基于肿瘤抑制因子的过度增生细胞对溶瘤病毒疗法的敏感性制造技术

本发明专利技术涉及使用溶瘤病毒如呼肠孤病毒和粘液瘤病毒来治疗癌症的方法。特别地，本发明专利技术建立于肿瘤抑制因子异常的癌细胞比含正常或“野生型”肿瘤抑制因子的细胞对溶瘤病毒的感染更敏感这一发现的基础上。特别地，有关ｐ５３、Ｒｂ和ＡＴＭ的缺失均会赋予癌细胞对溶瘤病毒疗法的敏感性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术主要涉及病毒学，分子生物学和医学领域。更特别地，它涉及测定过度增生 紊乱包括癌症对于溶瘤病毒疗法的敏感性。
技术介绍
呼肠孤病毒(呼吸道肠道孤儿病毒)是一种普遍存在的无包膜病毒，包含作为其 基因组的10条双链RNA片段，它对人类的感染通常是温和的，局限于上呼吸道和胃肠道并 且通常在有免疫功能的宿主中是无症状的(Tyler，2001)。关于逆转改造呼肠孤病毒的尝试 大部分是失败的，这归因于多个因素，包括呼肠孤病毒的双链RNA基因组。已知缺失σ 1的 呼肠孤病毒颗粒是无传染性的(Larson et al，1994)。重要的是，很多年来呼肠孤病毒被公认为当它感染特定类型的转化细胞时可呈现 显著的杀细胞能力(Duncan et al,1978 ；Hashiro et al，1977)。有复制能力的溶瘤病毒 提供了引人注目的抗癌疗法。这些溶瘤病毒有两个主要优点。第一，与传统的化学疗法和 放射疗法不同，由于它们在正常细胞中的复制能力有限所以它们能特异性锚定癌细胞。第 二，与无复制能力的载体相比，它们能从最初感染的癌细胞蔓延到周围的癌细胞，从而达到 大量分布以及有效地抗癌的效果。虽然暴露于野生型的呼肠孤病毒对于健康的个体而言通常是无症状的，但是对于 免疫缺损的个体而言仍会存在很大潜在的非常严重的风险，这就限制了呼肠孤病毒疗法对 病人的临床应用潜能，如对于可能从这一疗法中获益的癌症病人。直至在体外和体内发 现包含致癌的Ras信号通路的转化细胞对感染呼肠孤病毒(3型Dearing株)尤其敏感 (Coffey et al, 1998 ；Strong et al, 1998 ；Norman et al，2004)之前,呼肠孤病毒溶瘤能 力的基本原理仍然是未知的。由于在各种人类癌症中通常能观察到Ras基因突变(Duursma et al，2003)，这些发现导致当前呼肠孤病毒疗法在临床试验中的使用(Norman et al, 2005)。然而，Ras基因突变的存在可能只是癌细胞对呼肠孤病毒疗法敏感性的部分原因。 最近研究显示Ras通路并不是决定允许呼肠孤病毒的唯一因素(Song et al，2009)，并且 还显示从转化Ras的细胞可以建立抗呼肠孤病毒的细胞(Kim et al,2007)而仍保留活化 的Ras突变。因此，需要有改进的方法来鉴别和筛选合适的癌细胞子群体用于呼肠孤病毒 疗法和其他溶瘤病毒试剂。
技术实现思路
专利技术概述当含有特定缺损的或失活的肿瘤抑制基因如p53、Rb、ATM、BRCAU BRCA2、MutS, MutL, MutH, APC和ATBFl的过度增生或转化的癌细胞在体外或体内暴露于呼肠孤病毒时， 该病毒不论是以野生型(3型Dearing)还是改良型形式(例如ο 1蛋白合成缺损的不完 全减弱病毒)存在，对杀伤这些癌细胞均有效。因此，呼肠孤病毒的应用范围可以扩展至与 ras原癌基因信号通路异常或活性过剩相关的案例。先前被认为主要应答ras、干扰素或其 他细胞免疫信号通路状态的其他病毒对肿瘤抑制因子功能的缺失也是敏感的，它们的应用 范围也同样可以扩展。因此，依据本专利技术，提供了一种确定过度增生紊乱对呼肠孤病毒或粘液瘤病毒的 溶瘤作用是否敏感的方法，包括(a)提供一种过度增生细胞；(b)测定由过度增生细胞获得 的 p53、Rb、ATM、BRCAl、BRCA2、MutS、MutL、MutH、APC 和 / 或 ATBFl 基因或基因产物的结构、 功能或表达；以及(c)比较过度增生细胞的与野生型的p53、Rb, ATM, BRCAU BRCA2、MutS、 MutL, MutH, APC和/或ATBFl基因或基因产物的结构、功能或表达，其中过度增生细胞的 p53、Rb、ATM、BRCAl、BRCA2、MutS、MutL、MutH、APC 和 / 或 ATBFl 在结构、功能或表达上的缺 陷表明过度增生紊乱对呼肠孤病毒或粘液瘤病毒的溶瘤作用是敏感的。