本发明专利技术公开了一种游离三碘甲状腺原氨酸化学发光定量检测试剂盒，该试剂盒包括游离三碘甲状腺原氨酸检测反应板，反应板包被有游离三碘甲状腺原氨酸抗体。游离三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，还包括：酶结合物，发光底物，校准品，质控品，浓缩洗涤液。本发明专利技术可以专一的定量检测出病人血清游离三碘甲状腺原氨酸的含量，用于辅助诊断甲状腺功能紊乱疾病。与传统的ELISA技术相比，本发明专利技术不仅保留了ELISA技术的高度特异性，检测结果的稳定性、可靠性和操作的简便性，同时采用的化学发光法能提高检测的灵敏度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于体外临床检验和化学发光免疫法
，具体涉及一种用于游离三 碘甲状腺原氨酸(FB)化学发光定量检测试剂盒及相关制备方法和使用方式。
技术介绍
甲状腺功能紊乱为内分泌疾病中最常见者，并至今仍易被漏诊。据美国对11个 城市4. 6万人的普查中发现，有约11%的人存在未被诊断出的各种甲状腺功能紊乱。甲状 腺功能紊乱可分为甲状腺功能亢进症(hyperthyroidism，简称甲亢)和甲状腺功能减退症 (hypothyroidism,简称甲减)。甲状腺激素为甲状腺素(thyroxine，T4)和三碘甲状腺原氨酸(3，5， 3，-trii0d0thyr0nine，T;3)的统称，两者均为酪氨酸含碘衍生物。血浆中99%以上的T3、T4 都和血浆蛋白可逆结合，主要与甲状腺素结合球蛋白(thyroxine binding globulin, TBG) 结合，亦有部分和清蛋白、前清蛋白结合。仅有占血浆0.1^-0.3%的T3和0. 02 % -0. 05 % 的T4是游离的，只有游离T3、T4才能进入靶细胞发挥作用。FT3可以通过细胞膜与受体结 合发挥生理效应，因此它是甲状腺激素发生生理效应的的真正活性部分，能较确切地反映 甲状腺的功能状态及其他对人体机能的影响。所以FT3的水平比Τ3更能真正反映甲状腺 的功能状态。化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay, CLIA)于 1977 年问世， 1985年第一代化学发光免疫试剂盒研制成功并投放市场。上世纪70年代中期Arakawe首 次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应分析超微量物质，特别是用于临 床免疫分析中检验超微量活性物质。目前，这一技术已从实验室的稀有技术过渡到临床医 学的常规检测手段。化学发光免疫分析是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合， 用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理与放射免疫(RIA)和 酶免疫(EIA)相似，不同之处是以发光物质作为底物，并藉助其自身的发光强度直接进行 测定。化学发光标记免疫分析是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常 用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物一acridinium ester (AE)，是有效的发光标记 物，其通过起动发光试剂(NaOH-H2O2)作用而发光，强烈的直接发光在一秒钟内完成，为快 速的闪烁发光。还有以三联吡啶钌(Ru(byp)32+)标记物为发光底物，用另一反应物三丙胺 (TPA)来激发光反应，在电极表面反复进行氧化还原反应从而产生高效稳定连续发光的电 化学发光免疫分析。这些免疫分析方法都需要高精度复杂的自动测量仪器，目前在国内还 难以实现。化学发光酶免疫分析是以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体)进行免 疫反应，免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物，在信号试剂作用下发光，用发光信号测 定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP)，它们 有各自的发光底物。HRP常用的底物为鲁米诺(3-氨基邻苯二甲酰胼，luminol)或其衍生物如异鲁米诺(4-氨基邻苯二甲酰胼)等，鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行，在过氧 化物酶及活性氧的存在下，生成激发态中间体，当其回到基态时发光，其波长为425nm。发光 强度依赖于酶免疫反应物中酶的浓度。如果不使用增强剂，鲁米诺体系的发光基本上为闪 光型且信号弱，通过加入某些特殊的增强剂可增强发光的信号并可大大延长发光的持续时 间。化学发光免疫分析既具有放射免疫的高灵敏度(检测限度可达10_15 10_18mol/ L)，又具有酶联免疫的操作简便、快速的特点，易于标准化操作，且测试中不使用有害的试 剂。试剂保持期长，应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作，成为非放射性免疫分析 法中最有前途的方法之一。但是，国外的自动化学发光酶免疫分析仪及与之相匹配的试剂 盒多采用封闭体系配合使用，价格昂贵，操作复杂，在国内不易推广。
