呼吸道病毒检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术涉及一种呼吸道病毒检测试剂盒同时提供一种采用该试剂盒的呼吸道病毒检测方法。所述试剂盒包含8组引物及其探针，所述引物中，下游引物5′端均以生物素标记。所述检测方法利用引物对待测样品中核酸进行扩增，形成的生物素化产物与固定于芯片表面的探针杂交形成探针-生物素化产物复合物。碱性磷酸酶-链霉亲和素偶联物与探针-生物素化产物复合物结合，再利用显色底物四唑硝基蓝/5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐(NBT/BCIP)与碱性磷酸酶发生呈色(蓝紫色)反应。通过判读在特定位点是否呈色，来检测样品中是否含有待检测的呼吸道病毒。该试剂盒检测通量高、快速、灵敏以及特异性强，具有很强的实用性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学领域，尤其涉及一种。
技术介绍
常见的呼吸道病毒包括SARS (Severe Acute Respiratory Syndromes，严重急性呼吸综合症)病毒、A、B型流感病毒、副流感病毒I、II、III型、呼吸道融合病毒、腺病毒等， 在很多人口密集的公共场所如火车站、广场等需要对上述病毒进行检测，以防止病毒在人群中的快速扩散，避免造成大面积的呼吸道疾病爆发。然而，传统的呼吸道病毒检测方法检测时间较长且灵敏度较低，无法应对突发性的呼吸道病毒检测。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种检测时间较短且灵敏度较高的呼吸道病毒检测试剂盒及采用上述呼吸道病毒检测试剂盒的呼吸道病毒检测方法。一种呼吸道病毒检测试剂盒，包括选自如下8组引物中的至少一组第1组引物用于扩增SARS病毒的如SEQ ID NO. 1所示的核酸片段；第2组引物用于扩增A型流感病毒的如SEQ ID NO. 2所示的核酸片段；第3组引物用于扩增B型流感病毒的如SEQ ID NO. 3所示的核酸片段；第4组引物用于扩增副流感病毒I型的如SEQ ID N0. 4所示的核酸片段；第5组引物用于扩增副流感病毒II型的如SEQ ID N0. 5所示的核酸片段；第6组引物用于扩增副流感病毒III型的如SEQ ID N0. 6所示的核酸片段；第7组引物用于扩增呼吸道融合病毒的如SEQ ID N0. 7所示的核酸片段；第8组引物用于扩增腺病毒的如SEQ ID N0. 8所示的核酸片段。优选的，所述第1组引物上游引物序列如SEQ ID N0. 9所示，下游引物序列如SEQ ID N0. 17 所示；所述第2组引物上游引物序列如SEQ ID NO. 10所示，下游引物序列如SEQ ID N0. 18所示；所述第3组引物上游引物序列如SEQ ID NO. 11所示，下游引物序列如SEQID N0. 19所示；所述第4组引物上游引物序列如SEQ ID N0. 12所示，下游引物序列如SEQ ID N0. 20所示；所述第5组引物上游引物序列如SEQ ID N0. 13所示，下游引物序列如SEQ ID N0. 21所示；所述第6组引物上游引物序列如SEQ ID N0. 14所示，下游引物序列如SEQ ID N0. 22所示；所述第7组引物上游引物序列如SEQ ID N0. 15所示，下游引物序列如SEQ ID5NO. 23所示；所述第8组引物上游引物序列如SEQ ID NO. 16所示，下游引物序列如SEQ ID NO. 24所示。 少一个优选的，还包括探针，所述探针为如下8个与所述8组引物对应的核酸片段中的至第1个探针与如SEQ ID NO. 1所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQIDN0. 25ID NO. 2所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQIDW). 26ID N0. 3所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQIDN0.27ID N0. 4所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQIDW). 28ID N0. 5所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQIDW). 29ID N0. 6所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQIDW). 30ID N0. 7所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQIDN0.31ID N0. 8所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQIDN0.32第2个探针与如SEQ 第3个探针与如SEQ 第4个探针与如SEQ 第5个探针与如SEQ 第6个探针与如SEQ 第7个探针与如SEQ 第8个探针与如SEQ所示；所示；所示；所示；所示；所示；所示；所示。