一种制备不同分子量玻璃酸钠的方法技术

本发明专利技术涉及一种制备不同分子量玻璃酸钠的方法，首先向玻璃酸钠溶液中加入氢氧化钠，进行碱水解，然后向溶液中加入氯化钠，并用盐酸调pH值为2.0-4.0，进行酸水解，最后用乙醇使玻璃酸钠沉淀，脱水干燥，得不同分子量玻璃酸钠。该方法制备所得的玻璃酸钠的分子量比较小。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
玻璃酸((Hyaluronic Acid简称HA)是由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰葡萄糖胺双糖单位反复交替而形成的一种均聚物，其重均分子量一般为10万 1000万Da，玻璃酸钠 (sodium hyaluronate)为玻璃酸的钠盐形式，不同分子量的玻璃酸钠具有不同的生物活性。目前临床上应用的玻璃酸钠制剂，如眼科手术用黏弹剂、治疗关节炎的关节腔注射液、术后防粘连制剂、滴眼液等，所用HA的平均分子量般为50万 500万。低分子量HA(LMW-HA)的分子量范围尚无统一标准，一般为1万 50万，而HA寡聚糖 (oligosaccharides of HA，简称o_HA)为分子量在1万以下，单糖残基数量为2 40 (般为4 16)的HA分子片段。LMW-HA还属于大分子多糖范畴，在物理性质和生物活性方面与普通HA接近，而O-HA属于小分子多糖，其性质与普通HA有很大不同，甚至具有完个相反的作用。研究表明，HA的多种生物活性具有分子量依赖性，LMW-HA或o_HA的某些生物活性，(高分子)HA就没有或具有相反的作用。West等发现3 16个双糖单位的HA片段在体内具有促血管生成作用，在体外可促进内皮细胞的增生。而高分子量HA在体外抑制内皮细胞的增生，在体内抑制新血管的生成。Deed等的体外实验表明，具有促血管生成OligO-HA(O-HA)可快速诱导动脉内皮细胞相关基因表达水平的提高。oligo-HA与细胞表面受体的结合，并通过信号传递，诱导相关的表达，从而促进内皮细胞的增生。oligo-HA可促进内皮细胞合成I型和VIII型胶原， 这两种胶原在血管生成过程中具有重要作用。Termeer等试验表明，只有HA小分子片段G糖和6糖)可诱导具有免疫作用的树突细胞的成熟化，并促进树突细胞产生白介素、肿瘤坏死因子等细胞因子，而分子量在8 万 20万或更高的HA则无此作用。oligo-HA的这种作用具有专属性，其他糖胺聚糖如硫酸软骨素或硫酸乙酰肝素或其降解产物没有这种作用。在炎症过程中，内源性HA被降解成的小分子片段，对树突细胞和巨噬细胞等免疫活性细胞具有强力活化作用。这种作用是通过钟状受体4-(TLR-4)介导的，而不是⑶44受体。有专利报通分子量为2万 6万的LMW-HA可刺激体外培养的骨细胞的增生，增加培养基中骨细胞集落的数目和单个集落的面积。由此可见关节腔注射HA，不但可以起润滑作用，HA经过一段时间被降解成LMW-HA，还具有促进细胞生长的作用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，该方法采用酸碱水解结合法制备了不同小分子量的玻璃酸钠。为实现本专利技术的目的，本专利技术的技术方案是，其特征在于，包括以下步骤(1)向玻璃酸钠溶液中加入氢氧化钠进行碱水解得碱水解液，其中碱水解液中氢氧化钠的浓度为0. 05-2mol/L，碱水解温度为60°C _85°C，碱水解时间110_180min ；(2)向步骤(1)所得的水解液中加入氯化钠进行酸水解得酸水解液，其中酸水解液中氯化钠的质量含量为0. 5-4%，用盐酸调pH值为2. 0-4. 0，酸水解温度为70-100°C，酸水解时间为180-300min ；(3)向酸水解液中加乙醇使玻璃酸钠沉淀，脱水干燥，得不同分子量玻璃酸钠。在本专利技术的一优选实施例中，所述步骤(1)中，玻璃酸钠溶液中玻璃酸钠的质量含量为0. 1-1%。