效应子功能降低的稳定Fc多肽及使用方法技术

本发明专利技术提供一种生成含Fc的多肽的方法，如具有稳定的Fc区的抗体。本发明专利技术还提供了根据这些方法生成的稳定Fc多肽以及将此类抗体用作治疗剂的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请本专利申请要求2009年1月23日提交的标题为“STABILUED Fc POLYPEPTIDES WITH REDUCED EFFECTOR FUNCTION AND METHODS OF USE” 的美国临时专利申请序列号 61/146,950的权益。以上提及的临时专利申请的全部内容通过引用的方式并入本文。
技术介绍
获得性免疫应答是身体保护自身免受外来生物侵害身体引起感染或疾病的机制。 一种机制基于生成的或施用于宿主的抗体通过其可变区结合抗原的能力。一旦抗体结合了抗原，抗原就成为破坏的靶标，通常至少部分通过抗体的恒定区或Fc区介导。存在若干经抗体的Fc区介导的效应子功能或活性。一种效应子功能是在称为补体依赖性细胞毒作用(CDC)的过程中结合可协助溶解靶抗原(例如，细胞病原体)的补体蛋白的能力。Fc区的另一效应活性为结合免疫细胞表面的Fc受体(例如，FcyRS)或通常所说的效应细胞，该效应细胞具有触发其它免疫作用的能力。这些免疫作用(例如，抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)和抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP))通过(例如)释放免疫活化剂和调节抗体生成、胞吞作用、吞噬作用以及细胞杀伤在去除病原体/抗原中起作用。在一些临床应用中，这些应答对于抗体的功效至关重要，而在其它情况下这些应答引起有害的副作用。效应介导的副作用的一个实例为释放引起急性发热反应的炎症性细胞因子。另一个实例是长期缺失抗原携带细胞。可通过使用缺少Fc区的抗体片段(例如，Fab、F(ab' )2或单链Fv(scFv))避免抗体的效应子功能。然而，由于通过肾脏快速清除，这些片段的半衰期缩短；在Fab和scFv 片段仅具有一个抗原结合位点而不是两个由于结合亲合力可能损害任何优点的抗原结合位点的情况下；并且在制造中可能存在挑战。替代性方法旨在降低全长抗体的效应子功能，同时保持Fc区其它有价值的属性 (例如，半衰期延长和异质二聚体化)。降低效应子功能的一种方法是通过去除与Fc区中的特定残基连接的糖生成通常所说的无糖基化抗体。例如，可通过删除或改变与糖连接的残基、通过酶促去除糖、在有糖基化抑制剂存在下培养的细胞中生成抗体，或通过在不能使蛋白质糖基化的细胞(例如，细菌宿主细胞)中表达抗体而生成无糖基化抗体。另一种方法是采用来自IgG4而非IgGl抗体的Fc区。众所周知，IgG4抗体特征在于具有比IgGl更低的补体活化和抗体依赖性细胞毒作用水平。尽管这些替代性方法有优点，但现已确认从抗体的Fc区去除低聚糖对其构象和稳定性有明显的不利影响。另外，由于IgG4的CH3域与IgGl的CH3域相比缺乏稳定性，所以IgG4抗体的稳定性通常较低。就一切情况而论，抗体稳定性损失或降低可呈现对抗体药物开发有不利影响的工艺开发挑战。因此，需要改良抗体和其它效应子功能改变或降低、稳定性提高的含Fc的多肽和制备这些分子的方法。专利技术概述本专利技术通过提供用于提高Fc区稳定性的改进方法解决了现有技术“无效应子”抗体，实际上为任何含Fc的“无效应子”蛋白的问题。例如，本专利技术提供了稳定性设计的Fc多肽，例如，稳定的IgG抗体或其它含Fc的结合分子，其包含在多肽的Fc区中的稳定氨基酸。 在一个实施方案中，本专利技术提供一种在亲本Fc多肽的Fc区中的特定氨基酸残基处弓I入导致Fc区稳定性提高的突变的方法。优选地，稳定的Fc多肽的效应子功能改变或降低(与不包含稳定氨基酸的多肽相比)，并且与亲本Fc多肽相比表现出提高的稳定性。