一种分离检测AFP亚型的新方法技术

本发明专利技术应用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合免疫印迹技术定性检测血清样本中的肝癌特异性AFP亚型（HS-AFP）。包括以下组份：聚丙烯酰胺溶液；分离胶缓冲液；浓缩胶缓冲液；过硫酸铵溶液；上样缓冲液；阳极电泳缓冲液；阴极电泳缓冲液；蛋白印迹（转移）缓冲液；显色液；一抗（兔抗人AFPIgG）；二抗（HRP-羊抗兔IgG）；磷酸盐缓冲液（0.01MPBS）；硝酸纤维膜。其检测步骤包括：（1）制胶：自上而下2个浓度梯度分别为88.0g/L和50.0g/L；（2）加样电泳；（3）转移；（4）包被；（5）抗原抗体反应；（6）显色，肉眼观察AFP区带分布情况。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医学生物
，涉及一种肝癌特异性AFP亚型 (Hepatoma-specific Alpha-fetoprotein Isoform,HS-AFP)分离检测法，具体为应用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合免疫印迹技术定性检测血清样本中的HS-AFP。人外周血中HS-AFP的增加与原发性肝癌的发生发展存在密切关联，运用该方法检测外周血中HS-AFP，对原发性肝癌的诊断、鉴别诊断、肝癌监测、手术预后判断及肝硬化癌变预测均具有较高价值。
技术介绍
肝癌是最常见恶性肿瘤之一，其预后在很大程度上取决于能否得到早诊早治。肝癌的诊断包括影像学的定位诊断和肝癌标志物的定性诊断。许多早期肝癌缺乏典型的影像学改变，此时定性诊断尤为重要。在我国肝癌发病的高危人群为慢性肝病尤其是乙肝后肝硬化患者，对这部分肝癌高危人群定期进行肝癌标志物检测对肝癌的早期诊断具有重要价值。血清甲胎蛋白(AFP)是公认最佳肝癌标志物，对肝癌的筛选、诊断以及复发监测均有重要价值。但许多小肝癌AFP浓度较低，出现AFP假阴性，而良性肝病有时也可出现AFP升高假阳性。因此单靠检测AFP水平不能满足临床需要。为进一步提高AFP对肝本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．聚丙烯酰胺凝胶电泳结合免疫印迹技术检测血清样本中的肝癌特异性ＡＦＰ亚型其特征在于包括以下组份：（１）聚丙烯酰胺溶液：准确称取２９．２　ｇ聚丙烯酰胺，０．９　ｇ亚甲基双丙烯酰胺，均放入１００　ｍｌ的烧杯中，加入去离子水６　０ｍｌ，加热并搅拌使之完全溶解，倒入１００　ｍｌ的容量瓶中，去离子水冲洗烧杯数次均倒入容量瓶中，定容至１００　ｍｌ，过滤备用，冷藏保存；（２）分离胶缓冲液：准确称取Ｔｒｉｓ　１８．１０　ｇ，放入１００　ｍｌ的烧杯中，加入去离子水５０　ｍｌ及四甲基乙二胺（ＴＥＭＥＤ）　１．０　ｍｌ搅拌，用浓盐酸滴定至ｐＨ　８．３０，去离子水定容至１００　ｍｌ，冷藏保存；（３）浓缩胶缓冲液：准...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：倪润洲，肖明兵，陈不尤，
申请(专利权)人：倪润洲，肖明兵，陈不尤，
类型：发明
国别省市：32