本发明专利技术提供了一种抗肿瘤处置方法，该方法包含将编码免疫刺激性细胞因子的单链负链ＲＮＡ病毒载体，或导入该载体的细胞给药到肿瘤部位的步骤。本发明专利技术还提供了包括以编码免疫刺激性细胞因子的单链负链ＲＮＡ病毒载体，或导入该载体的细胞等为有效成分的抗肿瘤组合物。此外，本发明专利技术还提供了包含编码免疫刺激性细胞因子的单链负链ＲＮＡ病毒载体，以及肿瘤抗原或者表达该抗原的载体的抗肿瘤处置试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及肿瘤的基因治疗，即利用编码免疫刺激性细胞因子的单链负链RNA病毒载体进行的治疗。
技术介绍
近年来，针对癌症利用免疫细胞因子的免疫疗法倍受关注。例如、对于包括外科手术、放射线治疗、以及化学疗法等在内的多种方法都不能治疗的恶性肿瘤之一—麦芽细胞肿瘤(Glioblastoma multiforme；GBM)(Shapiro，W.R.，Arch.Neurol.，56429-432，1999)，为了能够治疗该类恶性肿瘤，摸索了利用基因导入的治疗战略。(Ram，Z.et al.，Cancer Res.，5383-88，1993；Sampson，J.H.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，9310399-10404，1996；Herrlinger，U.et al.，Cancer Gene Ther.，4345-352，1997；Seleh，M.et al.，J.Natl.Cancer Inst.，91438-445，1999；Giezeman-Smits，K.M.et al.，Cancer Res.，602449-2457，2000)。以在体内动物模型的研究结果为基础，发现有几种基因治疗战略很有前途，但是它们的治疗效果几乎在所有的情况下都收效甚微，主要是因为基因导入水平低而引起的。阻碍基因治疗适用成功的最大障碍是重组病毒载体不能扩散到整个肿瘤内部，以及在体内中的导入效率很低。(Ram，Z.et al.，Nat.Med.，31354-1361，1997)。为了发展基因治疗，有必要开发一种新的载体系统，该载体具有能够安全有效的将基因导入到靶细胞内的功能。非专利文献1Shapiro，W.R.，Arch.Neurol.，56429-432，1999非专利文献2Ram，Z.et al.，Cancer Res.，5383-88，199非专利文献3Sampson，J.H.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，9310399-10404，199非专利文献4Herrlinger，U.et al.，Cancer Gene Ther.，4345-352，199非专利文献5Seleh，M.et al.，J.Natl.Cancer Inst.，91438-445，1999非专利文献6Giezeman-Smits，K.M.et al.，Cancer Res.，602449-2457，2000非专利文献7Ram，Z.et al.，Nat.Med.，31354-1361，199专利技术的公开本专利技术要解决的课题本专利技术以提供一种肿瘤处置方法为课题该处置方法包含利用编码免疫刺激性细胞因子(immunostimulatory cytokines)的单链负链RNA病毒载体的方法。此外，本专利技术还以提供肿瘤处置用的组合物和试剂盒，以及其制造方法为课题该组合物和试剂盒包含编码免疫刺激性细胞因子(immunostimulatory cytokines)的单链负链RNA病毒载体。课题的解决手段单链负链RNA病毒是指以单链负链RNA为基因组的包被病毒，该病毒具有很高的感染性，并且具有在细胞质中高表达搭载基因的能力。近年来，随着对单链负链RNA病毒基因组进行分子生物学操作的发展，使将非病毒性基因附加地插入到病毒基因组内成为可能。并且，作为基因导入方法，使开发一种新型病毒载体成为可能(Bitzer，M.et al.，J.Gene Med，.5543-553，2003)。单链负链RNA病毒的复制链是在细胞质中进行的，因此不会整合到感染细胞的基因组DNA中，从这点可以确保基因治疗临床应用方面的安全性问题。