技术实现思路
本专利技术将化学发光技术与免疫分析技术相结合，提供了一种能够定量检测游离三 碘甲状腺原氨酸(FT3)的试剂盒。本专利技术技术方案如下一种游离三碘甲状腺原氨酸化学发光定量检测试剂盒，包括反应板，酶结合物，发 光底物，校准品，质控品，浓缩洗涤液，所述的反应板包被有抗FT3抗体。所述的校准品以FT3纯品配制，浓度优选为0、0. 9,2. 2,5. 0,9. 0,19. Opg/ml。所述的质控品以游离三碘甲状腺原氨酸纯品配制，由质控品I和质控品II两部分 组成，质控品I的浓度为0. 6-4. 5pg/ml，质控品II的浓度为5. 2-18. 5pg/ml。所述的质控品I的浓度优选为1. 37pg/ml，质控品II的浓度优选为7. lpg/ml。、所述的酶结合物为HRP标记的FT3类似物，所述的反应板材质是不透明的聚苯 乙烯或聚乙烯，所述的发光底物为鲁米诺、异鲁米诺或其衍生物，所述的浓缩洗涤液是 pH7. 0-pH8. 0的中性缓冲液。该试剂盒具有开放性系统，可以应用于多种不同公司的化学发光检测仪器，无需 昂贵的专用配套仪器，并具有简便，快速，稳定的检测能力，易于在国内市场推广。具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本 专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照 常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(New York =Cold Spring Harbor LaboratoryPress, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1 :FT3定量检测试剂盒的制备(1)抗FT3的抗体包被板制备a.包被取 lmol/L Na2HPO4 77. 4ml 和 lmol/L NaH2PO4 22. 6ml 混勻，加入去离 子水定容至IOOOml即成10倍包被液，临用前稀释十倍，加入适量抗FT3单抗(购买自 fitzgerald)混勻，然后加入到微孔板板孔中，100 μ 1/孔，4°C 16小时；b.封闭弃去包被液，在吸水纸纸上拍干，加入含有3% BSA和0.05%防腐剂 (Procl in 300)的磷酸盐缓冲液(pH 7. 4), 200 μ 1/ 孔，37°C 2 小时；c.封袋弃去封闭液，在吸水纸上拍干，室温下于真空干燥箱中抽5小时，立即进 行真空封袋，检查有无漏气，如有重新封袋，贴上标签后于2-8°C保存。(2)酶标记物的制备用含有2. 5% BSA、1. 5%的脱脂奶粉和0. 05%防腐剂(Proclin 300)的磷酸盐 缓冲液(pH 7.4)配制缓冲系统。FT3类似物(购买自sigma-aldrich)用过碘酸盐氧化法与辣根过氧化物酶交联。(3)FT3校准品的制备用含有3% BSA和0. 05%防腐剂(Proclin 300)的磷酸盐缓冲液(pH 7. 4)配制 缓冲系统。用FT3纯品配制校准品工作液(FT3纯品购买自fitzgerald)，分别为0、0. 9,2. 2、 5. 0,9.0,19. Opg/ml 共 6 个工作浓度。G)FT3质控品的制备小牛血清与去离子水6 4混合，并添加0. 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种游离三碘甲状腺原氨酸化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，包括反应板，酶结合物，发光底物，校准品，质控品，浓缩洗涤液，所述的反应板包被有游离三碘甲状腺原氨酸抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：穆海东，汪宁梅，穆宇豪，王通，
申请(专利权)人：上海裕隆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31
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