牛乳寡糖测定方法技术
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种牛乳寡糖测定方法。
技术介绍
寡糖(低聚糖)是少数单糖(2-10个)缩合的聚合物，可通过多糖水解得到，是牛奶中最丰富的固体组成之一。研究表明，牛乳寡糖可以作为益生元刺激新生儿肠道有益微生物的生长。然而，由于牛乳中寡糖种类和结构的多样性，及其极微量的含量，使得牛乳中寡糖含量的测定和结构的测定存在很大挑战，目前国内并没有一个牛乳寡糖的检测方法。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术还有一个目的是提供一种牛乳寡糖测定方法。为此，本专利技术提供的技术方案为：一种牛乳寡糖测定方法，包括如下步骤：步骤一、提取牛乳寡糖粗品；步骤二、首先利用Sep-Pak C18柱将牛乳寡糖粗品进行纯化，得到纯化的牛乳寡糖液体，之后利用石墨化柱体将纯化的牛乳寡糖体进行富集，得到富集的牛乳寡糖液体，最后将富集的牛乳寡糖液体干燥，得到牛乳寡糖；步骤三、采用2-氨基吖啶酮衍生化试剂对步骤二中得到的牛乳寡糖进行衍生化处理；以及步骤四、采用高效液相串联离子阱飞行时间质谱对衍生化的牛乳寡糖进行测定。优选的是，所述的牛乳寡糖测定...
【技术保护点】
一种牛乳寡糖测定方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、提取牛乳寡糖粗品；步骤二、首先利用Sep‑Pak C18柱将牛乳寡糖粗品进行纯化，得到纯化的牛乳寡糖液体，之后利用石墨化柱体将纯化的牛乳寡糖体进行富集，得到富集的牛乳寡糖液体，最后将富集的牛乳寡糖液体干燥，得到牛乳寡糖；步骤三、采用2‑氨基吖啶酮衍生化试剂对步骤二中得到的牛乳寡糖进行衍生化处理；以及步骤四、采用高效液相串联离子阱飞行时间质谱对衍生化的牛乳寡糖进行测定。
【技术特征摘要】
1.一种牛乳寡糖测定方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、提取牛乳寡糖粗品；步骤二、首先利用Sep-Pak C18柱将牛乳寡糖粗品进行纯化，得到纯化的牛乳寡糖液体，之后利用石墨化柱体将纯化的牛乳寡糖体进行富集，得到富集的牛乳寡糖液体，最后将富集的牛乳寡糖液体干燥，得到牛乳寡糖；步骤三、采用2-氨基吖啶酮衍生化试剂对步骤二中得到的牛乳寡糖进行衍生化处理；以及步骤四、采用高效液相串联离子阱飞行时间质谱对衍生化的牛乳寡糖进行测定。2.如权利要求1所述的牛乳寡糖测定方法，其特征在于，以体积份数计，所述步骤一中，提取牛乳寡糖粗品的具体方法包括：1.1)取100份牛乳，于10℃、10×104g条件下超高速离心90min，除去底部的酪蛋白和上层的脂肪；以及1.2)取50份中间水层加入100份的无水乙醇，4℃放置2h，于4℃、4000r/min条件下离心30min，重复离心两次后，取上清液，然后用浓缩仪浓缩干燥，得到所述牛乳寡糖粗品。3.如权利要求2所述的牛乳寡糖测定方法，其特征在于，以体积份数计，所述步骤二中，利用Sep-Pak C18柱将牛乳寡糖粗品进行纯化的具体方法包括：2.1)首先用50份甲醇平衡Sep-Pak C18柱，然后用100份0.1％(v/v)TFA润洗Sep-PakC18柱子；以及2.2)将所述牛乳寡糖粗品溶于2份0.1％(v/v)TFA中，然后上样到Sep-Pak C18柱中，收集过柱液体，将收集的液体再次加入Sep-Pak C18中，再次收集过柱液体，重复2次，最后用30份0.1％TFA(v/v)冲洗Sep-Pak C18，也收集过柱液体，合并过柱液体得到所述纯化的牛乳寡糖液体。4.如权利要求1所述的牛乳寡糖测定方法，其特征在于，以体积份数计，所述步骤二中，利用石墨化柱体将纯化的牛乳寡糖液体进行富集的具体方法包括：2.3)首先用3倍柱体积的含有0.10(v/v)％TFA的乙腈溶液80％(v/v)和纯水依次通过石墨化柱体，然后将所述纯化的牛乳寡糖液体上样于所述石墨化柱体中，控制流速约0.5～1ml/min，收集过柱液体，将过柱液体重复通过所述石墨化柱体若干次；2.4)用3倍柱体积的纯水通过所述石墨化柱体；2.5)分别采用5份含有0.10％(v/v)TFA的乙腈溶液10％(...
【专利技术属性】
技术研发人员：吕加平，芦晶，陈新新，刘鹭，逄晓阳，张书文，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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