一种人工假病毒的制备方法技术

技术编号:7469643 阅读:398 留言:0更新日期:2012-06-30 22:33
本发明专利技术涉及一种核酸制备技术,特别涉及一种人工假病毒的制备方法,本发明专利技术的人工假病毒的制备方法,包括以下步骤:步骤1,核酸提取,步骤2,PCR扩增,步骤3,凝胶回收PCR片段,步骤4,限制性酶消化片段、载体,步骤5,凝胶回收酶切产物,步骤6,连接反应,步骤7,转化连接产物,步骤8,质粒提取,步骤9,酶切筛选连接阳性,步骤10,诱导提取人工假病毒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种核酸制备技术,特别涉及。
人工假病毒是将目的RNA病毒基因的特定片断克隆至含有噬菌体基因的表达载体上通过诱导表达产生被噬菌体衣壳蛋白包被的RNA片断。人工假病毒可用于核酸检测试剂的阳性对照或核酸标准物质,具有特异性强,灵敏度高,稳定性强的特点。现有的人工假病毒是从病毒里面提取RNA,以RNA为模板通过PCR方法获得片段, 用该片段构建假病毒的表达质粒。用这个表达质粒转染原核细胞后诱导其表达蛋白,对蛋白进行提取纯化即能得到假病毒。现有技术在制备人工假病毒方面存在诸多缺点。本专利技术经过研究,提出了一种新的人工假病毒的制备工艺,克服了现有技术的缺陷。
技术实现思路
本专利技术提供,该方法包括以下步骤步骤1,核酸提取步骤2,PCR扩增步骤3,凝胶回收PCR片段步骤4,限制性酶消化片段、载体步骤5,凝胶回收酶切产物步骤6,连接反应步骤7,转化连接产物步骤8,质粒提取步骤9,酶切筛选连接阳性步骤10,诱导提取人工假病毒其中步骤1核酸提取,步骤如下1)样本裂解及核酸吸附在1. 5ml无核酸酶的离心管中加入10 μ 1助沉剂和400 μ 1裂解液,加入200 μ 1待病毒本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:李琳曹健荣张誌
申请(专利权)人:北京金豪制药股份有限公司
类型:发明
国别省市:

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