该病毒作为利用细胞培养生产重组治疗蛋白，或细胞因子或趋化因子的手段，在生产适于免疫基因治疗应用的适当的分泌蛋白质时是非常有用的。单链负链RNA病毒具有下述几项优点，(i)由于复制链是在细胞质中排他式进行的，所以没有整合入基因组DNA中的危险，(ii)导入效率不依赖于靶细胞的细胞周期，(iii)不会出现与不同的病毒基因组或者野生型病毒发生同源性重组现象，(iv)侵入细胞内部时，只需要极短的接触时间，(v)具有较广的宿主细胞域，并可在细胞内以较高强度且可调节式的表达病毒编码的基因。本专利技术的专利技术者们为了验证通过使用单链负链RNA病毒载体进行细胞因子的基因导入来治疗肿瘤的基因治疗战略的可行性，将搭载有免疫刺激性细胞因子基因的SeV载体导入肿瘤内来检测其抗肿瘤效果。构筑搭载有免疫刺激性细胞因子之一的白细胞介素-2(IL-2)基因的SeV，将该SeV病毒载体给药到大鼠脑肿瘤模型的脳内时(I.C.)，发现通过SeV向肿瘤内部进行的细胞因子基因导入，可以显著抑制肿瘤的增殖。另外，把经照射的野生型9L细胞注射到末梢进行疫苗接种后，将IL-2表达SeV载体注入到固定的脑肿瘤时，发现肿瘤增殖明显减少，在被调查的10只大鼠中有3只的脑肿瘤消失了。在免疫组织化学解析中，经IL-2表达SeV载体处理的肿瘤，有较高水平的CD4+以及CD8+T细胞的浸润。如上所述，我们认为使用SeV载体向脑肿瘤进行基因导入，可以获得显著的治疗效果。将编码有免疫刺激性细胞因子的单链负链RNA病毒载体导入到肿瘤内的方法，可望成为对肿瘤进行治疗的新的基因治疗战略。也就是说，本专利技术涉及利用编码免疫刺激性细胞因子(immunostimulatory cytokines)的单链负链RNA病毒载体处置肿瘤的方法，以及涉及包含利用编码免疫刺激性细胞因子(immunostimulatory cytokines)的单链负链RNA病毒载体处置肿瘤时的组合物及试剂盒等，在申请项的各项中，有更具体的记载。另外本专利技术还涉及在权利要求项的各项中记载的一个或者多个(或者全部)专利技术的所望组合而成的专利技术，特别是涉及引用同一独立项(关于在其他项中不包含记载的专利技术的项)的项(附属项)中记载的一个或者多个(或者全部)专利技术的所望组合而成的专利技术。各独立项记载的专利技术中，也有包括其附属项任意组合而成的专利技术。也就是说，本专利技术也包含以下专利技术。〔1〕一种抗肿瘤处置方法，该方法包含将编码免疫刺激性细胞因子(immunostimulatory cytokines)的单链负链RNA病毒载体，或导入该载体的细胞给药到肿瘤部位的步骤；〔2〕记载〔1〕中的方法，还包含使用肿瘤抗原或者该抗原表达载体进行免疫的步骤；〔3〕记载〔2〕中的方法，其中所述方法是将肿瘤抗原或者该抗原表达载体通过皮下接种进行免疫的方法；〔4〕记载〔2〕或〔3〕中的方法，其中所述肿瘤抗原是失去增殖能力的肿瘤细胞或者肿瘤细胞的溶解物；〔5〕记载〔1〕-〔4〕中任何一种方法，其中所述肿瘤为脑肿瘤；〔6〕记载〔1〕-〔4〕中任何一种方法，其中所述免疫刺激性细胞因子是白细胞介素-2；〔7〕一种抗肿瘤组合物，该组合物包含以编码免疫刺激性细胞因子(immunostimulatory cytokines)的单链负链RNA病毒载体，或以导入该载体的细胞为有效成分；〔8〕记载〔7〕中的组合物，其中所述免疫刺激性细胞因子为白细胞介素-2；〔9〕一种抗肿瘤处置用试剂盒，该试剂盒包含(a)编码免疫刺激性细胞因子(immunostimulatory cytokines)的单本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗肿瘤处置方法，该方法包括将编码免疫刺激性细胞因子的单链负链ＲＮＡ病毒载体或者导入该载体的细胞给药到肿瘤部位的步骤。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：岩立康男，山浦晶，井上诚，长谷川护，
申请(专利权)人：株式会社载体研究所，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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