偶联物在制备检测试剂中的用途制造技术

本申请涉及偶联物在制备检测试剂中的用途。具体而言，本申请的6

【技术实现步骤摘要】
偶联物在制备检测试剂中的用途
[0001]本申请是2020年1月3日提交的专利申请202010004879.2《6
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磷酸葡萄糖脱氢酶突变体及其在制备地高辛检测试剂中的用途》的分案申请。


[0002]本申请涉及生物检测领域，特别是涉及一种突变的酶6
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磷酸葡萄糖脱氢酶(简称G6PDH)及其在地高辛检测试剂盒中的应用。

技术介绍

[0003]半抗原，某些小分子物质(分子量小于4000Da)，其单独不能诱导免疫应答，即不具备免疫原性，但当其与大分子蛋白质或非抗原性的多聚赖氨酸等载体交联或结合后可获得免疫原性，诱导免疫应答。这些小分子物质可与应答效应产物结合，具备抗原性，它只有免疫反应性，不具免疫原性，又称不完全抗原。
[0004]半抗原能与对应抗体结合出现抗原
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抗体反应，又不能单独激发人或动物体产生抗体的抗原。它只有免疫反应性，不具免疫原性，又称不完全抗原。大多数多糖、类脂、激素、小分子药物都属于半抗原。如果用化学方法把半抗原与某种蛋白分子(载体)结合，会获得新的免疫原性，并能刺激动物产生相应的抗体。半抗原一旦与蛋白结合，就构成该蛋白质的一个抗原簇。一些比一般半抗原分子量小，但有特异结构的化学活性基团物质(如青霉素、磺胺剂等)，称为简单半抗原。
[0005]小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，多采用竞争模式。原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，显色愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。
[0006]地高辛(Digoxin)结构式如下所示：
[0007][0008]地高辛是强心苷药物，对心脏有正性肌力作用，减慢心率，抑制心脏传导，用于治疗高血压、瓣膜性心脏病、先天性心脏病等急性和慢性心功能不全。尤其适用于伴有快速心室率的心房颤动的心功能不全。
[0009]常见的不良反应包括：促心律失常作用、恶心、呕吐、下腹痛、异常的无力、软弱；少见的反应包括：视力模糊，中枢神经系统反应(如精神抑郁或错乱)；罕见的反应包括：嗜睡、
头痛及皮疹、寻麻疹(过敏反应)。在洋地黄的中毒表现中，促心律失常最重要，其次为房室传导阻滞、阵发性或加速性交界性心动过速、阵发性房性心动过速伴房室传导阻滞、室性心动过速、窦性停搏、心室颤动等。
[0010]因此，应对该药不良反应监测予以重视。而且由于药物代谢个体存在差异，临床使用时应结合血药浓度监测，制定合理的给药方案，尽量避免不良反应发生。
[0011]目前已知的地高辛检测方法主要有：高效液相色谱法(HPLC)、化学发光免疫、酶联免疫吸附剂测定(ELISA)、均相酶免疫测定法、胶乳凝集比浊法等方法。HPLC法需要复杂的样品前处理，操作复杂周期长且成本昂贵；发光免疫法试剂成本昂贵，不适合常规治疗药物检测，更不利于大范围推广。现有的均相酶免疫测定法、胶乳凝集比浊法常常因制备工艺复杂、批间差大，应用受到一定限制。
[0012]现有技术CN108593905A描述了一种地高辛检测试剂盒及其制备方法。然而，现有技术的方法依赖于对小分子药物(地高辛)自身所带反应基团进行的激活，之后再与酶进行反应。这样的偶联方法会出现同一葡萄糖六磷酸脱氢酶上链接有多个地高辛的情况，且偶联位点难以确保一致性，难以保证小分子药物和酶之间的定向1：1反应，而导致批间差异大。

技术实现思路

[0013]鉴于本领域的需求，本申请提供了一种新型的6
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磷酸葡萄糖脱氢酶突变体、及其在制备地高辛检测试剂盒中的用途。
[0014]根据一些实施方案，提供了一种6
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磷酸葡萄糖脱氢酶突变体。区别于已有发表的专利US006090567A(Homogeneous immunoassays using mutant glucose
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phosphate dehydrogenases)的6磷酸葡萄糖脱氢酶的突变体，本申请的6
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磷酸葡萄糖脱氢酶突变体，其包含选自以下的突变：D306C、D375C、G426C。
[0015]根据一些实施方案，提供了一种6
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磷酸葡萄糖脱氢酶突变体，所述6
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磷酸葡萄糖脱氢酶突变体是选自以下的序列所示：SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4。
[0016]根据一些实施方案，提供了一种多核苷酸，其编码本申请的6
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磷酸葡萄糖脱氢酶突变体。
[0017]根据一些实施方案，提供了一种表达载体，其包含本申请的多核苷酸。
[0018]根据一些实施方案，提供了一种宿主细胞，其包含本申请的表达载体。宿主细胞可以是原核(如细菌)或真核(如酵母)。
[0019]根据一些实施方案，提供了一种偶联物，其是本申请的6
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磷酸葡萄糖脱氢酶突变体与半抗原按照摩尔比1：n偶联而成。
[0020]在一些实施方案中，n是1至50，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50。
[0021]在一些具体的实施方案中，本申请的6
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磷酸葡萄糖脱氢酶突变体与半抗原按照摩尔比优选为1：1。
[0022]在一些具体的实施方案中，半抗原的分子量为100Da至4000Da，例如：100、150、200、250、300、350、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、520、550、570、600、
620、650、700、750、800、850、900、950、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、2200、2300、2400、2500、2600、2700、2800、2900、3000、3100、3200、3300、3400、3500、3600、3700、3800、3900、4000。
[0023]根据本申请，技术人员将理解，“半抗原”还包含其衍生物的形式。为了便于和6
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磷酸葡萄糖脱氢酶进行偶联，对于那些自身不带有偶联基团(例如，与巯基反应的基团)的半抗原(例如地高辛)，可以经改造而带有接头，以便和巯基共价结合。因此，在本申请中，半抗原衍生物是指，经改造而带有巯基反应基团的半抗原。
[0024]半抗原选自：小分子药物(如抗生素、精神药物)、激素、代谢物、糖、脂质、氨基酸。
[0025]半抗原例如但不限于：茶碱、苯妥英、维生素D、25羟维生素D、1，25双羟维生素D、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.偶联物在制备检测试剂中的用途，其中：所述检测试剂是地高辛的均相酶免疫法检测试剂；所述偶联物是6
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磷酸葡萄糖脱氢酶突变体与地高辛衍生物按照摩尔比1：1偶联而成；所述地高辛衍生物是式I所示：其中，m为1至10的整数，优选1至5的整数；更优选，所述地高辛衍生物...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚俊，王贵利，张启飞，李垚艳，刘希，
申请(专利权)人：北京九强生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：