一种肝素钠的纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种肝素钠纯化的方法，以共价结合的琼脂糖凝胶-抗凝血酶III为层析介质，用平衡液溶解粗品肝素，缓慢通过亲和层析介质，循环吸附3次；吸附完成后，用2-3个柱体积的洗涤液洗涤；再用2个柱体积的洗脱液将肝素洗下；最后加入提取液乙醇，搅拌，沉淀，脱水，过滤，烘干，得效价大于180Uusp/mg的高纯肝素钠。本发明专利技术的粗品肝素经一步纯化就将硫酸皮肤素及硫酸软骨素等相关物质的含量降低到药典的要求，极大地提高了生产效率，而且琼脂糖凝胶-抗凝血酶III层析介质经再生后，可重复使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生物药用原料的制备方法，属于生物工程领域，具体是一种肝素钠纯化方法。
技术介绍
粗品肝素中含有其它黏多糖，也含有一些残余的蛋白质和核酸类物质，从而使粗品肝素的效价过低。目前，在肝素提取纯化方面，主要采用有机溶剂(如乙醇、丙酮等)分步沉淀法、氧化纯化法、酶解辅助纯化法、离子交换法、亲和层析法等。这些方法各有特点，但也都有些不足之处，有的表现为产品在线时间长，有的表现为分离不完全，特别是粗品肝素中的硫酸皮肤素、硫酸软骨素等有关物质去除效果很难达到药典要求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于:提供一种肝素钠纯化方法，以共价结合的琼脂糖凝胶-抗凝血酶III为层析介质，运用亲和层析的原理纯化肝素钠粗品，去除硫酸皮肤素及硫酸软骨素，得到效价大于180Uusp/mg的高纯肝素钠，其中硫酸皮肤素及硫酸软骨素等相关物质含量远小于药典规定的含量要求。本专利技术的技术解决方案是:以共价结合的琼脂糖凝胶-抗凝血酶III为层析介质，用平衡液溶解粗品肝素，缓慢通过亲和层析介质，循环吸附3次;吸附完成后，用2-3个柱体积的洗涤液洗涤;再用2个柱体积的洗脱液将肝素洗下；最后加入提取液乙醇，搅拌，沉淀，脱水，过滤，烘干，得效价大于180Uusp/ mg的高纯肝素钠。其中，平衡液中含0.15MNaCl、20mM Tr i s_HCl，pH7.5 ;其中，洗涤液中含1.2-1.5MNaCl、20mM Tris-HCl，pH7.5;其中，洗脱液中含2MNaCl、20mM Tris-HCl，pH7.5;其中，提取液乙醇的质量浓度是94%，其体积是洗脱液体积的1.0-1.5倍，沉淀8-10小时。本专利技术的优点在于:1、粗品肝素经一步纯化就将硫酸皮肤素及硫酸软骨素等相关物质的含量降低到药典的要求，极大地提高了生产效率;2、琼脂糖凝胶-抗凝血酶III层析介质经再生后，可重复使用。【具体实施方式】下面结合具体实施例进一步说明本专利技术的技术解决方案，这些实施例不能理解为是对技术方案的限制。实施例1:取粗品肝素钠(来源于猪)2克，用100ml(0.15MNaCl，20mM Tris-HCl,pH7.5)平衡液溶解，缓慢通过琼脂糖凝胶-抗凝血酶III亲和层析介质(2ml/min)，循环吸附3次;吸附完成后，用2-3个柱体积的洗涤液(1.2MNaCl，20mM Tris-HCl,pH7.5)洗涤;再用2个柱体积的洗脱液(2MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5)将肝素洗下;最后按洗脱液的体积加入洗脱液体积1.5倍的质量浓度94%的乙醇，搅拌，沉淀10小时，脱水，过滤，烘干，得效价大于ISOUusp/mg的高纯肝素钠。硫酸皮肤素及硫酸软骨素等相关物质的液相色谱峰面积仅为对照品的1/5，符合药典要求。实施例2:取粗品肝素钠(来源于猪)1.8克，用100ml(0.15MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5)平衡液溶解，缓慢通过琼脂糖凝胶-抗凝血酶III亲和层析介质(2ml/min)，循环吸附3次;吸附完成后，用2-3个柱体积的洗涤液(1.35MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5)洗涤;再用2个柱体积的洗脱液(2MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5)将肝素洗下;最后按洗脱液的体积加入洗脱液体积1.25倍的质量浓度94%的乙醇，搅拌，沉淀9小时，脱水，过滤，烘干，得效价大于185UuSp/mg的高纯肝素钠。