人ＣＸＣＬ１蛋白质的免疫学测定方法技术

本发明专利技术的课题在于高灵敏度地检测人ＣＸＣＬ１蛋白质。本发明专利技术提供了一种人ＣＸＣＬ１蛋白质的免疫学测定方法，所述人ＣＸＣＬ１蛋白质的免疫学测定方法通过使用２种以上的抗人ＣＸＣＬ１单克隆抗体或其片段，测定样品中的人ＣＸＣＬ１或其片段，所述２种以上的抗人ＣＸＣＬ１单克隆抗体或其片段特异性识别构成ＣＸＣＬ１蛋白质的氨基酸序列的部分序列即序列号１～３表示的氨基酸序列中的任一序列区、且特异性识别各个不同的序列区，另外，本发明专利技术提供一种具有新氨基酸序列的单克隆抗体或其片段，所述新氨基酸序列特异性识别序列号１～３表示的氨基酸序列中的任一序列区。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种测定人CXCLl蛋白质(以下记作人CXCL1)的方法。更详细而言， 本专利技术涉及一种测定人CXCLl的免疫学测定方法，所述免疫学测定方法组合使用单克隆抗体或其片段，所述单克隆抗体或其片段与构成人CXCLl的氨基酸序列上的特定3处的部分序列区中的任一个特异性结合。另外，本专利技术涉及可以在上述测定人CXCLl蛋白质的方法中使用的、与人CXCLl特异性结合的单克隆抗体或其片段。
技术介绍
人CXCLl是属于C)(C家族的趋化因子的一种。已知该蛋白质在血液中存在于血小板内，与其他CXC家族同样地在炎症反应时过量表达。近年来，有报道称上述人CXCLl作为肿瘤相关因子发挥作用。因此，人们期待通过从尿中定量地检测可以成为尿路上皮癌的标记物(非专利文献1、专利文献1)。进而，有报道指出在大肠癌、卵巢癌、恶性黑色素瘤等其他恶性肿瘤患者的组织或血液中，人CXCLl在基因水平、蛋白质水平上发生变化(非专利文献2、非专利文献3、非专利文献4)，潜在地可以极早期及/或早期检测出尿路上皮癌及上述癌。然而，在使用现有的酶免疫学测定法的测定法中，检测上述癌所需要的灵敏度不足。例如，专利文献1中记载的R&DSYSTEMS公司(以下R&DSYSTEMS公司)制的人CXCLl 测定用试剂盒的检出限浓度为20pg/mL左右，而健康人的尿中的人CXCLl浓度达不到上述检出限。因此，期待更高灵敏度的人CXCLl的测定法。专利文献1 :W02007/026895非专利文献 1 :Hiroaki Kawanishi et al, 2008, Clinical Cancer Research, vol. 14，No.9,2579-2587非专利文献2 =Gong Yang et al，2006，PNAS, vol. 103，No. 44，16472-16477非专利文献 3 :Yu Wen et al，2006，Clinical Cancer Research, vol. 12，No. 20， 5951-5959__专禾U文献4 :Jing Luan et al, 1997, Journal of Leukocyte Biology, vol. 62, No.5,588-59
技术实现思路
因此，本专利技术的一个方案的目的在于提供一种以更高灵敏度检测人CXCLl的免疫学测定法。更具体而言，本专利技术的目的在于，通过组合抗体或抗原识别部分的免疫学测定法，获得以更高灵敏度检测人CXCLl的方法，所述抗体或抗原识别部分与构成人CXCLl的氨基酸序列中的特定3处的序列中的任一个特异性结合。另外，本专利技术的另一个方案的目的在于提供特异性识别人CXCLl的单克隆抗体或其片段。更具体而言，本专利技术的另一个目的在于提供一种单克隆抗体或其片段，所述单克隆抗体或其片段可以用于上述以更高灵敏度检测人CXCLl的方法、且含有特异性识别人CXCLl的新氨基酸序列、并且与现有抗体相比具有较高亲和性。本专利技术人等为了解决上述课题进行了深入研究，结果发现通过组合单克隆抗体或抗原识别部分进行免疫学测定，能够以比现有技术更高的灵敏度检测人CXCLl，所述单克隆抗体或抗原识别部分与构成人CXCLl的氨基酸序列中的特定3处的部分序列区特异性结合。另外，成功地制备了含有与上述人CXCLl上的3处部分序列特异性结合的新氨基酸序列的单克隆抗体、及产生该抗体的杂交瘤。进而，分离了编码构成该抗体的氨基酸序列的基因，确定其碱基序列。由此，可以制备重组抗体及其重组片段。