本发明专利技术公开了一种特异性多肽，多肽的氨基酸序列如序列表中序列1和序列2所示。还公开了上述特异性多肽在乳腺癌早期诊断中的用途。本发明专利技术的特异性多肽是利用通过血清多肽图结合生物信息学软件进行比较分析、识别差异表达的多肽，进而应用质谱分析鉴定的。利用本发明专利技术公开的特异性多肽，可以制备乳腺癌早期诊断试剂，具有广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种特异性多肽，还涉及该多肽在乳腺癌早期诊断中的用途。
技术介绍
血清多肽组谱图(简称多肽图)是指通过质谱技术快速分析获得的血清中多肽 (蛋白质)组的精确质量数的谱图。在谱图中以精确质量数标识的多肽(蛋白质)峰在必要时可进一步通过生物质谱分析获得蛋白质序列。血清多肽图可在数分钟时间内通过微量血液的生物质谱分析获得，已在恶性肿瘤早期诊断中显示出了良好前景，预兆了医学分子诊断领域的一次重要突破，为肿瘤患者早期发现带来了福音(Sakaki M，Oka N, Nakanishi R, et al. J Med Invest. 2008 ；55 (1-2) :127-32 ；Semmes 0J, et al. Clin Chem 2005 ；51 102-12.)。血清多肽图作为一种全新的诊断方法，已经取得了令人振奋的进展。Petricoin 博士等科研人员在美国FDA/NIH的临床蛋白质组计划资助下，应用血清多肽图技术成功地对早期卵巢癌进行了诊断。在Lancet杂志上发表的论文中(Emanuel FP, ArdekaniAM, Hitt ΒΑ, et al. Use of proteomic patterns in serum to identify ovarian cancer. Lancet 2002 ；359 :572-7.)，利用生物质谱技术分析健康对照组和疾病组血清多肽组的组成模式， 并基于这些模式寻找差异点进行临床卵巢癌的检测。结果显示，50例卵巢癌患者全部正确检出，其中18例为I期卵巢癌患者；66例妇科良性肿瘤患者中正确检出63例。该方法检测卵巢癌的敏感性、特异性和阳性预测值分别为100%、95%和94%，显著优于传统的CA125 检测，特别是对早期卵巢癌(I期)的诊断也十分成功，提示此项技术还可望用于卵巢癌的早期或预警检测。之后，国际上先后又有系列的利用血清多肽图技术进行重大疾病诊断的论文发表。例如，2004年美国斯坦福大学的Soltys等人在Clinical CancerResearch上发表了通过血清多肽组图谱技术对鳞状上皮细胞癌进行诊断的结果(Soltys SG, Le QT, Shi G，et al. Clinical Cancer Research 2004 ； 10 :4806-4812.) ；2005 年台湾大学 Cheng AJ等在Clinical Chemistry上发表了他们利用血清多肽组图谱技术对口腔癌进行诊断的结果(Cheng AJ, Chen LC, Chien KY, et al. Clinical Chemistry 2005 ；51 :2236-2244.)。 此外，JCI、Mollecular & Cellular ftOteomics等杂志最近也发表了系列的通过血清多肽图技术对疾病进行诊断的研究结果(J Clin Invest 2006 ；116 =271-284 ；Mol Cell Proteomics 2006 ；5 1840-1852.)。以上表明，利用多肽图技术对临床上一些重大和疑难疾病进行诊断已经初露曙光，前景广阔。但是多肽图技术作为新生技术，还未成为肿瘤诊断的实用工具，表明它在技术上还存在一些瓶颈问题有待解决，还正在发展和成熟过程之中。 概括起来，多肽图技术应用于临床诊断主要存在两方面技术障碍。第一，血清多肽组快速分离和制备技术。它需要满足快速性、有效性、稳定性、标准化和通量化，才能真正符合未来临床诊断的需要；第二，多肽图中疾病特征峰的识别、鉴定和模型建立。它不同于单个疾病标志物的应用，而是数十甚至逾百个血清多肽的不断组合的变化。