编码衍生自间日疟虫的输出蛋白1的核苷酸和氨基酸序列及其用途制造技术

本发明专利技术涉及针对间日疟虫的EXP1的新多核苷酸和多肽，和在受试者中的间日疟虫抗体或抗间日疟虫抗体的检测中使用这些多核苷酸和多肽的方法。本发明专利技术发现在鉴定近期暴露于间日疟虫中特别有用的应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】编码衍生自间日疟虫的输出蛋白1的核苷酸和氨基酸序列及其用途MM本专利技术涉及尤其在诊断应用中有用的，衍生自间日疟虫(jnasmodium vivax)的输出抗原-7 {Exported Antigen-O (拟竹)基因的核酸序列和由其编码的氨基酸序列。背景疟疾传播疟疾是由寄生物引起的蚊媒疾病。至少4个疟原虫物种可以在自然条件下感染人 恶性疟虫(jnasmodium falciparum )、间日疟虫、卵形疟虫(A ο vale )和三日疟虫M 前2个物种引起全世界最多的感染。间日疟虫和卵形疟虫具有休眠肝阶段寄生物(休眠子)，其可以在感染蚊叮咬后几月或几年再活化(或“复发”)且引起疟疾；因此，这些物种在受感染个体中可以难以检测。在自然界中，疟原虫通过连续感染2类宿主传播人和雌性按蚊属iAnophelesm 子。在人中，寄生物首先在肝细胞且随后在红细胞中生长且繁殖。在血液中，寄生物的同窝 (broods)在红细胞内生长且破坏它们，从而释放子代寄生物(裂殖子)，其通过侵袭其他红细胞继续该周期。血液阶段寄生物引起疟疾的症状。当某些形式的血液阶段寄生物，配子母细胞，由雌性按蚊属蚊子在进食血液过程中吸收时，它们开始在蚊子中的另一个、不同的生长和增殖周期。在10-18天后，寄生物作为子孢子在蚊子的唾液腺中发现。当按蚊属蚊子从另一个人获得血餐时，子孢子由蚊子的唾液注射，并且当它们寄生肝细胞时，开始另一次人感染 (ffyler,1992)。疟疾症状和疾病由疟原虫感染可以导致广泛多样的症状，范围从不存在或非常温和的症状到严重疾病和甚至死亡。疟疾疾病可以分类为非并发的或(并发的)严重的。一般而言，如果迅速诊断且治疗，那么疟疾是可治愈的。在感染性蚊叮咬后，在第一次症状出现前存在潜伏期。潜伏期通常从7到30天不等。对于恶性疟虫最频繁地观察到更短的时期，而对于间日疟虫观察到更长的时期。事实上，间日疟虫可以具有超过450天的延长的潜伏期(Lee等人，1998)。诊断疟疾必须迅速被识别以便及时治疗患者且防止感染在社区中的进一步传播。因为关于间日疟虫的长潜伏期，所以诊断通过常规血涂片法可以是困难的，从而耽搁治疗。诊断和治疗中的耽搁是疟疾患者中的死亡主因。疟疾可以基于患者的症状和检查时的身体发现受到怀疑。然而，对于确定诊断，实验室测试必须证实疟原虫的存在。用于疟疾的现有诊断“黄金标准”取决于在显微镜下检查的在血涂片上寄生物的证实。疟虫属抗体的检测针对无性疟原虫(即裂殖子)的抗体在寄生物侵入红细胞后数天到数周内出现，并且可以持续数月或甚至数年(Vinetz等人，1998)。然而，通常不推荐用于急性疟疾诊断的抗体检测，这是因为抗体的存在可以指示过去或近期感染。已开发了使用疟虫属(/^^ ο Τ/ )衍生的抗原(Newmarket Laboratories, UK ；Cellabs，澳大利亚)或恶性疟虫完整生物裂解物(DiaMed)的酶联免疫吸附测定(ELISA)，以检测人血清或血浆中的免疫球蛋白(IgG和/ 或IgM)。这些测定比IFA更容易执行，显示更高的通量和更佳的灵敏度与特异性(Kitchen 等人，2004 jeed等人，2005 ；Srivastava等人，1991 )。目前的商业ELISA测定不足够灵敏， 以检测针对4个疟虫属物种的每一个的抗体(She等人，2007)。用于捕获抗体的抗原已包括疫苗候选物。这些抗原对于诊断应用是有吸引力的， 这是因为这些抗原已知引发抗体应答，并且从而可能用于检测由受感染个体产生的抗体， 所述受感染个体起因于寄生物感染。