本发明专利技术涉及一种NRP-1配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物、其介导的主动靶向脂质体递药系统及其制备方法。该载体系统的组成为：a.磷脂；b.胆固醇；c.甲氧基聚乙二醇-磷脂复合物；d.含RPARPAR序列的多肽-聚乙二醇-磷脂复合物；上述各成分之间的摩尔比为：a:b=5:1~1:5，a:c=1000:0.1~1000:100，a:d=1000:0.1~1000:100。该系统可通过通过静脉注射给药，通过肿瘤EPR效应和RPARPAR介导作用将其靶向至肿瘤部位。此脂质体递药系统可用作肿瘤诊断或治疗药物的靶向递送。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种NRP-I配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物、其介导的主动靶向脂质体递药系统及其制备方法。
技术介绍
肿瘤是威胁人类健康和生命的主要疾病，近年来其发病率呈明显的上升趋势。目前临床上对肿瘤的常规治疗方法是切除肿瘤原发灶和进行淋巴清扫之后，进行全身化疗或放疗。但是，外科手术不能彻底清除肿瘤细胞和肿瘤转移淋巴结，从而导致肿瘤复发；化疗药物静注给药后，对肿瘤组织无选择性，具有严重的全身性毒副作用；放疗往往会引起患者严重的局部皮肤反应、血象变化、局部粘膜反应等。由于肿瘤组织对具有一定粒径的纳米颗粒(10-500nm)具有EPR (高通透性和滞留)效应，即处在血循环中的纳米颗粒可被动靶向至肿瘤组织，发挥所包载药物的抗肿瘤作用。目前，已有多种利用此效应用于肿瘤靶向治疗的纳米递药系统上市，如阿霉素脂质体、顺钼脂质体和紫杉醇白蛋白纳米粒。同时由于肿瘤细胞或肿瘤血管内皮细胞上表达有一系列特异性受体，研究者们利用其配体修饰纳米递药系统，以实现对肿瘤组织的主动靶向递药。大量研究表明，与被动靶向相比，主动靶向纳米递药系统显示出对肿瘤组织更好的靶向性和生长抑制作用，但是，由于主动靶向制剂复杂的处方和制备工艺、质量控制较难、未知的生物安全性等问题，至今仍只有少量产品进入I期或II期临床。因此，目前急需对其进行系统的研究，尤其是安全性评价，研究成果必将加快推进肿瘤靶向纳米递药系统的临床应用进程。Neuropilin-I (NRP-1)是细胞表面的一种I型跨膜糖蛋白，通常表达在一些肿瘤细胞和血管内皮细胞表面，是血管内皮生长因子165 (VEGF165)的受体，在肿瘤转移、血管新生、调节血管通透性等方面发挥重要功能。人神经胶质瘤临床病理标本中有NRP-I显著表达，且其表达量随神经胶质瘤恶性程度增加而增加，但在相应的正常组织上皮细胞中却没有表达。目前已有研究者利用NRP-I受体抑制剂来抑制肿瘤血管新生从而达到抑制肿瘤生长和转移的目的。目前尚未见利用NRP-I受体多肽介导纳米递药系统用于肿瘤靶向治疗的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种NRP-I配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物。本专利技术的目的之二在于提供该NRP-I配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物介导的主动靶向脂质体递药系统，用于实现向肿瘤的靶向递药。本专利技术的目的之三在于提供该主动靶向脂质体递药系统的制备方法。一种NRP-I配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物，其特征在于该复合物由NRP-I配体多肽、聚乙二醇和磷脂通过共价连接而成的线性嵌段共聚物，其中NRP-I配体多肽、聚乙二醇和磷脂的摩尔比为1:1:1 ；所述的NRP-I配体多肽的氨基酸序列为RPARPAR。上述的聚乙二醇的重均分子量可以为400 8000。上述的聚乙二醇重均分子量可以为200(Γ5000。上述的磷脂可以为二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、氢化大豆磷脂酰乙醇胺、氢化蛋磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂酰乙醇胺或蛋磷脂酰乙醇胺。一种主动靶向脂质体递药系统，含有上述的NRP-I配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物，其特征在于该载体系统的组成为a.磷脂；b.胆固醇；c.甲氧基聚乙二醇-磷脂复合物；d.NRP-I配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物；上述各成分之间的摩尔比可以为a:b=5:l 1:5， a:c=1000:0.广1000:100， a:d=1000:0. 1 1000:100。