优选的，还包括固相载体，所述固相载体包括基体和固定在所述基体上的附着层， 所述探针固定在所述附着层上。优选的，所述探针的5'端连接有15个胸腺嘧啶(T)。优选的，还包括阳性质控探针以及与所述阳性质控探针互补的阳性探针。所述阳性质控探针序列如SEQ ID N0. 33所示。所述阳性探针的序列如SEQ ID N0. 34所示。一种呼吸道病毒的检测方法，包括下述步骤步骤一、提取待测样品中的核酸；步骤二、扩增待测样品中的核酸得到核酸片段，所述核酸片段为如下核酸片段中的至少一种SARS病毒的基因的如SEQ ID NO. 1所示的核酸片断；A型流感病毒的基因的如SEQ ID N0. 2所示的核酸片断；B型流感病毒的基因的如SEQ ID N0. 3所示的核酸片断；副流感病毒I型的基因的如SEQ ID N0. 4所示的核酸片断；副流感病毒II型的基因的如SEQ ID N0. 5所示的核酸片断；副流感病毒III型的基因的如SEQ ID N0. 6所示的核酸片断；呼吸道融合病毒的基因的如SEQ ID N0. 7所示的核酸片断；腺病毒的基因的如SEQ ID N0. 8所示的核酸片断； 步骤三、用探针进行检测，所述探针与步骤二中的扩增产物特异性杂交。 优选的，步骤二使用如下8组寡核苷酸片段中的至少一组作为引物进行扩增 第l组引物用于扩增SARS病毒的核酸片段，上游引物序列如SEQ工D N。．9所示，下游引物序列如SEQ工D N。．17所示； 第3组引物用于扩增B型流感病毒的核酸片段，上游引物序列如SEQ工DN。．11所示，下游引物序列如SEQ工D N。．19所示； 第4组引物用于扩增副流感病毒工型的核酸片段，上游引物序列如SEQ工DN。．12所示，下游引物序列如SEQ工D N。．20所示； 第5组引物用于扩增副流感病毒II型的核酸片段，上游引物序列如SEQ工DN。．13所示，下游引物序列如SEQ工D N。．2l所示； 第6组引物用于扩增副流感病毒II工型的核酸片段，上游引物序列如SEQ工DN。．14所示，下游引物序列如SEQ工D N。．22所示； 第7组引物用于扩增呼吸道融合病毒的核酸片段，上游引物序列如SEQ工DN。．15所示，下游引物序列如SEQ工D N。．23所示； 第8组引物用于扩增腺病毒的核酸片段，上游引物序列如SEQ工D N。．16所示，下游引物序列如SEQ工D N。．24所示。 优选的，步骤三中所述探针为具有如下序列的8个核酸片断中的至少一个 第1个探针与如SEQ工D N。．1所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQ工DN。．25所示； 第2个探针与如SEQ工D N。．2所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQ工DN。．26所示； 第3个探针与如SEQ工D N。．3所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQ工DN。．27所示； 第4个探针与如SEQ工D N。．4所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQ工DN。．28所示； 第5个探针与如SEQ工D N。．5所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQ工DN。．29所示； 第6个探针与如SEQ工D N。．6所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQ工DN。．30所示； 第7个探针与如SEQ工D N。．7所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQ工DN。．3l所示； 第8个探针与如SEQ工D N。．8所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQ工DN。．32所示。 优选的，步骤三中所述探针与所述扩增产物的杂交在固相载体上进行； 所述固相载体包括基体和固定在所述基体上的附着层，所述探针固定在所述附着层上。 根据多种呼吸道病毒的基本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种呼吸道病毒检测试剂盒，其特征在于，包括选自如下８组引物中的至少一组：第１组引物用于扩增ＳＡＲＳ病毒的如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１所示的核酸片段；第２组引物用于扩增Ａ型流感病毒的如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．２所示的核酸片段；第３组引物用于扩增Ｂ型流感病毒的如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．３所示的核酸片段；第４组引物用于扩增副流感病毒Ｉ型的如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．４所示的核酸片段；第５组引物用于扩增副流感病毒ＩＩ型的如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．５所示的核酸片段；第６组引物用于扩增副流感病毒ＩＩＩ型的如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．６所示的核酸片段；第７组引物用于扩增呼吸道融合病毒的如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．７所示的核酸片段；第８组引物用于扩增腺病毒的如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．８所示的核酸片段。

