一种蛋白水解度的检测方法及用于检测的试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种蛋白水解度的检测方法及用于检测的试剂盒，包括溶解液、沉淀液、洗脱液、测定液及标准比对卡，首先制备标准曲线和标准对比卡，再检测样品中的蛋白水解度。本发明专利技术的技术方案不以测定水解后的氨基酸含量变化为基础，而是将样品中蛋白质析出后间接测定蛋白水解度，因此可抵抗多糖、脂类等多种有机物的干扰，适宜在含有多种有机物的混合物生产、加工、处理工艺中应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物分析化学领域，具体的说，涉及一种蛋白水解度的检测方法及用于检测的试剂盒。
技术介绍
蛋白质是由各种不同氨基酸通过肽键相连形成一级结构后再螺旋缠绕组成的高级结构，蛋白质的水解度可以代表蛋白质在水解过程中肽键被裂解的程度。在实际生产中， 经常需要测定蛋白质的水解度来反映加工处理工艺的优劣或产品质量的好坏。目前国内、 外常用的方法主要有φΗ-state法、三硝基苯磺酸法、邻苯二甲醛法、水合茚三酮法、考马斯亮蓝法等，但这些方法都是以测定水解后的氨基酸含量的变化为基础或者直接测定样品中的蛋白质含量，比较适宜在单一蛋白质加工或氨基酸生产工艺中应用，而对含多种蛋白质或富含多种有机物的混合样品测定时，因存在大量的干扰源，如多糖、脂类等，使测定结果与真实值之间存在很大的差异，因此实际生产中需要更加精确、方便的检测系统与方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种能够在混合样品中检测蛋白质水解度的方法及用于检测的试剂盒，可用于餐厨垃圾处理、蛋白饲料生产、食品有机废水处理等复杂有机物加工和处理过程中蛋白质水解情况的检测。本专利技术的目的通过下述技术方案予以实现一种蛋白水解度的检测方法，按照下述步骤进行(一)制备标准曲线和标准对比卡配置溶解液，并将酪蛋白溶于溶解液中，定容得到标准蛋白溶液，例如称取酪蛋白 O. 25克溶于溶解液中，定容到25毫升配成标准蛋白溶液配置测定液配制质量百分数为10%的氢氧化钾水溶液，待用，再称取氯化铜、酒石酸钾钠和碘化钾溶解于蒸馏水中，搅拌加入质量百分数为10 %的氢氧化钠水溶液，最后加蒸馏水定容到目标体积，使得各个溶质的最终质量百分数分别为氯化铜O. 15%、酒石酸钾钠O. 6%、碘化钾O. I %和氢氧化钾3% ；将标准蛋白溶液、溶解液和测定液配置成不同浓度的系列溶液，在分光光度计可见光区540nm处测定吸光度，以标准蛋白质含量为横坐标、测定的吸光度值为纵坐标，绘制成标准曲线，制成标准比对卡。例如按照下表进行混合均匀后，室温下放置30分钟后，在分光光度计可见光区540nm处测定吸光度。以标准蛋白质含量为横坐标、测定的吸光度值为纵坐标,绘制成标准曲线,制成标准比对卡权利要求1.一种蛋白水解度的检测方法，其特征在于，按照下述步骤进行(一)制备标准曲线和标准对比卡配置溶解液，并将酪蛋白溶于溶解液中，定容得到标准蛋白溶液；再配置测定液；然后将标准蛋白溶液、溶解液和测定液配置成不同浓度的系列溶液，在分光光度计可见光区 540nm处测定吸光度，以标准蛋白质含量为横坐标、测定的吸光度值为纵坐标，绘制成标准曲线，制成标准比对卡(二)检测样品中蛋白的水解度分别向加工前与加工后的样品中加入沉淀液后静置，离心后去除上层清液，再向沉淀中加入洗脱液，离心后去除上层清液，然后向沉淀中加入溶解液，待溶解后向其中加入测定液，静置后，在540nm波长下进行吸光度测定，与标准比对卡进行比对，确定加工前后蛋白含量，二者的差值除以加工前蛋白含量即可计算出蛋白水解程度。2.根据权利要求I所述的一种蛋白水解度的检测方法，其特征在于，所述溶解液选用氢氧化钾的水溶液；所述洗脱液选用乙醇和水的混合溶液；所述沉淀液选用三氯乙酸的水溶液。3.