本发明专利技术公开了使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的试剂及其制备方法。该试剂，由使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的培养基和骨髓间充质干细胞组成；所述培养基，由溶质和溶剂组成，所述溶质由如下终浓度的七种物质组成：葡萄糖4.0g/L-5.0g/L，碳酸钠0.11g/L-0.19g/L，L-谷氨酰胺0.584g/L-0.702g/L，二甲基亚砜100ml/L-130ml/L，转铁蛋白50g/L-67g/L，胰岛素5g/L-6.6g/L，碱性成纤维细胞生长因子0.01g/L-0.05g/L；所述溶剂为注射用水。本发明专利技术的试剂，可使通过经脉注射的骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶，解决了目前通过冠状动脉内注射所留下的细胞量较少的问题。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种。
技术介绍
虽然各种治疗方法不断在进步，心血管疾病仍然是导致死亡的一个主要原因。在发达国家，缺血性心脏病导致的死亡占由心血管疾病引起的死亡的50%以上。据美国国家健康和营养调查2005-2006年的数据，1/3或近80，000, 000的美国成年人患有一种或多种心血管疾病，其中大约有38，100，000人年龄在60或60岁以上。死亡资料显示2005年美国以心血管疾病(包括先天性心血管缺陷)为潜在原因引起的死亡人数为864，480，占总死亡人数2，448，017的35. 3%，或者说每2. 8个死亡人数中有一个是以心血管疾病为潜在原因而死的。2005年心血管疾病的总死亡人数(1，372，000)大约占了所有死亡人数的56%。 大约每天有2，400美国人死于心血管疾病，即每30秒就有一个人死于心血管疾病。每年死于心血管疾病的人几乎与死于癌症、慢性下呼吸道疾病、意外和糖尿病的人一样多(NCHS)。干细胞移植有可能修复和改善心脏状况，从而极大地帮助降低疾病的发生率和死亡率。Dib等人证实了自体成肌细胞移植的可行性、安全性和患者的成功生存，并指出干细胞移植可能是治疗末期心脏病的一个潜在的治疗方法。同种异体骨髓间充质细胞可以从骨髓中分离出来。它们可以通过培养大量增殖同时保持其多种潜能特性。它们是组织工程使用的初级细胞，可以表达多种细胞类型，组织工程是一个非常有前途有希望的领域，它让我们可以重建器官，修复病变和受损的组织。同种异体骨髓间充质细胞主要有两种造血骨髓干细胞(单核)和骨髓间充质干细胞。人们用后肢缺血再灌注模型进行研究，对这两种干细胞进行了深刻的对比。间充质干细胞有更强的修复作用，因为它们分泌更多与血管生成有关的细胞因子。间充质干细胞有多向分化潜能，能逃过受体免疫系统的检查，甚至能降低T细胞的反应，这使我们可以使用多种异体干细胞进行治疗。目前所记载的研究大部分都将干细胞注射到冠状动脉内和肌肉内。一个有698位病人的研究分析显示使用冠状动脉内注射干细胞治疗急性心肌梗塞对于恢复心脏功能和心脏变形能达到相关的临床效果。使用细胞治疗的病人其目标血管重建的需求并没有增加，研究发现治疗是安全的。虽然乍一看，冠状动脉内注射是细胞应用的一种方式，但放射标记骨髓细胞显示与肌肉内注射相比，冠状动脉内注射所留下的细胞量较少。但肌肉内注射只能对局部区域起作用。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的试剂。本专利技术所提供的使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的试剂，由使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的培养基和离体的骨髓间充质干细胞组成；所述使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的培养基，由溶质和溶剂组成，所述溶质由如下终浓度的七种物质组成葡萄糖 4. Og/L-5. Og/L，碳酸钠 0. llg/L-0. 19g/L，L-谷氨酰胺 0. 584g/L_0. 702g/L, 二甲基亚砜100ml/L-130ml/L，转铁蛋白50g/L_67g/L，胰岛素5g/L_6. 6g/L，碱性成纤维细胞生长因子0. 01g/L-0. 05g/L，所述溶剂为注射用水。所述溶质具体可由如下终浓度的七种物质组成葡萄糖4. 5g/L，碳酸钠0. llg/L，L-谷氨酰胺0. 584g/L，二甲基亚砜100ml/L，转铁蛋白50g/L，胰岛素5g/L，碱性成纤维细胞生长因子0. 01g/L。其中，所述转铁蛋白可为人转铁蛋白，所述胰岛素可为人胰岛素，所述碱性成纤维细胞生长因子可为人碱性成纤维细胞生长因子，所述骨髓间充质干细胞可为人骨髓间充质干细胞。所述培养基和所述离体的骨髓间充质干细胞的配比可为每毫升培养基IO6-IO8个所述骨髓间充质干细胞，具体可为每毫升培养基IO7个所述离体的骨髓间充质干细胞，如每毫升培养基(1. OX IO7-L 5 X IO7)个所述离体的骨髓间充质干细胞。所述离体的人骨髓间充质干细胞具体可为离体的人同种异体骨髓间充质干细胞。