此种抗原的例子包括间日疟虫和恶性疟虫的环子孢子蛋白(CSP)、顶端膜抗原1 (AMA-1)、裂殖子表面蛋白质(MSP) 1和2 (Kitchen等人，2004 ； Rodrigues等人，2003)。其他有价值的抗原是MSP-2、-3、-4、-5、-8 _9，富含谷氨酸的蛋白质，和丝氨酸重复抗原(Girard等人，2007)。输出蛋白质-1 (EXP1 ；也称为QF116，抗原5. 1，和环子孢子相关抗原(Meraldi等人，2002))已在疟虫属物种中进行研究，尽管它在间日疟虫中的直向同源物仍未得到阐明， 除通过序列注视(sequence gazing)外。在非间日疟虫物种中，多肽是被认为在寄生物蛋白质的细胞内转运中重要的小泡蛋白质(Simmons等人，1987)。在恶性疟虫中，EXPl作为 23 kD蛋白质在寄生物的红细胞前和无性血液阶段中表达(Hope等人，1984)。作为整合膜蛋白质，它在寄生泡的膜(保护细胞内寄生物的内质和网掩盖的泡)和宿主细胞细胞质内的小泡中发现(Kara等人，1990 ；Sherman, 1985 ；Tolle等人，1993)。使用EXPl鼠同源物的研究显示蛋白质在小鼠中可以诱导针对用约氏疟虫(A的致死攻击的保护性T细胞免疫(Charoenvit等人，1999)。针对恶性疟虫EXPl多肽产生的抗体已在检测疟疾感染中成功(Meraldi等人，2002)。一般地，C末端在人中是最抗原性的(Meraldi等人，2002)。已存在使用间日疟虫EXPl序列作为诊断间日疟虫感染的工具的报道(Kim等人， 2003 ；Son等人，2001);然而，这些早期努力看起来基于不正确序列，并且所产生的诊断最可能检测恶性疟虫EXPl序列。在Kim等人(2003)和Son等人(2001)报道中，作者使用显然使用由Simmons等人公开的序列开发的引物序列(Simmons等人，1987)。Simmons等人 (1987)报道了恶性疟虫EXPl序列，并且指出该序列在5个恶性疟虫系中是高度保守的 ’然而，Simmons等人(1987)未报道来自间日疟虫的任何EXPl序列。Kim等人(2003)和Son 等人(2001)引用如来自间日疟虫的GenBank登记号X05074 ；然而，GenBank的条目指出这个登记是恶性疟虫的部分。为了回避这点，Kim等人(2003)和Son等人(2001)用来自间日疟疾患者的血液作为模板，但数据分析暗示他们使用的引物将不扩增间日疟虫多核苷酸序列，这是因为如现今理解的，正向引物的最后3个核苷酸(3’)和反向引物的最后6个核苷酸(3’)不与推定的间日疟虫EXPl序列退火。在捐献的血清或血浆中抗体的检测可以用于鉴定个别供体，其已暴露于疟疾生物，并且可能是近期感染的，并且因此是潜在寄生的(parasitemic)。感染人的所有4个疟虫物种已经由输血传播，并且尽管输血后疟疾的发生率在美国是低的(Mimgai等人， 2001)，但供血者的可用性可以通过疟虫抗体筛选测定的实现得到增加，从而使得仅疟疾生物暴露的个体而不是已在疟疾地方性区域中旅行或生活的所有供体从献血中延期，如目前实践的那样。此种测定在理论上将检测针对感染人且引起疟疾的疟虫物种(恶性疟虫、间日疟虫、卵形疟虫和三日疟虫)的抗体。商业抗体ELISAs目前在使用中(英国、澳大利亚、法国)或在其他国家中正考虑用于延期供体的恢复(Elghouzzi等人，2008 ；Kitchen等人，2004 ； ked等人，2005)。在这些情况下，供体就在延期的几个月内针对疟虫衍生的抗原的抗体进行测试。来自Cell本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：LG伯肯迈尔，RE科菲，GJ道森，SM德塞，BJ迪尔，AS米尔霍夫，
申请(专利权)人：LG伯肯迈尔，RE科菲，GJ道森，SM德塞，BJ迪尔，AS米尔霍夫，
类型：发明
国别省市：