一种中药冻干注射剂中活性化合物含量的测定方法技术

本发明专利技术提供了一种中药组合物冻干注射剂中多种组分含量的测定方法，本发明专利技术中药冻干注射剂原料包括人参和淫羊藿，临床用于运动神经元疾病(肌萎缩侧索硬化症、进行性脊肌萎缩症、进行性延髓麻痹、原发性侧索硬化症)、进行性肌营养不良症、先天性肌病等疾病所致的肌肉萎缩及重症肌无力的治疗，本发明专利技术方法采用高效液相色谱串联质谱法同时定性和定量分析该中药冻干注射剂中15个活性化合物，可以用于该产品的质量控制。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，属于药物制剂分 析

技术介绍
中药冻干注射剂在质量标准上，要求控制的项目比较多，其中，有效化合物的含量 控制对中药冻干注射剂的质量控制至关重要。CN1785223A公开了一种治疗肌肉萎缩及重症肌无力的药物及其制备方法，该专利 公开了该药物的组方、制剂以及胶囊、片剂等制备方法；该专利还公开了该药物的药效学实 验，证实该药物具有增强正常运动神经元活力，促进神经突起生长，又能保护兴奋性氨基酸 毒性损伤运动神经元，减少细胞凋亡，在维持中枢神经系统功能，延缓病情发展，提高患者 生存质量方面具有重要的临床应用价值；该专利还公开了其中人参提取物的制备方法，“取 人参药材，用60-90%乙醇提取1-3次，第1次加药材8-12倍量溶剂提取1_2小时，第2次 加6-10倍量溶剂提取1-2小时，第3次加6-10倍量溶剂提取0. 5-1小时；合并上述提取液， 趁热滤过，减压回收乙醇，并浓缩，放入不锈钢桶内，加纯水搅拌均勻，冷藏对-3他；将冷藏 液取出，放至常温，板框过滤器过滤，用少量水洗涤板框，滤液加纯水稀释，备用；取人参浓 缩药液通过处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱，并分别用pH值8-9的氨水、20%乙醇、80% 乙醇洗脱，收集80%乙醇洗脱液。将80%洗脱液加入纯水，配成50%醇溶液，通过中性氧 化铝柱，收集洗脱液，再用少量50%乙醇洗涤柱子，合并洗脱液备用；取药液加入活性炭， 回流加热，煮沸20min，趁热板框抽滤，收集滤液，浓缩，冷藏过夜；澄清板过滤，减压干燥， 即得人参提取物。”该人参提取物即为人参总皂苷提取物；该专利还公开了淫羊藿提取物的 提取方法，“取淫羊藿药材，加水煎煮提取2-5次，加水量为10-30倍，第一次提取时间定为 0. 5-2h，以后3次为0. 5-lh ；合并上述提取液，趁热滤过，减压浓缩，放入不锈钢桶内，加乙 醇至药液含醇浓度为70%，冷藏；过滤，滤液回收乙醇并浓缩，加水搅拌均勻，冷藏，过滤， 备用；取淫羊藿药液通过处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱，并分别用纯水、20%乙醇、50% 乙醇洗脱，收集50%乙醇洗脱液；洗脱液拌入适量硅藻土混勻，用无水乙醇提取2-5次，提 取液合并，回收乙醇并浓缩，浓缩液加入丙酮，并搅拌均勻，冷藏，过滤，沉淀加丙酮再同前 处理2次，合并3次滤液，回收溶剂，并浓缩，减压干燥，即得淫羊藿提取物。”该淫羊藿提取 物即为淫羊藿总黄酮提取物。该专利未公开冻干注射剂制备及其含量测定方法。由CN1785223A公开的
技术实现思路
，可以看出，该中药组合物包括黄酮类和皂苷类成 分。黄酮类化合物具有强的紫外吸收，而皂甙具有弱紫外吸收。由于皂苷类成分的极性较 大，含量较低，采用传统的紫外或蒸发光检测器来分离和鉴定其活性成分即繁琐又耗时，因 此建立一个灵敏的、选择性强的方法来同时分析皂苷和黄酮类化合物，非常必要。本专利申请即是在CN1785223A的基础上做了进一步的研发，在研制该中药组合 物的冻干注射剂的基础上，制定了活性化合物含量的测定方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种中药冻干注射剂活性化合物含量的测定方法。本专利技术所述中药冻干注射剂是由如下重量份比例的原料制成人参总皂苷提取物30-70 淫羊藿总黄酮提取物20-60。具有高灵敏度的液质联用，在进行中药成分分析时，可以提供化合物的多组分的 同时检测有用的信息，尤其对于那些难以用传统的分析检测方法测定的微量成分，本专利技术 采用高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MQ法，通过MS1，MS2和保留规律，定性表征和定量 分析了本专利技术所述中药冻干注射剂化合物含量的测定方法。本专利技术测定方法可以有效的、 可靠的对本专利技术所述中药冻干注射剂进行质量控制，以确保其安全有效。