一种阴道炎检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种阴道炎检测试剂盒，包括以下组分：反应装置、加样试管、吸管、联检稀释液、联检显色液、联检终止液、说明书、联检比色卡，其中反应装置上设有过氧化氢反应孔、白细胞酯酶反应孔、唾液酸苷酶反应孔、β-葡萄糖醛酸酶反应孔、乙酰氨基葡萄糖苷酶反应孔和pH值孔，反应孔中有相应的反应基，反应基由相应的反应底物固化层、显色促进层和化学惰性载体层组成。本发明专利技术还提供了该检测试剂盒的制备方法以及新型化学载体的制备方法。本发明专利技术的检测试剂盒可用于区分细菌性阴道炎与其他阴道炎，并可进一步鉴定出阴道分泌物中的需氧菌/厌氧菌和兼性厌氧菌等菌群，该方法操作简单快速，准确性高，适用于临床常规特别是医院门诊的使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，尤其涉及细菌性阴道炎(厌氧菌和兼性厌氧菌阴道炎)、需氧菌阴道炎、霉菌性阴道炎、滴虫性阴道炎检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
微生态是一门新兴的学科，近年来随着科技的迅猛发展，医学微生态已成为一门独立的边缘学科，并日益受到人们的重视。女性阴道从生理学角度上讲是一个闭合的体腔， 其内包含着多种成分，也寄生着许多细菌。阴道微生态主要有三部分构成，首先是阴道上皮细胞，女性阴道壁是由分层的鳞状未角化的上皮细胞构成，它们能随着体内雌激素水平的上升而不断增殖、加厚。阴道内没有发现分泌性腺体，但分泌物来自前庭大腺、尿道旁腺、子宫内膜和输卵管等部位。阴道分泌物受雌激素水平的控制并在月经中期随雌激素水平降低而减少。分泌物中含有90% 95%的水、无机盐、有机盐、尿素、碳水化合物和其他大分子物质。构成阴道微生态的第二部分是微生物菌群。早在1892年，Dederlein首次发表了关于人类阴道微生态菌群的研究。 Doderlein和当时的人们都认为阴道微生物仅由革兰氏染色阳性杆菌构成，S卩乳酸杆菌。随着对阴道菌群研究的不断深入，人们发现健康女性的阴道菌群是由多种厌氧菌和需氧菌构成。正常状态下，阴道内存在多种微生物。目前，阴道分泌物中已分离到四种微生物，其中最重要的是乳酸杆菌，它在健康女性的阴道排出物标本中分离率高达50% 80% .现已确定定植于正常阴道内的微生物群主要由细菌、真菌、原虫和病毒组成，它们主要栖居于阴道四周的侧壁粘膜皱褶中，其次是穹隆，部分在宫颈。健康女性阴道菌群中除乳酸杆菌外，还有表皮葡萄球菌、大肠杆菌、棒状杆菌、粪链球菌、支原体和白色念珠菌等。第三个必须强调的微生态部分是宿主和菌群间及菌群与菌群之间相互作用的复杂性。它们之间是相互制约、相互作用、相互依赖的对立统一，或是共生关系或是拮抗关系，共处于阴道的微生态环境中，保持着协调平衡的状态。一般用定性和定量的方法测得健康妇女阴道排出物中活菌数为102_7ml，厌氧菌和需氧菌的比供为5 1。其中乳杆菌是阴道正常菌群中最重要、数量最多的常住菌，其数量占95%以上。可达8X107ml。目前研究表明从健康妇女阴道内可分离出16种乳杆菌， 分离率达50-80%，其中数量较多的是嗜酸乳杆菌、唾液乳杆菌和发酵乳杆菌，而糖原分解能力强的菌包括的嗜酸乳杆菌、莱氏乳杆菌及唾液乳杆菌。乳杆菌在维持阴道微生态平衡中起重要作用。