具有免疫球蛋白结合能力的肽制造技术

本发明专利技术提供具有免疫球蛋白结合能力的肽、以及与所述肽的融合蛋白、编码它们的核酸、制备方法、用于与免疫球蛋白结合的组合物以及手段、以及由于C1q与免疫球蛋白的结合而引起的疾病的治疗或预防用药物组合物等，该药物组合物包含具有免疫球蛋白结合能力的肽或与所述肽的融合蛋白。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有免疫球蛋白结合能力的肽、以及与所述肽的融合蛋白、编码它们的核酸、制备方法、用于与免疫球蛋白结合的组合物以及手段。本专利技术还涉及由于Clq与免疫球蛋白的结合而引起的疾病的治疗或预防用药物组合物等，该药物组合物包含具有免疫球蛋白结合能力的肽或与所述肽的融合蛋白。
技术介绍
已知Clq是补体蛋白的一种，在补体活化途径中发挥作用。例如，经典途径的活化是通过Clq与免疫球蛋白分子的Fc部分结合而引起的。有报道称，Clq在血液中较多存在的类风湿性关节炎(RA)患者将来会出现关节破坏(非专利文献1)。可以认为这与上述的Clq的活化有关，人们希望开发Clq与免疫球蛋白分子结合的抑制剂。有报道称，Clq与免疫球蛋白分子的结合中，ClqB亚基(B链)的精氨酸残基可能参与(非专利文献幻。但是，该报告是通过计算机模拟来预测的，实际的免疫球蛋白结合部位尚未明确。所述结合部位的详细的氨基酸序列也并未了解。免疫球蛋白的纯化中使用ftOtein A或ftOtein G等的与免疫球蛋白特异性结合的蛋白质。但是，这些蛋白质与免疫球蛋白的结合力强，因此，一旦结合后若要分离，则必须是使用强酸性缓冲液等的严苛条件。因此，免疫球蛋白的立体结构容易破坏，无法纯化亲和性高的抗体。现有技术文献非专利文献非专利文献1 =Ochi T 等人.，Arthritis Rheum. 1988Jan ；31 (1) :37 43非专利文献2 =Gaboriaud C 等人·，J Biol Chem. 2003Nov 21 ；278 (47) :46974 82.Epub 2003S印 专利
技术实现思路
专利技术所要解决的课题本专利技术的解决课题在于提供具有免疫球蛋白结合能力的肽以及与所述肽的融合蛋白、编码它们的核酸、含有所述核酸的载体等。还在于提供不破坏抗体的立体结构、与抗原的亲和性高的抗体也可纯化的新型抗体纯化方法、以及为此的组合物和手段。解决课题的手段本专利技术人等针对上述情况进行了深入的研究，结果，成功地鉴定了参与Clq与免疫球蛋白结合的氨基酸序列，完成了本专利技术。还令人惊讶地发现，所述氨基酸序列并不含有被报道参与了结合的精氨酸残基。并且，含有该氨基酸序列的肽比I^rotein A或ftOtein G 弱地与免疫球蛋白结合，因此消除了抗体立体结构的破坏或对纯化对象抗体的限制(无法纯化与抗原的亲和性高的抗体等)等的以往的抗体纯化时的问题，可以在温和的条件下进行抗体纯化。SP，本专利技术涉及以下内容(1)肽，该肽是具有免疫球蛋白结合能力的肽，选自(a)具有SEQ ID NO :1 7的任意的氨基酸序列的肽；(b)具有下述氨基酸序列的肽，其是在SEQ ID NO :1 7的任意的氨基酸序列中， 缺失、置换或附加1个或多个氨基酸得到的氨基酸序列；以及(c)具有下述氨基酸序列的肽，其是与SEQ ID NO :1 7的任意的氨基酸序列具有66. 7%以上同源性的氨基酸序列，其中，肽中的半胱氨酸可被不同种类的氨基酸置换。(2)⑴所述的肽，其中，肽中的半胱氨酸被丝氨酸置换。(3)⑵所述的肽，该肽具有SEQ ID NO 28 32的任意的氨基酸序列。(4)肽，该肽是具有免疫球蛋白结合能力的肽，选自(a)具有SEQ ID NO :1 7的任意的氨基酸序列的肽；(b)具有下述氨基酸序列的肽，其是在SEQ ID NO :1 7的任意的氨基酸序列中， 缺失、置换或附加1个或多个氨基酸得到的氨基酸序列；以及(c)具有下述氨基酸序列的肽，其是与SEQ ID NO :1 7的任意的氨基酸序列具有66. 7%以上同源性的氨基酸序列，其中，肽中的氨基酸可被对应的D-氨基酸置换。(5) (4)所述的肽，其中，所有的氨基酸均可被对应的D-氨基酸置换。(6) (5)所述的肽，该肽具有dPro Gly dLeu dTyr dTyr dPhe所示的氨基酸序列。