一种蛇毒镇痛多肽纳米囊及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种蛇毒镇痛多肽纳米囊及其制备方法和应用，制备步骤如下：(1)将囊材用溶剂制成2～10％质量分数的囊材溶液，加入0.5～5％质量分数的乳化剂制成混合液；(2)将蛇毒镇痛多肽用pH4.5～7.5的磷酸缓冲液溶解，配制成5～20％质量分数的溶液，与囊材混合液按体积比1∶3～10混合，搅拌乳化0.5～2小时，形成初乳，再与含0.1～1％质量分数的另一囊材的水溶液按体积比1∶1～10混合，搅拌乳化0.5～2小时，形成复乳；(3)调节复乳pH为2～6，过微孔滤膜，加入复乳体积5～20倍的水，静置分离，沉淀部分冷冻干燥，即制得纳米囊，其用于镇痛药品，提高了蛇毒镇痛多肽的稳定性和镇痛效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药制造领域，具体涉及一种蛇毒镇痛多肽纳米囊制备方法及其用于镇痛药物的应用。
技术介绍
疼痛是机体受到伤害性刺激后的一种保护性反应，也是许多疾病常见的症状之一。疼痛不仅使患者感到痛苦.还可能引起生理功能紊乱，剧烈的疼痛甚至可导致休克，故须合理使用药物缓解疼痛，防止可能产生的生理功能紊乱。目前临床上所用的镇痛药主要有阿片类镇痛药和非阿片类镇痛药，前者虽然具有较好的镇痛效果，但长期使用后容易产生依赖性，故在临床应用上受到严格的限制；后者主要是阿司匹林等解热镇痛药，仅限于轻度疼痛的治疗。蛇毒是所发现的非成瘾性镇痛药，由于蛇毒中含有多种生物活性蛋白，且蛇毒种类众多，是天然蛋白的贮藏库，为镇痛多肽的筛选提供了较大的可能。眼镜蛇神经毒素是最早发现的眼镜蛇毒中镇痛多肽。王晓辉等报道自尖吻蝮蛇毒中分离出镇痛组分(王晓辉， 王化丽，李旭.尖吻蝮蛇蛇毒中镇痛成分的研究.中国生化药物杂志，2001,22 ) :198 199)，叶勇等报道了从江浙蝮蛇毒中分离出一种碱性多肽，发现其毒性低，无耐受和依赖性，并有中枢镇痛作用(叶勇，姚广涛，王泽时.江浙蝮蛇毒镇痛组分的分离纯化和理化性质.中国药理与毒理学杂志，2004，18 (6) =453-459) 申请号2011100656 . 1公开了一种眼镜蛇毒直接加热制成镇痛药物的方法，但蛇毒未经纯化，镇痛多肽含量低。由于蛇毒多肽在体内易于降解，加上分子量较大，难以透膜吸收，因此其生物利用率不高，镇痛效果欠佳。目前尚无将蛇毒多肽分离纯化，制成纳米囊的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种蛇毒镇痛多肽纳米囊及其制备方法和应用。该方法是针对蛇毒镇痛多肽，利用高分子囊材的自组装作用，制备蛇毒镇痛多肽纳米囊，提高了蛇毒多肽的稳定性，并易被细胞直接吸收，发挥更好的镇痛效果。本专利技术的目的通过下述技术方案实现—种蛇毒镇痛多肽纳米囊的制备方法，包括如下步骤(1)将囊材用溶剂制成2 10%质量分数的囊材溶液，加入0. 5 5%质量分数的乳化剂制成混合液，所述乳化剂为非离子表面活性剂；(2)将蛇毒镇痛多肽用pH4. 5 7. 5的磷酸缓冲液溶解，配制成5 20%质量分数的溶液，与囊材混合液按体积比1 3 10混合，搅拌乳化0.5 2小时，形成初乳，再与含0.1 质量分数的另一囊材的水溶液按体积比1 1 10混合，搅拌乳化0.5 2小时，形成复乳；(3)调节复乳PH为2 6，过微孔滤膜，加入复乳体积5 20倍的水，静置分离， 沉淀部分冷冻干燥，即制得蛇毒镇痛多肽纳米囊。优选地，步骤(1)、(2)所述囊材选自聚乳酸、聚羟基乙酸、多聚赖氨酸、多聚谷氨酸、聚酸酐、聚乙二醇、聚己内酯、壳聚糖和海藻酸盐中的一种或几种。优选地，步骤(1)所述溶剂为丙酮、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯和二氯甲烷中的一种或几种。优选地，步骤(1)所述乳化剂为单甘酯、吐温20、吐温80、司盘60、蔗糖脂肪酸酯和泊洛沙姆中的一种或几种。优选地，步骤⑴所述的蛇毒多肽为眼镜蛇或蝮蛇中分离的镇痛多肽。优选地，所述蛇毒镇痛多肽的制备方法为将眼镜蛇毒或蝮蛇毒用10倍重量、 PH4. 5 7. 5的磷酸缓冲液溶解后，过阳离子交换树脂柱CM-S印hadexC-25，用含Imol氯化钠的pH4. 