其中能产生H2O2的乳杆菌在维持阴道自净及抗感染中起着关键作用。它可分解阴道粘膜上皮细胞内的糖元，产生一定量的乳酸，使阴道保持酸性环境。有利于阴道的自净作用。同时它可提高机体的免疫功能，激活巨噬细胞，维持阴道局部的抗感染能力。此外它亦具有防止宫颈阴道上皮化生的作用。H2O2浓度的测定是分析阴道微生态是否正常的良好指标，阴道微生态的异常是病原体存在的强烈提示信号，会诱发其他致病微生物或阴道内条件致病菌成为事实病原体，是其他病原体(如滴虫，霉菌等)易复发，难以治愈的重要原因之一。正常阴道内寄生着乳酸杆菌，链球菌，表皮葡萄球菌，阴道加德纳菌及大肠杆菌以及厌氧的消化链球菌属，消化球菌，厌氧乳酸杆菌，类杆菌等，这些菌保持一定的比例，维系着阴道内生态平衡，正常妇女阴道分泌物中每毫升有IO6个菌落形成单位。正常育龄妇女，在内分泌激素的作用下，阴道上皮细胞增生，其表层细胞含有丰富的糖原，非常有利于兼氧乳酸杆菌的生长，这种细菌占阴道的90%以上，这种乳酸杆菌大量存在，就抑制了其他致病菌的生长，在阴道内形成了一个正常的生态平衡。乳酸杆菌是属于乳酸菌一类的细菌，这类菌可利用黄素蛋白将氧变成H2O2，这一作用结合亚铁血红素，过氧化氢酶的缺失，结果产生过量而不被细菌全部降解的H202。其浓度与乳酸杆菌的数量有关。 由此可通过检测H2A的浓度来反映乳酸杆菌的状况。正常人阴道分泌物中的H2O2浓度一般在2μπι01/1以上，如检测H2O2浓度彡2 μ mol/L时，则意味着阴道生态菌群遭到了破坏，已经引起了厌氧菌的生长，导致了阴道菌群的失衡。如当人体雌激素水平下降，导致阴道上皮萎缩，细胞糖原减少，不利于乳酸杆菌的生长；大量使用抗生素或用碱性液体过度冲洗阴道，抑制乳酸杆菌的生长；性乱，性交频繁(因精液PH为7. 2-7.8)等导致致病性厌氧菌和加德纳菌大量繁殖，引起阴道微生物生态平衡的失调等等。白细胞酯酶(leukocyte esterase，LET)专用于检测多行核白细胞释放的酯酶，在正常情况下难以检测。当人体发生炎症反应时，多形核白细胞的趋化性在炎症病灶聚集而大量释放酯酶，只有在这种炎症情况下(白细胞104/ml)，炎性白细胞酯酶才有可能检测到， 建议在实际工作中参考清洁度指标权衡诊治。阴道炎是妇女最常见的疾病，宫颈炎也存在较高的发病率.当炎性患者自我症状比较轻微时，容易造成误诊，常常延误了治疗，并有可能并发输卵管炎，子宫内膜炎而导致不孕及流产。三种最常见的阴道炎(细菌性阴道炎，滴虫性阴道炎，霉菌性阴道炎)均有明显的多形核白细胞浸润，其酯酶可在分泌物中检测，其LET检测的阳性率>95%，特异性> 96%。唾液酸苷酶是某些细菌的毒力因子，又因为它能除去组织中的亚端糖类，使细菌的粘附力增强，在与BV相关的细菌中，已知B群链球菌和加德纳菌可产生唾液酸苷酶，诸多的代谢产物中的唾液酸苷酶会改变粘膜通透性，从而利于细菌对粘膜组织的附着，侵入和损伤。此外，环氧化物酶和磷酸酯会诱导子宫细胞产生花生四烯酸，刺激产生参与分娩的前列腺素，导致早产的发生。唾液酸酶还会阻碍成纤维细胞中骨胶原蛋白的合成，导致低体重儿的发生。但也应该注意，唾液酸是细胞膜糖蛋白与糖酯的主要成分，正常细胞中游离形式存在较低，但肿瘤细胞唾液酸酶活性增强，使细胞表面负电荷增加，肿瘤细胞易失去接触抑制，无限增殖，也使粘附力减低，易侵袭转移。现也把唾液酸酶作为肿瘤标志物之一，检测唾液酸酶阳性也可能是生殖道肿瘤或是其他炎症，风湿的结果。β-葡萄糖醛酸酶是大肠杆菌产生的一种特异性酶。