本专利技术测定方法中，液相色谱条件和质谱条件优选如下液相色谱条件柱温为25°C ；流动相A为0. 甲酸，B为乙腈；流速为0. 7mL/ min ；梯度0-6 分钟，16-38% B,6-15 分钟，38-50% B、15-18 分钟，50-95% B、18-20 分钟， 95-16% B ；质谱条件负离子方式检测；源喷射电压为-4500V ；雾化温度为650°C ；雾化气压 力为60psi ；辅助气压力为65psi ；气帘气压力为25psi ；扫描方式为多反应监测；驻留时间 均为40ms，碰撞室出口电压-5. 0V，进口电压:-10. OV。其中液相色谱柱优选为C18反相柱，质谱条件中的雾化气、辅助气和气帘气优选 为氮气。本专利技术测定方法中，所述中药冻干注射剂活性化合物优选为15种，分别为人参 皂苷Rbl、人参皂苷Rb2、人参皂苷Re、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷 Rgl、人参皂苷Rg2、20- (S)人参皂苷Rg3、20 (R)-人参皂苷Rg3、淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定 B、朝藿定C和金丝桃苷。结构式如下人参皂苷Rbl:人参皂苷Rb2:权利要求1.，该中药冻干注射剂是由30-70 重量份的人参总皂苷提取物和20-60重量份的淫羊藿总黄酮提取物制成，其特征在于该方 法采用高效液相色谱串联质谱法。2.根据权利要求1所述测定方法，其特征在于所述高效液相色谱串联质谱法的色谱条 件为液相色谱条件柱温为25°C ；流动相A为0. 甲酸，B为乙腈；流速为0. 7mL/min ；梯 度0-6 分钟，16-38% B,6-15 分钟，38-50% B、15-18 分钟，50-95% B、18-20 分钟，95-16% B ；质谱条件负离子方式检测；源喷射电压为-4500V ；雾化温度为650°C ；雾化气压力为 60psi ；辅助气压力为65psi ；气帘气压力为25psi ；扫描方式为多反应监测；驻留时间均为 40ms，碰撞室出口电压-5. OV 进口电压-10. OV。3.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于所述液相条件中色谱柱采用C18反相柱。4.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于所述质谱条件中雾化气、辅助气和气 帘气均为氮气。5.根据权利要求1-4任一项所述的测定方法，其特征在于所述活性化合物为15种，分 别为人参皂苷Rbl、人参皂苷Rb2、人参皂苷Re、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人 参皂苷Rgl、人参皂苷Rg2、20-(Q人参皂苷Rg3、20(R)_人参皂苷Rg3、淫羊藿苷、朝藿定A、 朝藿定B、朝藿定C和金丝桃苷。6.根据权利要求1-4任一项所述的测定方法，其特征在于所述中药冻干注射剂原料的 重量比例如下人参总皂苷提取物35 淫羊藿总黄酮提取物55。7.根据权利要求1-4任一项所述的测定方法，其特征在于所述中药冻干注射剂原料的 重量比例如下人参总皂苷提取物65 淫羊藿总黄酮提取物25。8.根据权利要求1-4任一项所述的测定方法，其特征在于所述中药冻干注射剂原料的 重量比例如下人参总皂苷提取物50 淫羊藿总黄酮提取物40。全文摘要本专利技术提供了一种中药组合物冻干注射剂中多种组分含量的测定方法，本专利技术中药冻干注射剂原料包括人参和淫羊藿，临床用于运动神经元疾病(肌萎缩侧索硬化症、进行性脊肌萎缩症、进行性延髓麻痹、原发性侧索硬化症)、进行性肌营养不良症、先天性肌病等疾病所致的肌肉萎缩及重症肌无力的治疗，本专利技术方法采用高效液本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种中药冻干注射剂中活性化合物含量的测定方法，该中药冻干注射剂是由３０－７０重量份的人参总皂苷提取物和２０－６０重量份的淫羊藿总黄酮提取物制成，其特征在于该方法采用高效液相色谱串联质谱法。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：宋剑，刘敏彦，赵韶华，贾继明，王贵金，刘兴国，郑亚杰，蔡艳，裴彩云，
申请(专利权)人：河北以岭医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：13