在本专利技术的一更优选实施例中，所述步骤(1)中，玻璃酸钠溶液中玻璃酸钠的质量含量为0.5%。在本专利技术的一更优选实施例中，所述步骤(1)中，碱水解液中氢氧化钠的浓度为 0.15-0. 20mol/L。在本专利技术的另一更优选实施例中，所述步骤(1)中，碱水解液中氢氧化钠的浓度为 0. 18mol/L。在本专利技术的一更优选实施例中，所述步骤(1)中，碱水解温度为60_75°C，碱水解时间 120-180min ；在本专利技术的另一更优选实施例中，所述步骤(1)中，碱水解温度为75°C，碱水解时间 180min ；在本专利技术的一更优选实施例中，步骤O)中，酸水解液中氯化钠的质量含量为2 % O在本专利技术的一更优选实施例中，步骤O)中，酸水解温度为86°C，酸水解时间为 240min。在本专利技术的一优选实施例中，制备所得的玻璃酸的分子量低于10万Dalton。在本专利技术的一更优选实施例中，制备所得的玻璃酸的分子量低于1万Dalton。本专利技术采用酸碱水解结合法制备得到了不同的小分子量的玻璃酸钠。具体实施例方式通过下面给出的本专利技术的具体实施例可以进一步清楚地了解本专利技术，但它们不是对本专利技术的限定。对比实施例1 取Ig玻璃酸钠(分子量为115万Da)溶解于200ml纯化水中，待完全溶解后，加入氢氧化钠，使其终浓度为0. 05mOl/L，50°C提取并水解60min，然后向该溶液中加入氯化钠， 使其质量含量为2%，加乙醇沉淀出HA，经脱水干燥，得低分子量玻璃酸钠样品，采用HPGPC 法检测检测分子量。对比实施例2:取Ig玻璃酸钠(分子量为115万Da)溶解于200ml纯化水中，待完全溶解后，加入氢氧化钠，使其终浓度为0. 05mol/L，75°C提取并水解60min，然后向该溶液中加入氯化钠， 使其质量含量为2%，加乙醇沉淀出HA，经脱水干燥，得低分子量玻璃酸钠样品，采用HPGPC 法检测检测分子量。对比实施例3:取Ig玻璃酸钠(分子量为115万Da)溶解于200ml纯化水中，待完全溶解后，加入氢氧化钠，使其浓度为0. 10mol/L，6(TC提取并水解120min，然后向该溶液中加入氯化钠， 使其质量含量为2%，加乙醇沉淀出HA，经脱水干燥，得低分子量玻璃酸钠样品，采用HPGPC 法检测检测分子量。实施例4 取Ig玻璃酸钠(分子量为115万Da)溶解于200ml纯化水中，待完全溶解后，加入氢氧化钠，使其浓度为0. 10mol/L)，7(TC提取并水解150min，然后向该溶液中加入氯化钠， 使其质量含量为2%，用盐酸调溶液pH值为4.0，86°C加热210min，加乙醇沉淀出HA，经脱水干燥，得低分子量HA样品，采用HPGPC法检测检测分子量。实施例5 取Ig玻璃酸钠(分子量为115万Da)溶解于200ml纯化水中，待完全溶解后，加入氢氧化钠，使其浓度为0. 15mOl/L)，60°C提取并水解120min，然后向该溶液中加入氯化钠， 使其质量含量为2%，用盐酸调溶液pH值为2. 5，86°C加热180min，加乙醇沉淀出HA，经脱水干燥，得低分子量HA样品，采用HPGPC法检测检测分子量。实施例6 取Ig玻璃酸钠(分子量为115万Da)溶解于200ml纯化水中，待完全溶解后，加入氢氧化钠，使其浓度为0. 15mol/L，75°C提取并水解150min，然后向该溶液中加入氯化钠， 使其质量含量为2%，用盐酸调溶液pH值为3.0，861加热2101^11，加乙醇沉淀出撤，经脱水干燥，得低分子量HA样品，采用HPGPC法检测检测分子量。实施例7 取Ig玻璃酸钠(分子量为115万Da)溶解于200ml纯化水中，待完全溶解后，加入氢氧化钠，使其浓度为0. 18mol/L，75°C提取并水解150min，然后向该溶液中加入氯化钠， 使其质量含量为2%，用盐酸调溶液pH值为2. 5，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：顾其胜，周宁辉，
申请(专利权)人：上海景峰制药有限公司，
类型：发明
国别省市：