近年来的研究发现，在肠杆菌科中，除少数志贺氏菌、沙门氏菌等细菌外，94% 97%的大肠杆菌都可以产生β-葡萄糖醛酸酶。故检测此酶的存在可以定性或定量检测大肠杆菌的存在。乙酰氨基葡萄糖苷酶为白色念珠菌、热带念珠菌的特异性酶，因此可以通过检测脯氨酸氨基肽酶活性和乙酰氨基葡萄糖苷酶来指示念珠菌感染。研究表明白色念珠菌和滴虫具有乙酰氨基葡萄糖苷酶特异性酶，通过大量研究念珠菌白带PH不大于4. 6，而滴虫白带PH不小于4. 8，通过结合pH值可将二者区分开。因此可以通过检测乙酰氨基葡萄糖苷酶和PH值来检测滴虫。一般来说，正常白带PH为3. 8-4. 5，BV白带pH > 4. 5，滴虫白带pH可大于5-6，霉菌白带PH在4. 0-4.7。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题之一是提供一种细菌性阴道炎(厌氧菌和兼性厌氧菌阴道炎)、需氧菌阴道炎、霉菌性阴道炎、滴虫性阴道炎快速检测试剂盒及其制备方法。为了实现本专利技术目的，本专利技术公开了一种阴道炎检测试剂盒，包括反应装置，其中反应装置上设有反应孔，反应孔包括过氧化氢反应孔、白细胞酯酶反应孔、唾液酸苷酶反应孔、β -葡萄糖醛酸酶反应孔、乙酰氨基葡萄糖苷酶反应孔和PH值孔其中至少一个或几个或全部，本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种阴道炎检测试剂盒，包括反应装置，其中反应装置上设有反应孔，反应孔包括过氧化氢反应孔、白细胞酯酶反应孔、唾液酸苷酶反应孔、β－葡萄糖醛酸酶反应孔、乙酰氨基葡萄糖苷酶反应孔和ｐＨ值孔其中至少一个或几个或全部，反应孔中有相应的反应基，反应基包括相应的反应底物固化层、显色促进层和化学惰性载体层，其中，过氧化氢反应孔中还包括过氧化物酶固定层；所述过氧化氢反应孔的底物固化层包被有Ｎ－乙基－Ｎ－（２－羟基－３－磺丙基）－３－甲基苯胺和３，５－二氯－２－羟基苯磺酸；显色促进层包被有４－氨基安替吡啉、ＰＢＳ缓冲盐和海藻糖；化学惰性载体层由介孔分子筛及粘合剂组成；进一步还包括过氧化物酶固定层，由介孔分子筛吸附过氧化物酶构成；及／或所述白细胞酯酶反应孔的底物固化层包被有５－溴－４－氯－３－吲哚乙酸酯；显色促进层包被有乙酸钠盐和海藻糖；化学惰性载体层由介孔分子筛及粘合剂组成；及／或所述唾液酸苷酶反应孔的底物固化层包被有５－溴－４－氯－３－吲哚神经氨酸盐；显色促进层包被有维生素Ｃ、海藻糖及乙酸－乙酸钠缓冲盐；化学惰性载体层由介孔分子筛及粘合剂组成；及／或所述β－葡萄糖醛酸酶反应孔的底物固化层包被有对硝苯基－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷；显色促进层包被有海藻糖和ＰＢＳ缓冲盐；化学惰性载体层由介孔分子筛及粘合剂组成；及／或所述乙酰氨基葡萄糖苷酶反应孔的底物固化层包被有对硝基苯基－２－乙酰氨基－２－脱氧－β－Ｄ－葡萄糖苷；显色促进层包被有海藻糖和ＰＢＳ缓冲盐；化学惰性载体层由介孔分子筛及粘合剂组成。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张旭，王国强，刘中华，戚雨，张辉，
申请(专利权)人：江苏硕世生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32