本方法可以进一步包括例如通过呼肠孤病毒和/或粘液瘤病毒疗法来治疗病人， 该病人是过度增生细胞的来源。呼肠孤病毒疗法可以是野生型呼肠孤病毒疗法或减毒型 呼肠孤病毒疗法，如使用σ 1衣壳蛋白表达缺损，σ 1衣壳蛋白检测不到或无O 1衣壳蛋白 的呼肠孤病毒。该疗法可以包括用呼肠孤病毒和/或粘液瘤病毒疗法来对病人的骨髓细胞 进行间接体内治疗，或者可以包括对病人给予呼肠孤病毒和/或粘液瘤病毒疗法。在间接 体内疗法的情况下，该方法可以进一步包括对骨髓细胞给予第二次抗过度增生疗法，或者 在对患者给予病毒疗法的情况下，该方法可以进一步包括对患者给予第二次抗过度增生疗 法。第二次抗过度增生疗法可以是化学疗法、放射疗法、激素疗法、基因疗法或免疫疗法。该 方法也可以进一步包括用 ρ53、Rb、ATM、BRCAl、BRCA2、MutS、MutL、MutH, APC 或 ATBFl 的功 能或表达抑制剂进行治疗，该抑制剂如蛋白或多肽、抗体、siRNA、反义分子、核酶或小分子。 治疗也可以包括非病毒性抗过度增生疗法，如用化学疗法、放射疗法、激素疗法、基因疗法 或免疫疗法。过度增生细胞可以是恶性细胞或良性细胞。该方法可以进一步包括，在步骤 (a)之前，从病人身上获取过度增生细胞。表达的测定可以包括Northern印迹、Western印 迹、免疫组织化学、RT-PCR、微阵列分析、转录组分析、蛋白质组分析或代谢组分析。选择性 地，结构的测定可以包括测序、原位杂交、免疫组织化学或结构蛋白质组学。另外，功能的测 定可以包括评定 p53、Rb、ATM、BRCAl、BRCA2、MutS、MutL、MutH, APC 或 ATBFl 的下游靶标的 表达或活性。在另一个实施例中，提供了一种治疗病人过度增生紊乱的方法，包括(a)对过度 增生细胞给予 P53、Rb、ATM、BRCAl、BRCA2、MutS、MutL、MutH, APC 或 ATBFl 的功能或表达抑 制剂；以及(b)对过度增生细胞给予呼肠孤病毒和/或粘液瘤病毒疗法。呼肠孤病毒疗法 可以是野生型呼肠孤病毒疗法或减毒型呼肠孤病毒疗法，如σ 1衣壳蛋白表达缺损，σ 1衣 壳蛋白检测不到或无ο 1衣壳蛋白的呼肠孤病毒。治疗可以包括对病人的骨髓细胞进行间 接体内治疗，或对病人进行体内治疗。该方法可以进一步包括给予骨髓细胞第二次抗过度增生疗法，如第二次抗过度增生疗法，如化学疗法、放射疗法、激素疗法、基因疗法或免疫疗 法。过度增生细胞可以是恶性细胞或良性细胞。单词〃 a〃或〃 an"与本权利要求书和/或本说明书中的术语“包括”联合使用时， 可能指“一个”，但是也与“一个或多个”，“至少一个”，和“一个或多于一个”的意思相一致。在整个申请中，术语“about”被用于指一个数值，该数值包含用于测定数值的设 备、方法的误差而引起的固有偏差，或存在于研究对象之间的偏差。对于术语"or"，虽然公开文本支持只指二选一和“和/或”的定义，但是权利 要求书中的术语"or"的使用被用于指“和/或”，除非明确表明是只指二选一或供选择 的对象是互相排除的。在本说明书和权利要求书中使用的单词"comprising"(以及 comprising 的任何形式，如〃 comp本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种确定过度增生紊乱是否对溶瘤呼肠孤病毒和／或粘液瘤病毒敏感的方法，包括：（ａ）提供过度增生细胞；（ｂ）测定源自所述的过度增生细胞的ｐ５３，Ｒｂ，和／或ＡＴＭ基因或基因产物的结构、功能或表达；以及（ｃ）比较所述过度增生细胞的上述结构、功能或表达与野生型的ｐ５３，Ｒｂ，和／或ＡＴＭ基因或基因产物的结构、功能或表达，其中ｐ５３，Ｒｂ，和／或ＡＴＭ在结构、功能或表达上的缺陷表明上述的过度增生紊乱对呼肠孤病毒或粘液瘤病毒的溶瘤作用是敏感的。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：曼博克·基姆，
申请(专利权)人：曼博克·基姆，
类型：发明
国别省市：CA