所述使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的试剂，可按照包括如下步骤的方法制备将所述离体的骨髓间充质干细胞和所述使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的培养基混合，得到所述的试剂。其中，所述骨髓间充质干细胞和所述使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的培养基可按照每毫升培养基IO6-IO8个所述离体的骨髓间充质干细胞靶的比例混合。本专利技术另一个目的是提供一种使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的成套试剂。该成套试剂是单剂量静脉注射剂，可直接用于治疗缺血性心肌病。该成套试剂包括上述使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的试剂、细胞稀释液和细胞染液；所述细胞染液能区分活细胞和死细胞；所述细胞稀释液为注射用生理盐水。本专利技术的另一个目的是提供一种使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的成套试齐U盒。该成套试剂盒包括所述的成套试剂、细胞计数板、用于存放所述使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的试剂的瓶A、用于存放所述细胞染液的瓶B和用于存放所述细胞稀释液的瓶C。所述成套试剂盒还可包括用于吸取细胞悬液的吸管和用于将所述细胞悬液放入所述细胞计数板的虹吸管。所述成套试剂盒可按照包括如下步骤的方法制备将所述使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的试剂单独包装于一个试剂盒；将所述细胞染液和所述细胞稀释液分别独立包装后，与所述吸管和虹吸管共同包装于另一个试剂盒内，得到由两个试剂盒组成的所述成套试剂盒。上述同种异体骨髓间充质干细胞可从商业途径获得，也可从同种异体的离体组织中分离得到。在实际应用中，每位患者，以骨髓间充质干细胞计，可一次性静脉注射1亿个上述骨髓间充质干细胞。本专利技术的使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的试剂，可使通过静脉注射的骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶，解决了目前通过冠状动脉内注射所留下的细胞量较少的问题。动物实验证明，本专利技术的使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的试剂可使心肌梗死的部位获得足够的干细胞进而分化成新生的心肌细胞。本专利技术的使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的试剂，临床使用操作非常方便且精确。为了进一步提高上述静脉注射剂的使用便捷度，方便储存和运输，供用户随时随地使用，本专利技术还提供了试剂盒。附图说明图1为左心室扫描图(上面标注的是>=15. OmV ；下面的是<=5. OmV)A为注射本专利技术的使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的试剂前B为注射本专利技术的使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的试剂后图2为心肌梗死动物模型心脏冠状切片TTC染色白色区域为心肌坏死区，粉红色区域为正常心肌。a、治疗组动物注射本专利技术的使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的试剂7天后的心肌切片b、对照组动物注射细胞稀释液后7天后的心肌切片图3为两组动物的心肌缺血面积比较图4为治疗组的免疫组织化学荧光染色结果具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的人同种异体骨髓间充质干细胞(Human Mesenchymal Stem Cells，来自美国 Stemedica Cell Technologies, Inc. , MM0013. Ol0 人胰岛素来自 Sigma， 10908 ；人转铁蛋白来本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的试剂，由使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的培养基和离体的骨髓间充质干细胞组成；所述使骨髓间充质干细胞靶向于心肌梗死灶的培养基，由溶质和溶剂组成；所述溶质由如下终浓度的七种物质组成：葡萄糖４．０ｇ／Ｌ－５．０ｇ／Ｌ，碳酸钠０．１１ｇ／Ｌ－０．１９ｇ／Ｌ，Ｌ－谷氨酰胺０．５８４ｇ／Ｌ－０．７０２ｇ／Ｌ，二甲基亚砜１００ｍｌ／Ｌ－１３０ｍｌ／Ｌ，转铁蛋白５０ｇ／Ｌ－６７ｇ／Ｌ，胰岛素５ｇ／Ｌ－６．６ｇ／Ｌ，碱性成纤维细胞生长因子０．０１ｇ／Ｌ－０．０５ｇ／Ｌ；所述溶剂为注射用水。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李戍，焦阳，焦守恕，曹卫，
申请(专利权)人：无锡人寰生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32
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