本专利技术是基于上述发现而完成的，即，提供以下(1) (15)。(1) 一种人CXCLl蛋白质的免疫学测定方法，其特征在于，使用2种以上的抗人 CXCLl单克隆抗体或其片段，测定样品中的人CXCLl或其片段，所述2种以上的抗人CXCLl 单克隆抗体或其片段特异性识别构成人CXCLl蛋白质的氨基酸序列的部分序列即序列号 1 3表示的氨基酸序列中的任一序列区、且特异性识别各个不同的序列区。(2)如(1)所述的人CXCLl蛋白质的免疫学测定方法，其特征在于，使用特异性识别序列号3表示的氨基酸序列区的抗人CXCLl单克隆抗体或其片段，测定样品中的人CXCLl 蛋白质或其片段。(3)如(1)或(2)所述的人CXCLl蛋白质的免疫学测定方法，其特征在于，使用特异性识别序列号1表示的氨基酸序列区的抗人CXCLl单克隆抗体或其片段及特异性识别序列号3表示的氨基酸序列区的抗人CXCLl单克隆抗体或其片段，测定样品中的人CXCLl蛋白质或其片段。(4)如(1)或(2)所述的人CXCLl蛋白质的免疫学测定方法，其特征在于，使用特异性识别序列号2表示的氨基酸序列区的抗人CXCLl单克隆抗体或其片段及特异性识别序列号3表示的氨基酸序列区的抗人CXCLl单克隆抗体或其片段，测定样品中的人CXCLl蛋白质或其片段。(5)如(1) 中任一项所述的人CXCLl蛋白质的免疫学测定方法，其中，所述样品为术后收集的组织、血液、血清、血浆、尿、脊髓液、唾液、淋巴液、泪液或精液。(6) 一种抗人CXCLl单克隆抗体或其片段，是特异性识别序列号3表示的构成人 CXCLl蛋白质的氨基酸序列的部分序列的单克隆抗体或其片段，在其轻链上，CDRl含有序列号4表示的氨基酸序列，CDR2含有序列号5表示的氨基酸序列，及CDR3含有序列号6表示的氨基酸序列，在重链上，CDRl含有序列号7表示的氨基酸序列，CDR2含有序列号8表示的氨基酸序列，及CDR3含有序列号9表示的氨基酸序列。(7)如(6)所述的抗人CXCLl单克隆抗体或其片段，其中，轻链可变区含有序列号 10表示的氨基酸序列，重链可变区含有序列号11表示的氨基酸序列。(8) 一种抗人CXCLl单克隆抗体或其片段，是特异性识别序列号1表示的构成人 CXCLl蛋白质的氨基酸序列的部分序列的单克隆抗体或其片段，在其轻链上，CDRl含有序列号12表示的氨基酸序列，CDR2含有序列号13表示的氨基酸序列，及CDR3含有序列号14 表示的氨基酸序列，在重链上，CDRl含有序列号15表示的氨基酸序列，CDR2含有序列号16 表示的氨基酸序列，及CDR3含有序列号17表示的氨基酸序列。(9)如⑶所述的抗人CXCLl单克隆抗体或其片段，其中，轻链可变区含有序列号 18表示的氨基酸序列，重链可变区含有序列号19表示的氨基酸序列。(10) 一种抗人CXCLl单克隆抗体或其片段，是特异性识别序列号3表示的构成人 CXCLl蛋白质的氨基酸序列的部分序列的单克隆抗体或其片段，在其轻链上，CDRl含有序列号20表示的氨基酸序列，CDR2含有序列号21表示的氨基酸序列，及CDR3含有序列号22 表示的氨基酸序列，在重链上，CDRl含有序列号23表示的氨基酸序列，CDR2含有序列号M 表示的氨基酸序列，及CDR3含有序列号25表示的氨基酸序列。(11)如(10)所述的抗人CXCLl单克隆抗体或其片段，其中，轻链可变区含有序列号沈表示的氨基酸序列，重链可变区含有序列号27表示的氨基酸序列。(12) 一种抗人CXCLl单克隆抗体或其片段，是特异性识别序列号2表示的构成人 CXCLl蛋白质的氨基酸序列的部分序列的单克隆抗体或其片段，在其轻链上，CDRl含有序列本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种人ＣＸＣＬ１蛋白质的免疫学测定方法，其特征在于，使用２种以上的抗人ＣＸＣＬ１单克隆抗体或其片段，测定样品中的人ＣＸＣＬ１或其片段，所述２种以上的抗人ＣＸＣＬ１单克隆抗体或其片段特异性识别构成ＣＸＣＬ１蛋白质的氨基酸序列的部分序列即序列号１～３表示的氨基酸序列中的任一序列区，且特异性识别各个不同的序列区。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：金森智子，
申请(专利权)人：东丽株式会社，
类型：发明
国别省市：JP