结核病RV2386C蛋白、组合物及其用途制造技术

本发明专利技术涉及结核病RV2386C蛋白、组合物及其用途，还涉及多肽，其包含(i)Rv2386c蛋白序列；(ii)Rv2386c蛋白序列的变体；或者(iii)Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段。本发明专利技术的其它方面涉及相关的多核苷酸、融合蛋白以及治疗或预防结核病的方法。

Tuberculosis RV2386C protein, composition and use thereof

The present invention relates to TB RV2386C protein, composition and use thereof, also relates to the polypeptide, comprising (I) Rv2386c protein sequence; (II) Rv2386c protein sequence variants; or (III) immunogenic fragment of Rv2386c protein sequence. Other aspects of the present invention relate to related polynucleotides, fusion proteins, and methods of treating or preventing tuberculosis.

【技术实现步骤摘要】
结核病RV2386C蛋白、组合物及其用途本申请是申请日为2009年7月24目的中国专利申请200980138405.9“结核病RV2386C蛋白、组合物及其用途”的分案申请。
本专利技术涉及用于治疗或预防结核病(特别是用于治疗或预防潜伏结核病以及预防或延缓结核病的再活化)的多肽和多核苷酸(以及涉及相关方法)。本专利技术进一步涉及包含所述多肽和多核苷酸的药物和免疫原性组合物，以及涉及结核病(特别是潜伏结核病)的诊断方法。
技术介绍
结核病(TB)是一种由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)和其它分枝杆菌种类的感染引起的慢性传染疾病。它是世界上发展中国家的一种主要疾病，并成为发达区域日益严重的问题。超过20亿人被认为感染了TB杆菌，每年新增约920万TB病例和170万死亡病例。其中10％感染TB杆菌的人会发展为活动性TB，每位患有活动性TB的人平均每年感染10-15其他人。尽管在全球的年均发病率已经达到顶峰，由于人口增长，死亡数和病例数依然在上升(WorldHealthOrganisationTuberculosisFacts2008)。结核分枝杆菌通过呼吸道途径感染个体。肺泡巨噬细胞吸入该细菌，但它能够通过抑制具有酸性溶酶体的吞噬体融合存活和增殖。随后发生涉及CD4+和CD8+T细胞的复杂免疫应答，最终导致肉芽肿的形成。结核分枝杆菌成为病原体的关键在于该分离但未根除的细菌可长期存在，使得个体容易在随后发展为活动性TB。在感染后的第一年，少于5％的感染个体会发展为活动性TB。该肉芽肿可存在数十年，并被认为在缺乏氧和营养的休眠状态下包含活结核分枝杆菌。然而，最近表明，大部分处于休眠状态的细菌位于遍布体内的非巨噬细胞的细胞类型中(Locht等人，ExpertOpin.Biol.Ther.20077(11)：1665-1677)。当宿主的天然免疫和病原体之间的平衡发生变化时(例如由于免疫抑制事件)则发展为活动性TB(AndersonPTrendsinMicrobiology200715(1)：7-13；EhlersSInfection200937(2)：87-95)。也已提出描述潜伏TB和活动性TB之间的平衡的动力学假设(CardanaP-JInflammation&Allergy-DrugTargets20066：27-39；CardanaP-JInfection200937(2)：80-86)。尽管感染在相当长时间内可以是无症状的，活动性疾病最常显现为肺的急性炎症，从而导致疲劳、体重下降、发烧和持续咳嗽。如果未经治疗，通常可导致严重的并发症和死亡。结核病通常可采用长期抗生素疗法进行控制，尽管该种治疗并不足以防止该疾病的扩散。感染的个体可以是无症状的，但在一定时间具有传染性。此外，尽管对治疗方案的顺应性是关键的，但患者的行为很难监测。