根据权利要求2所述的一种蛋白水解度的检测方法，其特征在于，所述溶解液选用0.05摩尔/升的氢氧化钾水溶液；所述洗脱液为将分析纯乙醇与蒸馏水按19 I体积比混合后得到；所述沉淀液按照下述方法制备，将固态三氯乙酸加热至60°C以上实现由固态向液态的转变后，再按照液态三氯乙酸和水3 17的体积比与蒸馏水互溶；所述标准蛋白溶液按照下述方法制备，称取酪蛋白0. 25克溶于溶解液中，定容到25毫升配成标准蛋白溶液。4.根据权利要求I所述的一种蛋白水解度的检测方法，其特征在于，所述测定液按照下述步骤制备配制质量百分数为10%的氢氧化钾水溶液，待用，再称取氯化铜、酒石酸钾钠和碘化钾溶解于蒸馏水中，搅拌加入质量百分数为10 %的氢氧化钠水溶液，最后加蒸馏水定容到目标体积，使得各个溶质的最终质量百分数分别为氯化铜0. 15%、酒石酸钾钠0.6%、碘化钾0. 1%和氢氧化钾3%。5.根据权利要求I所述的一种蛋白水解度的检测方法，其特征在于，将加工前与加工后的样品溶于溶解液中后，再吸取样品溶液加入沉淀液，进行检测。6.一种用于检测蛋白水解度的试剂盒，其特征在于，包括溶解液、沉淀液、洗脱液、测定液及标准比对卡，其中所述溶解液选用氢氧化钾的水溶液所述洗脱液选用乙醇和水的混合溶液所述沉淀液选用三氯乙酸的水溶液所述测定液按照下述步骤进行制备配制质量百分数为10%的氢氧化钾水溶液，待用，再称取氯化铜、酒石酸钾钠和碘化钾溶解于蒸馏水中，搅拌加入质量百分数为10%的氢氧化钠水溶液，最后加蒸馏水定容到目标体积，使得各个溶质的最终质量百分数分别为氯化铜0. 15%、酒石酸钾钠0. 6%、碘化钾0. I %和氢氧化钾3%所述标准比对卡按照下述方法进行测定将酪蛋白溶于溶解液中，定容得到标准蛋白溶液；将标准蛋白溶液、溶解液和测定液配置成不同浓度的系列溶液，在分光光度计可见光区540nm处测定吸光度，以标准蛋白质含量为横坐标、测定的吸光度值为纵坐标，绘制成标准曲线，制成标准比对卡。7.根据权利要求6所述的一种用于检测蛋白水解度的试剂盒，其特征在于，所述溶解液选用0. 05摩尔/升的氢氧化钾水溶液；所述洗脱液选用乙醇和水的混合溶液，将分析纯乙醇与蒸馏水按19 I体积比混合后得到；所述沉淀液选用三氯乙酸的水溶液，将固态三氯乙酸加热至60°C以上实现由固态向液态的转变后，再按照液态三氯乙酸和水3 17的体积比与蒸馏水互溶；所述标准蛋白溶液按照下述方法制备，称取酪蛋白0. 25克溶于溶解液中，定容到25毫升配成标准蛋白溶液。8.一种利用如权利要求6所述的试剂盒进行蛋白水解度检测的方法，其特征在于，分别向加工前与加工后的样品中加入沉淀液后静置，离心后去除上层清液，再向沉淀中加入洗脱液，离心后去除上层清液，然后向沉淀中加入溶解液，待溶解后向其中加入测定液，静置后，在540nm波长下进行吸光度测定，与标准比对卡进行比对，确定加工前后蛋白含量， 二者的差值除以加工前蛋白含量即可计算出蛋白水解程度。9.根据权利要求8所述的利用试剂盒进行蛋白水解度检测的方法，其特征在于，测试中也可将加工前与加工后的样品溶于溶解液中后，再吸取样品溶液加入沉淀液，进行检测。全文摘要本专利技术公开了一种蛋白水解度的检测方法及用于检测的试剂盒，包括溶解液、沉淀液、洗脱液、测定液及标准比对卡，首先制备标准曲线和标准对比卡，再检测样品中的蛋白水解度。本专利技术的技术方案不以测定水解后的氨基酸含量变化为基础，而是将样品中蛋白质析出后间接测定蛋白水解度，因此可抵抗多糖、脂类等多种有机物的干扰，适宜在含有多种有机物的混合物生产、加工、处理工艺中应用。文档编号G01N21/31GK102590107SQ20121000704公开日2012年7月18日 申请日期2012年1月9日 优先权日2012年1月9日专利技术者刘刚, 宋志敏, 李岚, 王茉, 陈元政, 陈冠益, 颜蓓蓓 申请人:天津大学本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈冠益，刘刚，李岚，陈元政，宋志敏，王茉，颜蓓蓓，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：