上述的组分a所述的磷脂可以为蛋磷脂、氢化大豆磷脂酰胆碱、氢化蛋磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱、1_棕榈酰-2-硬脂酰磷脂酰胆碱、1-硬脂酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰-2-油酰磷脂酰胆碱、1-硬脂酰-2-亚油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、氢化二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸、二硬脂酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、脑磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、蛋磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、脑鞘磷脂、二棕榈酰鞘磷脂或二硬脂酰鞘磷脂。上述的甲氧基聚乙二醇-磷脂复合物中甲氧基聚乙二醇重均分子量可以为 400 8000。上述的甲氧基聚乙二醇-磷脂复合物中甲氧基聚乙二醇重均分子量可以为 100(Γ4000。根据权利要求5所述的主动靶向脂质体载体系统，其特征是所述的甲氧基聚乙二醇-磷脂复合物中的磷脂可以为二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、氢化大豆磷脂酰乙醇胺、氢化蛋磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂酰乙醇胺或蛋磷脂酰乙醇胺。一种制备上述的主动靶向脂质体载体系统的方法，其特征在于该方法的具体步骤为分别称取上述各组分溶于氯仿中制备得到均勻脂质膜，真空干燥；再溶于0. 155Μ的硫酸铵溶液，在20-70°C水浴中震荡得到脂质体混悬液；再于20-70°C水浴中依次挤压过400、 200、100和50nm核孔膜，得空白脂质体，即为含有.NRP-I配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物的主动靶向脂质体载体系统。上述的NRP-I配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物的制备方法的具体步骤为a.将取代度为0. 6mmol/g的叔丁氧羰基-精氨酸(对甲苯磺酰基)-对乙酰氨基苄酯) oc-Arg(Tos)-PAM树脂用N，N-二甲基甲酰胺DMF溶胀，抽干；再用三氟乙酸TFA脱去Boc保护基，抽去TFA;b.用苯并三氮唑-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐HBTU的DMF溶液和N，N- 二异丙基乙胺DIEA活化叔丁氧羰基-丙氨酸Boc-Ala，得Boc-Ala活化液；c.将步骤a所得树脂用DMF洗涤后加入步骤b所得的Boc-Ala活化液，25°C振摇反应 25分钟，抽去反应液，并用DMF洗涤树脂；d.重复步骤a_c，按CRPARPAR序列顺次连接其余氨基酸；反应结束后洗涤树脂、TFA 脱保护基，真空干燥；e.将步骤d所得树脂放入多肽切割管中，加入适量P-cresol，然后通入HF，冰浴搅拌反应1小时；反应结束后减压抽去管中HF，残液用适量冰乙醚沉淀，过滤得沉淀并用冰乙醚洗涤沉淀；沉淀重新用TFA溶解，过滤得滤液；滤液再于冰乙醚中沉淀，过滤，滤渣以水复溶， 冻干得CRPAKPAR纯品；f.将步骤e得到的CRPARPAR溶于pH7.O的PBS溶液中，取马来酰亚胺-聚乙二醇-磷脂复合物Mal-PEG-DSPE溶于DMF，搅拌反应至Mal-PEG-DSPE反应完全，去除过量的CRPARPAR 和DMF，冷冻干燥，得到直链的RPARPAR-PEG-DSPE。 含RPARPAR序列的多肽与马来酰亚胺-聚乙二醇-磷脂反应合成多肽-聚乙二醇-磷脂复合物，反应方程式如下权利要求1.一种NRP-I配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物，其特征在于该复合物由NRP-I配体多肽、聚乙二醇和磷脂通过共价连接而成的线性嵌段共聚物，其中NRP-I配体多肽、聚乙二醇和磷脂的摩尔比为1:1:1 ；所述的NRP-I配体多肽的氨基酸序列为RPARPAR。2.根据权利要求1所述的NRP-I配体本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：闫志强，杨一祎，魏岱旭，钟建，周涓，朱君，金彩虹，何丹农，
申请(专利权)人：上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司，
类型：发明
国别省市：
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