包括(I)甲胎蛋白Rl试剂；(2)甲胎蛋白R2试剂；(3)甲胎蛋白校准品。为实现上述目的，本专利技术的技术方案包括(I)甲胎蛋白Rl试剂，是一种为试剂盒提供适当反应环境、使抗原保持天然构象、并控制反应达到终点的时间和速率的试剂，包含电解质、促凝剂、稳定剂、表面活性剂、防腐剂及缓冲液。(2)甲胎蛋白R2试剂，是一种含有抗人甲胎蛋白的多克隆抗体包被胶乳颗粒的均一的乳白色液体，包含抗人甲胎蛋白多克隆抗体包被胶乳颗粒、电解质、稳定剂、表面活性齐U、防腐剂及缓冲液。(3)甲胎蛋白校准品，用来与样本比较进行结果计算，包含防腐齐U、电解质、稳定齐U、甲胎蛋白抗原及缓冲液。在本专利技术的一实施方案中，胶乳免疫比浊法测定人体体液(包括血清和羊水)中甲胎蛋白含量的试剂盒包括甲胎蛋白Rl试剂、甲胎蛋白R2试剂和甲胎蛋白校准品，其中所述甲胎蛋白Rl试剂包含物质占其质量百分比为0. 1% 5.0%电解质、2% 6%促凝剂、O. I % I %稳定剂、O. I % 1.0%表面活性剂、O. 05% O. 1%防腐剂及口117 9、缓冲液浓度范围为10 lOOmmol/L的缓冲液。所述甲胎蛋白R2试剂包含抗人甲胎蛋白的多克隆抗体包被胶乳颗粒，胶乳颗粒直径范围为100 300nm，浓度为O. 5 5mg/mL。此外，还包含占其质量百分比为0. 1% 5.0%电解质、O. 5% 5%稳定剂、O. I % I. O %表面活性剂、O. 05 % O. I %防腐剂及PH7 9、缓冲液浓度范围为10 lOOmmol/L的缓冲液。所述甲胎蛋白校准品包含占其质量百分比为0.01% 1.0%防本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐丽，高爱民，刘希，
申请(专利权)人：北京九强生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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