硫酸皮肤素及硫酸软骨素等相关物质的液相色谱峰面积仅为对照品的1/6，符合药典要求。实施例3:取粗品肝素钠(来源于牛)1.5克，用100ml(0.15MNaCl，20mM Tris-HCl,pH7.5)平衡液溶解，缓慢通过琼脂糖凝胶-抗凝血酶III亲和层析介质(2ml/min)，循环吸附3次;吸附完成后，用2-3个柱体积的洗涤液(1.5MNaCl，20mM Tris-HCl,pH7.5)洗涤;再用2个柱体积的洗脱液(2MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5)将肝素洗下;最后按洗脱液的体积加入洗脱液体积1.0倍的质量浓度94%的乙醇，搅拌，沉淀8小时，脱水，过滤，烘干，得效价大于190UuSp/mg的高纯肝素钠。液相色谱图中未见硫酸皮肤素及硫酸软骨素等相关物质的峰，符合药典要求。以上所述，仅是本专利技术的较佳实施例而已，并非是对本专利技术作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的
技术实现思路
加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本专利技术技术方案内容，依据本专利技术的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本专利技术技术方案的保护范围。【主权项】1.，特征是:以共价结合的琼脂糖凝胶-抗凝血酶III为层析介质，用平衡液溶解粗品肝素，缓慢通过亲和层析介质，循环吸附3次;吸附完成后，用2-3个柱体积的洗涤液洗涤;再用2个柱体积的洗脱液将肝素洗下；最后加入提取液乙醇，搅拌，沉淀，脱水，过滤，烘干，得效价大于180Uusp/ mg的高纯肝素钠。2.根据权利要求1所述的肝素钠纯化方法，其特征是:所述平衡液中含0.15MNaCl、20mMTris-HCl，pH7.503.根据权利要求1所述的肝素钠纯化方法，其特征是:所述洗涤液中含1.2-1.5MNaCl、20mM Tris-HCl，pH7.5。4.根据权利要求1所述的肝素钠纯化方法，其特征是:所述洗脱液中含2MNaCl、20mMTris-HCl，pH7.505.根据权利要求1所述的肝素钠纯化方法，其特征是:所述提取液乙醇的质量浓度是94%，其体积是洗脱液体积的1.0-1.5倍，沉淀8-10小时。【专利摘要】本专利技术公开了一种肝素钠纯化的方法，以共价结合的琼脂糖凝胶-抗凝血酶III为层析介质，用平衡液溶解粗品肝素，缓慢通过亲和层析介质，循环吸附3次；吸附完成后，用2-3个柱体积的洗涤液洗涤；再用2个柱体积的洗脱液将肝素洗下；最后加入提取液乙醇，搅拌，沉淀，脱水，过滤，烘干，得效价大于180Uusp/mg的高纯肝素钠。本专利技术的粗品肝素经一步纯化就将硫酸皮肤素及硫酸软骨素等相关物质的含量降低到药典的要求，极大地提高了生产效率，而且琼脂糖凝胶-抗凝血酶III层析介质经再生后，可重复使用。【IPC分类】C08B37/10【公开号】CN105440161【申请号】CN201510880067【专利技术人】刘冠男, 刘忠凯, 迟培升 【申请人】青岛九龙生物医药有限公司【公开日】2016年3月30日【申请日】2015年12月6日本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肝素钠的纯化方法，特征是：以共价结合的琼脂糖凝胶‑抗凝血酶III为层析介质，用平衡液溶解粗品肝素，缓慢通过亲和层析介质，循环吸附3次；吸附完成后，用2‑3个柱体积的洗涤液洗涤；再用2个柱体积的洗脱液将肝素洗下；最后加入提取液乙醇，搅拌，沉淀，脱水，过滤，烘干，得效价大于180Uusp/mg的高纯肝素钠。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘冠男，刘忠凯，迟培升，
申请(专利权)人：青岛九龙生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37