【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及。
技术介绍
肝素寡糖与普通肝素相比，同等剂量下，抗凝作用小于肝素，抗血栓作用却明显强于肝素，其分子量小，生物利用度高，血浆半衰期长，不与肝素结合蛋白结合，有更稳定的量效关系，较少与血小板结合，不易引起血小板减少。所以，肝素寡糖既能有效防止血栓形成， 又能减少出血等不良反应，是一种安全有效的抗血栓药物，可作肝素替代物。不同聚合度的肝素寡糖能和不同蛋白因子作用，从而呈现不同的生物学作用。所以，肝素寡糖的生产具有重要意义。现有技术有化学裂解法和酶解法，化学裂解法肝素反应剧烈，工艺复杂，肝素活性功能不同程度被破坏。酶解法反应条件温和，产率高，对环境无毒性，操作简便，易控制， 成为当前生物学研究的热点，国内外作了一些相关研究，但目前尚未出现一种成本比较低的酶解法生产工艺。
技术实现思路
本专利技术要解决的问题在于提供一种肝素酶的制备方法。，包括如下步骤1)肝素的酶法降解取肝素20mg，溶解于Iml反应液Digestion Buffer (25mM醋酸铵，25yMCaC12，0. 25μ g/ml BSA, ρΗ7· 4)中，加入肝素酶 I、II、III 各 500uL，37°C恒温振荡反应72小时，其中每12小时补充一次肝素酶，反应结束后，100°C水浴加热15min，并在 12000rpm下高速离心lOmin，取上清备用。2)肝素寡糖的分级纯化将步骤1得到的寡糖片段经过Bio-gel P2柱进行分级纯化，收集冻干，即成成品。经过降解的肝素寡糖片段，在链端具有不饱和双键，因此在232nm可测得明显的紫外吸收值。收集分级后的流出组分，通过测定紫外吸收，...
【技术保护点】
１．一种肝素寡糖的制备方法，包括如下步骤：１）肝素的酶法降解：取肝素２０ｍｇ，溶解于１ｍｌ反应液Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ中，加入肝素酶Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ各５００ｕＬ，３７℃恒温振荡反应７２小时，其中每１２小时补充一次肝素酶，反应结束后，１００℃水浴加热１５ｍｉｎ，并在１２０００ｒｐｍ下高速离心１０ｍｉｎ，取上清备用；２）肝素寡糖的分级纯化：将步骤１得到的寡糖片段经过Ｂｉｏ－ｇｅｌ Ｐ２柱进行分级纯化，收集冻干，即得成品。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王香，李海生，
申请(专利权)人：广元市海鹏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：51
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