这样复杂的改变必须依靠生物信息学工具的应用，才可能识别出各种复杂疾病特征性的多肽组变化模式。在此基础上，才能获得标准化的多肽图疾病诊断模型，用于临床诊断和鉴别诊断，以及重大疾病的临床前预警。与其它技术比较癌症的早期发现对于其治疗和控制是至关重要的。尽管先进的诊断方法如CT、核磁共振、肿瘤特异性抗原检测等对于疾病诊断能力有了一定的提高，但在临床上还未能达到恶性肿瘤早期发现所需的灵敏度。高通量的基因组技术可以快速筛查癌细胞中的基因改变，如DNA芯片技术实现了在全基因组水平分析检测癌变过程中基因的异常活化或改变。但一些与肿瘤发生发展相关的改变可能与基因水平异常无关，而与基因表达产物——蛋白质的改变直接相关。酶联免疫吸附试验(ELISA)广泛用于在体液中单个、 特异性已知的标志物的检测，但在临床上应用还依赖于新的标志物发现。血清多肽组技术使用复合的标志物可以较单个标志物更为可靠和有效，而且所反映的不仅仅是传统概念上的肿瘤标志物。多肽组的疾病相关改变，可能是蛋白质过量表达和蛋白质异常表达在血清中的反映，也可能是在疾病状态下机体整体机能反应的体现，而且随着疾病的发生和发展被修饰或移除。通过质谱分析获得的多肽图需要数字化并经成熟的生物信息学分析工具进行诊断，可与一个细胞或一个组织或一个机体在“正常”条件下的参考图谱进行比较，从而鉴别疾病样本的血清多肽组图谱。肿瘤是威胁人类健康的第一大杀手，而且发病年龄越来越提前。大多数肿瘤患者在发现时多已处于晚期，因此早期诊断显得十分重要，对患者的愈后与生存意义重大，理论和现实意义明显。血清多肽图技术在癌症早期诊断中已经显示的价值超过了传统的标志物检测，在肿瘤早期诊断方面传出了令人振奋的信息，给相对沉寂的肿瘤诊断领域带来了可以寄托的希望。
技术实现思路
为了解决乳腺癌早期诊断的问题，本专利技术公开了一种特异性多肽，其氨基酸序列如序列表中的序列1和序列2所示。本专利技术还公开了的上述多肽在乳腺癌早期诊断中的用途。该用途是通过以下实验进行的。首先建立特征性的血清多肽图，通过生物信息学软件找到肿瘤特异性的多肽组，建立诊断模型，提供一种用于乳腺癌早期诊断的方法。本专利技术的特异性血清多肽是通过以下方法提取并筛选的。采用本申请人的另一专利申请“一种金属螯合纳米磁珠，其制备方法及应用” O00610002030. 1)中的方法，利用固相金属螯合磁珠试剂提取每例患者血清中的多肽，利用基质辅助激光解吸电离质谱分析获得血清多肽图，通过Bruker公司的 Cliprotools2. 0软件进行健康组与肿瘤组的比较分析、识别差异表达的多肽，建立模型，进行诊断。差异多肽可进一步通过傅立叶变换回旋共振质谱仪进行鉴定。本专利技术从多肽水平进行乳腺癌的早期诊断研究，对于筛选潜在的肿瘤药物靶标分子和功能蛋白质，研制和开发新的乳腺癌治疗药物，具有重要的意义，有巨大的市场前景和社会与经济效益。附图说明图 1 :NanoLC-FT-ICR MS/MS 鉴定的纤维蛋白原多肽序列为 SSSYSKQFTSSTSYNRGDS TFESKSYKMADEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRPV，单同位素分子量为 5900. 6956Da。(i)乳腺癌血清多肽碎片的色谱峰，箭头指的是分子量为5900. 6956Da的多肽。(ii)串联质谱图y离子结果。图 2 =NanoLC-FT-ICR MS/MS 鉴定的抗糜蛋白酶多肽序列为 LVETRTIVRFNRPFLMII VPTDTQNIFFMSKVTNPKQA，单同位素分子量为44本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张学敏，王娜，李爱玲，何昆，王杰，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院生物医学分析中心，
类型：发明
国别省市：
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