(7)肽，该肽是具有免疫球蛋白结合能力的肽，选自(a)具有SEQ ID NO :1 7的任意的氨基酸序列的肽；(b)具有下述氨基酸序列的肽，其是在SEQ ID NO :1 7的任意的氨基酸序列中， 缺失、置换或附加1个或多个氨基酸得到的氨基酸序列；以及(c)具有下述氨基酸序列的肽，其是与SEQ ID NO :1 7的任意的氨基酸序列具有66. 7%以上同源性的氨基酸序列，其中，肽中的半胱氨酸可被不同种类的氨基酸置换，且肽中的氨基酸可被对应的 D-氨基酸置换。(8) (7)所述的肽，其中，肽中的半胱氨酸可被不同种类的氨基酸置换，且所有的氨基酸可被对应的D-氨基酸置换。(9)核酸，该核酸是编码具有免疫球蛋白结合能力的肽的核酸，选自(a)编码(1)所述的肽的核酸；(b)具有SEQ ID NO 33 37的任意的核苷酸序列的核酸；(c)具有下述核苷酸序列的核酸，其是在SEQ ID NO 33 37的任意的核苷酸序列中，缺失、置换或附加1个或多个核苷酸得到的核苷酸序列；(d)可与上述(b)或(C)的核酸或其互补链在严谨的条件下杂交形成的核酸；(e)具有下述核苷酸序列的核酸，其是与SEQ ID NO 33 37的任意的核苷酸序列具有50%以上同源性的核苷酸序列。(10) (9)所述的核酸，该核酸具有SEQ ID NO 33 37的任意的核苷酸序列。(11)载体，该载体含有(9)或(10)所述的核酸。(12)融合蛋白，其是⑴ (3)中任一项所述的肽附加于目标蛋白质的N末端和 /或C末端得到的融合蛋白。(13)融合蛋白，其是⑷ ⑶中任一项所述的肽附加于目标蛋白质的N末端和 /或C末端得到的融合蛋白。(14)核酸，该核酸编码(12)所述的融合蛋白。(15)载体，该载体含有(14)所述的核酸。(16)细胞，该细胞含有(9)或(10)所述的核酸或(14)所述的核酸、或者(11)或 (15)所述的载体。(17)具有免疫球蛋白结合能力的肽的制备方法，该方法包含以下步骤(a)使用(11)所述的载体来转化细胞；(b)培养该细胞以生产肽。(18)具有免疫球蛋白结合能力的肽，该肽可通过(17)所述的方法得到。(19)融合蛋白的制备方法，该融合蛋白是具有免疫球蛋白结合能力的肽附加于目标蛋白质的N末端和/或C末端得到的，所述方法包含(a)使用(1 所述的载体来转化细胞；(b)培养该细胞以生产融合蛋白。(20) (19)所述的方法，该方法进一步包含由融合蛋白获取目标蛋白质的步骤。(21)融合蛋白，该融合蛋白可通过(19)或00)所述的方法得到。(22)用于使免疫球蛋白结合的组合物，该组合物包含(1) (8)中任一项所述的肽、或者(12)或(13)所述的融合蛋白。(23) (22)所述的组合物，该组合物用于确定免疫球蛋白的存在或量、或者用于分离免疫球蛋白。(24)用于使免疫球蛋白结合的手段，该手段是将⑴ ⑶中任一项所述的肽、或者(12)或(13)所述的融合蛋白固定。(25) (24)所述的手段，该手段用于确定免疫球蛋白的存在或量、或者用于分离免疫球蛋白。(26)使免疫球蛋白结合的方法，该方法包含(a)将⑴ ⑶中任一项所述的肽、或者(12)或(13)所述的融合蛋白添加到试样中，(b)检测肽或融合蛋白与免疫球蛋白的结合体。(27)试剂盒，该试剂盒用于在06)所述的方法中使用，包含具本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．肽，该肽是具有免疫球蛋白结合能力的肽，选自（ａ）具有ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１～７的任意的氨基酸序列的肽；（ｂ）具有下述氨基酸序列的肽，其是在ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１～７的任意的氨基酸序列中，缺失、置换或附加１个或多个氨基酸得到的氨基酸序列；以及（ｃ）具有下述氨基酸序列的肽，其是与ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１～７的任意的氨基酸序列具有６６．７％以上同源性的氨基酸序列，其中，肽中的半胱氨酸可被不同种类的氨基酸置换。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：真崎修，
申请(专利权)人：株式会社MMT，
类型：发明
国别省市：JP