一些患者并未完成治疗周期，这可能导致无效治疗和耐药性的形成。多重耐药性TB(MDR-TB)是一种对一线药物没有应答的形式。所有TB病例中有5％是MDR-TB，每年估计有490,000新MDR-TB病例。当耐受针对MDR-TB开发的二线药物时，产生广泛耐药TB(XDR-TB)。据估计每年产生40,000实际无法治疗的XDR-TB新病例(WorldHealthOrganisationTuberculosisFacts2008)。即使完成抗生素治疗的整个疗程，结核分枝杆菌的感染可能无法从感染个体根除，并可保留为能够再活化的潜伏感染。为了控制结核病扩散，对疾病的有效免疫和准确早期诊断是最为重要的。潜伏TB感染的诊断通常是采用结核菌素皮试来完成的，该皮试包括皮内暴露至结核菌素蛋白-纯化的衍生物(PPD)。抗原特异性T细胞应答导致注射后在注射部位48-72小时的可测量硬结，其表示暴露至分枝菌抗原。然而，该测试的灵敏度和特异性是一个问题，且接种了BCG的个体并不能始终容易地与感染个体相区别(这对于BCG无法对潜伏感染形成保护的事实特别重要)。一般而言，已经接受BCG但未被结核分枝杆菌感染的个体显示了直径小于10mm的PPD反应，而具有直径在10mm以上的PPD反应的人被认为已经被结核分枝杆菌感染。然而，这一原则不适用于由于HIV感染而免疫抑制的个体，后者可导致直径小于10mm的PPD反应；或者在发病地区，被非结核分枝杆菌感染的人能显示直径在10mm以上的PPD反应。近些年在体外基于T细胞的测定上已经取得了进展，该测定基于干扰素-gamma释放并采用比PPD对结核分枝杆菌更具特异性的抗原，称为ESAT-6和CFP-10。这些高特异性测试看来至少具有结核菌素皮试的灵敏度，且由于BCG接种而显示更少的交叉反应性。有关潜伏TB诊断的最近综述参见PaiM等人ExpertRev.Mol.Diagn.20066(3)：413-422。然而，由于ESAT-6/CFP-10是初期抗原，基于ESAT-6/CFP-10的测定仅能在新近感染的人员中最佳实施。因此，与潜伏结核病特异性相关的新抗原的鉴定有助于能够检测更长期潜伏感染的更灵敏测定的开发。对于治疗和预防结核病(特别是治疗和预防潜伏TB以及预防TB的再活化)的有效策略存在着需求。
技术实现思路
本专利技术总体涉及作为TB抗原(特别是与潜伏TB相关的抗原)的Rv2386c的鉴定，并涉及预防和治疗TB(尤其是预防和治疗潜伏TB以及预防或延缓TB再活化)的相关方法和用途。本专利技术提供了分离的多肽，其包含：(i)Rv2386c蛋白序列；(ii)Rv2386c蛋白序列的变体；或者(iii)Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段。本专利技术还提供了多肽，其包含：(i)Rv2386c蛋白序列；(ii)Rv2386c蛋白序列的变体；或者(iii)Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段；该多肽用作药剂。本专利技术另一方面涉及治疗或预防TB的方法，其包括向有此需要的对象施用安全和有效量的多肽，该多肽包含：(i)Rv2386c蛋白序列；(ii)Rv2386c蛋白序列的变体；或者(iii)Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段；其中所述多肽诱导免疫应答，特别是抗结核分枝杆菌的免疫应答。多肽在用于制备治疗或预防TB的药物中的用途，该多肽包含：(i)Rv2386c蛋白序列；(ii)Rv2386c蛋白序列的变体；或者(iii)Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段；该用途代表了本专利技术的另一方面。本专利技术提供了包含编码多肽的核酸序列的分离多核苷酸，该多肽包含：(i)Rv2386c蛋白序列；(ii)Rv2386c蛋白序列的变体；或者(iii)Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段。还提供了包含编码多肽的核酸序列的分离多核苷酸，该多肽包含：(i)Rv2386c蛋白序列；(ii)Rv2386c蛋白序列的变体；或者(iii)Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段；该多核苷酸用作药剂。