【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及荔枝的基因克隆、基因功能分析等分子生物学实验，具体涉及一种提取荔枝总RNA的方法，适用于荔枝等富含多糖、酚类化合物植物组织总RNA的提取。
技术介绍
荔枝是我国热带、亚热带地区的著名特色果树，对它的研究已经引起人们的广泛重视。就荔枝遗传学研究来看，传统的研究主要是从形态学及植物生理方面进行的，逐步已经转向运用分子生物学的方法对其进行分子方面的研究。植物总RNA提取技术是一项植物分子生物学的基本实验技术，也是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。利用分离得到的纯度高、完整性好的高质量总RNA，才能用于 Northern杂交，mRNA纯化、构建cDNA文库、通过RT-PCR分离基因以及进行蛋白质体外翻译等分子生物学实验操作。常用的植物组织总RNA提取方法有胍法、苯酚法、Tris-硼酸法、 CTAB法、TRIZOL试剂盒法等，这些方法已经被广泛用于许多植物组织总RNA的提取，但有一些植物组织中内含物极为复杂，尤其是在富含多糖、多酚、单宁及一些尚未能确定的次生代谢物等情况下，不利于RNA的分离和纯化，因此能否有效地去除或抑制多糖、酚类等代谢物的干扰是提取高...
【技术保护点】
１．一种提取荔枝总ＲＮＡ的方法，其特征是包括如下步骤：１）、将采集的用液氮进行速冻处理的荔枝嫩叶片样品，加入ＰＶＰ及液氮进行研磨成细粉后，转入离心管中，加入已于－２０℃进行预冷的７０％丙酮，混匀，抽提，４℃，８０００～１３０００ｇ，离心１０～２０ｍｉｎ，弃上清液；重复抽提２～３次，保留抽提过的植物材料；２）、在步骤（１）抽提后的植物材料中加入于６０℃预热的ＲＮＡ提取液５．５ｍｌ，并于６０℃水浴１０－３０ｍｉｎ；所述ＲＮＡ提取液是由如下组分组成：Ｔｒｉｓ Ｂａｓｅ １５０ｍｍｏｌ／Ｌ、Ｈ３ＢＯ３ ５７５ｍｍｏｌ／Ｌ、ＥＤＴＡ ５０ｍｍｏｌ／Ｌ、ＮａＣｌ ０．５ｍｏｌ／Ｌ、ＳＤ...
【技术特征摘要】
1.一种提取荔枝总RNA的方法，其特征是包括如下步骤1)、将采集的用液氮进行速冻处理的荔枝嫩叶片样品，加入PVP及液氮进行研磨成细粉后，转入离心管中，加入已于-20°C进行预冷的70 %丙酮，混勻，抽提，4°C，8000 13000g，离心10 20min，弃上清液；重复抽提2 3次，保留抽提过的植物材料；2)、在步骤(1)抽提后的植物材料中加入于60°C预热的RNA提取液5.5ml，并于60°C水浴 10-30min ；所述 RNA 提取液是由如下组分组成Tris Base 150mmol/L, H3B03 575mmol/ L、EDTA 50mmol/L、NaCl 0. 5mol/L、SDS 4% ；3)、在步骤( 所得水浴后的植物材料中缓慢加入200μ 1 β-巯基乙醇、1.375ml无水乙醇和605 μ 1 5mol/L的KAc，混勻，再加入等体积的氯仿/异戊醇混合液，混勻，4°C， 8000 13000g，离心30min;所述氯仿/异戊醇混合液是将氯仿、异戊醇按体积比为M 1 的比例混合而成；4)、吸取离心后的上清液，再加入等体积的...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴志祥，印华，王令霞，周兆德，陶忠良，羊辛凤，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院橡胶研究所，
类型：发明
国别省市：66
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