【技术特征摘要】
1.一种呼吸道病毒检测试剂盒，其特征在于，包括选自如下8组引物中的至少一组 第1组引物用于扩增SARS病毒的如SEQ ID NO. 1所示的核酸片段；第2组引物用于扩增A型流感病毒的如SEQ ID NO. 2所示的核酸片段； 第3组引物用于扩增B型流感病毒的如SEQ ID NO. 3所示的核酸片段； 第4组引物用于扩增副流感病毒I型的如SEQ ID NO. 4所示的核酸片段； 第5组引物用于扩增副流感病毒II型的如SEQ ID NO. 5所示的核酸片段； 第6组引物用于扩增副流感病毒III型的如SEQ ID NO. 6所示的核酸片段； 第7组引物用于扩增呼吸道融合病毒的如SEQ ID NO. 7所示的核酸片段； 第8组引物用于扩增腺病毒的如SEQ ID NO. 8所示的核酸片段。2.如权利要求1所述的呼吸道病毒检测试剂盒，其特征在于，所述第1组引物上游引物序列如SEQ ID NO. 9所示，下游引物序列如SEQID NO. 17所示；所述第2组引物上游引物序列如SEQ ID NO. 10所示，下游引物序列如SEQ ID NO. 18 所示；所述第3组引物上游引物序列如SEQ ID NO. 11所示，下游引物序列如SEQID NO. 19 所示；所述第4组引物上游引物序列如SEQ ID NO. 12所示，下游引物序列如SEQ ID NO. 20 所示；所述第5组引物上游引物序列如SEQ ID NO. 13所示，下游引物序列如SEQ ID NO. 21 所示；所述第6组引物上游引物序列如SEQ ID NO. 14所示，下游引物序列如SEQ ID NO. 22 所示；所述第7组引物上游引物序列如SEQ ID NO. 15所示，下游引物序列如SEQ ID NO. 23 所示；所述第8组引物上游引物序列如SEQ ID NO. 16所示，下游引物序列如SEQ ID NO. 24 所示。3.如权利要求1或2所述的呼吸道病毒检测试剂盒，其特征在于，还包括探针，所述探针为如下8个与所述8组引物对应的核酸片段至少一种第1个探针与如SEQ ID NO. 1所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQ IDN0. 25所示; 第2个探针与如SEQ ID NO. 2所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQ IDN0. 26所示; 第3个探针与如SEQ ID NO. 3所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQ IDN0. 27所示; 第4个探针与如SEQ ID NO. 4所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQ IDN0. 28所示; 第5个探针与如SEQ ID NO. 5所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQ IDN0. 29所示; 第6个探针与如SEQ ID NO. 6所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQ IDN0. 30所示; 第7个探针与如SEQ ID NO. 7所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQ IDN0. 31所示; 第8个探针与如SEQ ID NO. 8所示的核酸片断特异性结合，序列如SEQ IDN0.32所示。4.如权利要求3所述的呼吸道病毒检测试剂盒，其特征在于，还包括固相载体，所述固相载体包括基体和固定在所述基体上的附着层，所述探针固定在所述附着层上。5.如权利要求3所述的呼吸道病毒检测试剂盒，其特征在于，所述探针的5'端连接有15个胸腺嘧啶。6.如权利要求1所述的呼吸道病毒检测试剂盒，其特征在于，还包括阳性质控探针以及与所述阳性质控探针互补的阳性探针；所述阳性质控探针序列如SEQ ID NO. 33所示，所述阳性探针的序列如SEQID NO. 34所7.一种呼吸道病毒的...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾大勇，黄彤文，李永进，张巍，史蕾，孙秋香，刘春晓，赵纯中，杨燕秋，徐云庆，孙杰，莫秋华，杨泽，庄卫东，
申请(专利权)人：深圳国际旅行卫生保健中心，深圳博尔美生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：94