本专利技术另一方面涉及治疗或预防TB的方法，其包括向有此需要的对象施用安全和有效量的包含编码多肽的核酸序列的多核苷酸，该多肽包含：(i)Rv2386c蛋白序列；(ii)Rv2386c蛋白序列的变体；或者(iii)Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段；其中所述多核苷酸诱导免疫应答，特别是抗结核分枝杆菌的免疫应答。包含本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离多肽，其包含：(i) Rv2386c蛋白序列；(ii) Rv2386c蛋白序列的变体；或者(iii) Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段。

【技术特征摘要】
2008.07.25 US 61/0836991.分离多肽，其包含：(i)Rv2386c蛋白序列；(ii)Rv2386c蛋白序列的变体；或者(iii)Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段。2.如权利要求1所述的多肽，其用作药剂。3.如权利要求1或2所述的多肽，其包含Rv2386c蛋白序列。4.如权利要求3所述的多肽，其由Rv2386c蛋白序列组成。5.如权利要求1或2所述的多肽，其包含Rv2386c蛋白序列的变体。6.如权利要求5所述的多肽，其包含与Rv2386c蛋白序列具有至少70%的一致性的Rv2386c蛋白序列的变体。7.如权利要求6所述的多肽，其包含与Rv2386c蛋白序列具有至少90%的一致性的Rv2386c蛋白序列的变体。8.如权利要求7所述的多肽，其包含与Rv2386c蛋白序列具有至少95%的一致性的Rv2386c蛋白序列的变体。9.如权利要求5所述的多肽，其由Rv2386c蛋白序列的变体组成。10.如权利要求9所述的多肽，其由与Rv2386c蛋白序列具有至少70%的一致性的Rv2386c蛋白序列的变体组成。11.如权利要求10所述的多肽，其由与Rv2386c蛋白序列具有至少90%的一致性的Rv2386c蛋白序列的变体组成。12.如权利要求11所述的多肽，其由与Rv2386c蛋白序列具有至少95%的一致性的Rv2386c蛋白序列的变体组成。13.如权利要求1或2所述的多肽，其包含Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段。14.如权利要求13所述的多肽，其包含来自Rv2386c蛋白序列的最少10个氨基酸残基的免疫原性片段。15.如权利要求14所述的多肽，其包含来自Rv2386c蛋白序列的最少20个氨基酸残基的免疫原性片段。16.如权利要求15所述的多肽，其包含来自Rv2386c蛋白序列的最少50个氨基酸残基的免疫原性片段。17.如权利要求13所述的多肽，其由Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段组成。18.如权利要求17所述的多肽，其由来自Rv2386c蛋白序列的最少10个氨基酸残基的免疫原性片段组成。19.如权利要求18所述的多肽，其由来自Rv2386c蛋白序列的最少20个氨基酸残基的免疫原性片段组成。20.如权利要求19所述的多肽，其由来自Rv2386c蛋白序列的最少50个氨基酸残基的免疫原性片段组成。21.如权利要求1-20中任意一项所述的多肽，其中该Rv2386c蛋白序列来自结核分枝杆菌。22.如权利要求21所述的多肽，其中该Rv2386c蛋白具有SEQIDNO:1的序列。23.如权利要求1-22中任意一项所述的多肽，其用于治疗或预防结核病。24.如权利要求23所述的多肽，其用于治疗结核病。25.如权利要求23所述的多肽，其用于预防结核病。26.如权利要求23所述的多肽，其用于治疗潜伏结核病。27.如权利要求23所述的多肽，其用于预防潜伏结核病。28.如权利要求23所述的多肽，其用于预防结核病的再活化。29.如权利要求23所述的多肽，其用于延缓结核病的再活化。30.如权利要求23-29中任意一项所述的多肽，其中该结核病与结核分枝杆菌感染相关。31.包含编码多肽的核酸序列的分离多核苷酸，该多肽包含：(i)Rv2386c蛋白序列；(ii)Rv2386c蛋白序列的变体；或者(iii)Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段。