5 7. 5的磷酸缓冲液洗脱，收集洗脱液，将其冷冻浓缩后过凝胶层析柱kphadex G-50，用0. Imol氯化钠的pH4. 5 7. 5的磷酸缓冲液洗脱，收集色谱峰，脱盐后冷冻干燥， 得蛇毒镇痛多肽。所述的蛇毒镇痛多肽纳米囊可制成镇痛药品，可制成外用、口服或注射用药剂型的任何一种。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果(1)本专利技术将蛇毒镇痛多肽分离纯化并制成镇痛药物，增强了药物的镇痛效果，并避免了其它成分引起的毒副作用。(2)本专利技术的蛇毒镇痛多肽纳米囊制剂，组织相容性好，易被组织细胞吸收，并提高了蛇毒镇痛多肽的稳定性。(3)本专利技术的蛇毒镇痛多肽纳米囊制备方法简单易行，可以快速、批量生产。 具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1(1)蛇毒镇痛多肽的制备方法眼镜蛇毒10g，用IOOg pH4. 5的磷酸缓冲液溶解后，过阳离子交换树脂柱CM-kphadex C_25，用含IM氯化钠的pH4. 5的磷酸缓冲液洗脱。 收集洗脱液冷冻浓缩后过凝胶层析柱kphadex G-50，用0. IM氯化钠的pH4. 5的磷酸缓冲液洗脱，收集色谱峰，脱盐后冷冻干燥，得蛇毒镇痛多肽2. 3g。(2)将聚乳酸用乙醇制成2%囊材溶液，加入0. 5%单甘酯制成囊材混合液；蛇毒镇痛多肽用PH4. 5的磷酸缓冲液溶解，配制成5%溶液，与囊材混合液按体积比1 3混合， 搅拌乳化0.5小时，形成初乳。再与含聚羟基乙酸的水溶液按体积比1 1混合，搅拌乳化2小时，形成复乳。(3)调节pH为2，过微孔滤膜，加入复乳体积5倍量的水，静置分离，沉淀部分冷冻干燥，即制得蛇毒镇痛多肽纳米囊。实施例2(1)蛇毒镇痛多肽的制备方法蝮蛇毒10g，用IOOg pH4. 5的磷酸缓冲液溶解后， 过阳离子交换树脂柱CM-kphadex C_25，用含IM氯化钠的pH4. 5的磷酸缓冲液洗脱。收集洗脱液冷冻浓缩后过凝胶层析柱kphadex G-50，用0. IM氯化钠的pH4. 5的磷酸缓冲液洗脱，收集色谱峰，脱盐后冷冻干燥，得蛇毒镇痛多肽2. 3g。(2)将多聚赖氨酸用二氯甲烷制成10%囊材溶液，加入5%吐温20制成混合液； 蛇毒镇痛多肽用PH5. 5的磷酸缓冲液溶解，配制成10%溶液，与囊材混合液按体积比1 5 混合，搅拌乳化1小时，形成初乳。再与含0.5%壳聚糖的水溶液按体积比1 5混合，搅拌乳化1小时，形成复乳。(3)调节pH为3，过微孔滤膜，加入复乳体积10倍量的水，静置分离，沉淀部分冷冻干燥，即制得蛇毒镇痛多肽纳米囊。实施例3(1)蛇毒镇痛多肽的制备方法同实施例1。(2)将聚酸酐用丙酮制成5%囊材溶液，加入吐温80制成混合液；蛇毒镇痛多肽用PH6.0的磷酸缓冲液溶解，配制成8%溶液，与囊材混合液按体积比1 10混合，搅拌乳化2小时，形成初乳。再与含0.3%聚乙二醇的水溶液按体积比1 10混合，搅拌乳化1 小时，形成复乳。(3)调节pH为6，过微孔滤膜，加入复乳体积20倍量的水，静置分离，沉淀部分冷冻干燥，即制得蛇毒镇痛多肽纳米囊。实施例4(1)蛇毒镇痛多肽的制备方法同实施例2。(2)将聚己内酯用乙酸乙酯制成3%囊材溶液，加入2%司盘60制成混合液；蛇毒镇痛多肽用PH7. 5的磷酸缓冲液溶解，配制成6%溶液，与囊材混合液按体积比1 6混合， 搅拌乳化1小时，形成初乳。再与含0.8%多聚谷氨酸的水溶液按体积比1 8混合，搅拌乳化0.5小时，形成复乳。(3)调节pH为5，过微孔滤膜，加入复乳体积12倍量的水，静置分离，沉淀部分冷冻干燥，即制得蛇毒镇痛多肽纳米囊。实施例5(1)蛇毒镇痛多肽的制备方法同实施例2。(2)将海藻酸钠用异丙醇制成7%囊材溶液，加入蔗糖脂肪酸酯制成混合液； 蛇毒镇痛多肽用PH5.0的磷酸缓冲液溶解，配制成15%溶液，与囊材混合液按体积比1 8 混合，搅拌乳化1.5小时，形本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：叶勇，郭亚，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：