因此，本专利技术具有包括但不限于以下的若干优点-提供包含稳定的无糖基化Fc区的稳定的无糖基化Fc多肽，例如，稳定的融合蛋白或无糖基化IgG抗体，由于其效应子功能降低而适于用作治疗剂；-提供包含源自IgG4抗体的Fc区的稳定的Fc多肽，例如，稳定的糖基化或无糖基化融合蛋白或IgG4抗体，由于其效应子功能降低为适于用作治疗剂；-对多肽进行最低限度的改变(例如，通过为不稳定的亲本多肽引入电荷或表达编码稳定的Fc多肽的核酸分子)生成稳定的Fc多肽的有效方法；-在避免任何免疫原性和/或效应子功能升高的同时提高Fc多肽稳定性的方法；-提高Fc多肽的可量测性、生产和/或长期稳定性的方法；-用本专利技术的稳定的Fc多肽治疗需要治疗的受试者的方法。一方面，本专利技术涉及包含嵌合Fc区的稳定多肽，其中所述稳定多肽包含至少一个源自人IgG4抗体的恒定域和至少一个源自人IgGl抗体的恒定域。在一个实施方案中，Fc区为糖基化Fc区。在一个实施方案中，Fc区为无糖基化Fc区。在一个实施方案中，Fc区为包含位于Fc区的位置四7的谷氨酰胺(Q)和位置299 的丙氨酸(A)(欧盟编号规定)的无糖基化Fc区。另一方面，本专利技术涉及包含无糖基化Fc区的稳定多肽，其中所述稳定多肽包含位于所述Fc区的至少一个Fc部分中一个或多个氨基酸位置的一个或多个稳定Fc氨基酸，其中所述氨基酸位置选自297、299、307、309、399、409和427 (欧盟编号规定)。在一个实施方案中，嵌合Fc区包含来自IgG4同种型的IgG抗体的CH2域和来自 IgGl同种型的IgG抗体的CH3域。在一个实施方案中，嵌合Fc区包含来自IgG4同种型的IgG抗体的铰链、CHl和CH2 域和来自IgGl同种型的IgG抗体的CH3域，并且其中抗体包含位于氨基酸位置2 的脯氨酸(欧盟编号)。另一方面，本专利技术涉及包含来自IgG4抗体的Fc区的CH2部分的稳定多肽，其中所述稳定多肽包含位于一个或多个选自240FJ62LJ64T、266FJ97Q、299AJ99K、307P、309K、 309M、309P、323F、399S和427F(欧盟编号规定)氨基酸位置的一个或多个稳定氨基酸。在一个实施方案中，稳定多肽包含位于氨基酸位置四7的Gin。一方面，本专利技术涉及包含来自IgGl抗体的Fc区的CH2部分的稳定多肽，其中所述稳定多肽包含位于一个或多个选自和(欧盟编号规定)氨基酸位置的一个或多个稳定氨基酸。在一个实施方案中，本专利技术的稳定多肽包含位于氨基酸位置四9的赖氨酸。在另一个实施方案中，本专利技术的稳定多肽包含位于氨基酸位置四9的赖氨酸和位于氨基酸位置四7的天冬氨酸。7在一个实施方案中，Fc区为无糖基化Fc区。在一个实施方案中，IgG抗体为人源抗体。在一个实施方案中，相对于缺乏稳定氨基酸的亲本多肽，稳定多肽的解链温度 (Tm)升高至少1°C。在一个实施方案中，稳定的Fc多肽的解链温度(Tm)升高约1°C或更多、约2°C或更多、约3°C或更多、约4°C或更多、约5°C或更多、约6°C或更多、约7°C或更多、约8°C或更多、约9°C或更多、约10°C或更多、约15°C或更多以及约20°C或更多。在一个实施方案中，在中性pH(约6. 5至约7. 5)下解链温度(Tm)升高。在另一个实施方案中，在约6. 5或更低、约6. 0或更低、约5. 5或更低、约5. 0或更低、约4. 5或更低和约4. 0或更低的酸性pH下，解链温度(Tm)升高。在一个实施方案中，相对于缺乏稳定突变的亲本多肽，稳定多肽以更高的产量表达。在另一个实施方案中，在细胞培养物中，稳定的Fc多肽以约5mg/L或更高、约 10mg/L或更高、约15mg/L或更高、约20mg/L或更高的产量表达。在一个实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种包含嵌合Ｆｃ区的稳定多肽，其中所述稳定多肽包含至少一个来自ＩｇＧ４同种型的ＩｇＧ抗体的ＣＨ２域和至少一个来自ＩｇＧ１同种型的ＩｇＧ抗体的ＣＨ３域，其中所述稳定多肽包含位于一个或多个选自２９７、２９９、３０７、３０９、３９９、４０９和４２７（欧盟编号规定）的氨基酸位置的一个或多个稳定Ｆｃ氨基酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：CL雷耶斯，E钱，FR泰勒，E加伯，BR米勒，S德马雷斯特，S格拉泽，
申请(专利权)人：比奥根艾迪克MA公司，
类型：发明
国别省市：US