32.如权利要求31所述的多核苷酸，其用作药剂。33.如权利要求31或32所述的多核苷酸，其包含编码多肽的核酸序列，该多肽包含Rv2386c蛋白序列。34.如权利要求31或32所述的多核苷酸，其包含编码多肽的核酸序列，该多肽包含Rv2386c蛋白序列的变体。35.如权利要求34所述的多核苷酸，其包含编码多肽的核酸序列，该多肽包含与Rv2386c蛋白序列具有至少70%的一致性的Rv2386c蛋白序列的变体。36.如权利要求31或32所述的多核苷酸，其包含编码多肽的核酸序列，该多肽包含Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段。37.如权利要求36所述的多核苷酸，其包含编码多肽的核酸序列，该多肽包含来自Rv2386c蛋白序列的至少10个氨基酸残基的免疫原性片段。38.如权利要求31-37中任意一项所述的多核苷酸，其包含编码多肽的核酸序列，该多肽由以下组成：(i)Rv2386c蛋白序列；(ii)Rv2386c蛋白序列的变体；或者(iii)Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段。39.如权利要求38所述的多核苷酸，其由编码多肽的核酸序列组成，该多肽由以下组成：(i)Rv2386c蛋白序列；(ii)Rv2386c蛋白序列的变体；或者(iii)Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段。40.如权利要求31-39中任意一项所述的多核苷酸，其中该Rv2386c蛋白序列来自结核分枝杆菌。41.如权利要求40所述的多核苷酸，其中该Rv2386c蛋白具有SEQIDNO:1的序列。42.如权利要求41所述的多核苷酸，其包含SEQIDNO:2的序列或其片段。43.如权利要求31-42中任意一项所述的多核苷酸，其用于治疗或预防结核病。44.如权利要求43所述的多核苷酸，其用于治疗结核病。45.如权利要求43所述的多核苷酸，其用于预防结核病。46.如权利要求43所述的多核苷酸，其用于治疗潜伏结核病。47.如权利要求43所述的多核苷酸，其用于预防潜伏结核病。48.如权利要求43所述的多核苷酸，其用于预防结核病的再活化。49.如权利要求43所述的多核苷酸，其用于延缓结核病的再活化。50.如权利要求43-49中任意一项所述的多核苷酸，其中该结核病与结核分枝杆菌感染相关。51.药物组合物，其包含：(a)多肽，其包含：(i)Rv2386c蛋白序列；(ii)Rv2386c蛋白序列的变体；或者(iii)Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段；或者(b)包含编码(a)的多肽的核酸序列的多核苷酸；以及(c)药学上可接受的载体或赋形剂。52.免疫原性组合物，其包含：(a)多肽，其包含：(i)Rv2386c蛋白序列；(ii)Rv2386c蛋白序列的变体；或者(iii)Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段；或者(b)包含编码(a)的多肽的核酸序列的多核苷酸；以及(c)非特异性免疫应答增强剂。53.如权利要求52所述的免疫原性组合物，其中该非特异性免疫应答增强剂为佐剂。54.包含编码多肽的核酸序列的表达载体，该多肽包含：(i)Rv2386c蛋白序列；(ii)Rv2386c蛋白序列的变体；或者(iii)Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段。55.以权利要求54所述的表达载体转化的分离宿主细胞。56.重组表达多肽的分离宿主细胞，该多肽包含：(i)Rv2386c蛋白序列；(ii)Rv2386c蛋白序列的变体；或者(iii)Rv2386c蛋白序列的免疫原性片段。57.如权利要求56所述的分离宿主细胞，其选自大肠杆菌、酵母和哺乳动物细胞。58.如权利要求56所述的分离宿主细胞，其为卡介杆菌。59.生产多肽的方法，该多肽包含：(...

【专利技术属性】
技术研发人员：J布朗，P梅滕斯，D墨菲，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，葛兰素集团有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时,BE