一种枯草芽孢杆菌ZDY1982在降解真菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇中的应用，枯草芽孢杆菌ZDY1982在营养肉汤液体培养基中37℃、180rpm摇床培养12小时，可完全降解液体中脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素，降解产物为无毒性的产物。本发明专利技术的优点是：枯草芽孢杆菌ZDY1982可以在温和的条件下，利用生物合成和酶学途径将食物或饲料中污染的脱氧雪腐镰刀菌烯醇完全降解，并且可避免用物理或化学方法处理真菌毒素导致的降解不完全和营养成分被破坏的缺点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种降解真菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇，尤其涉及一种枯草芽孢杆菌 S3Y1982在降解真菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇中的应用。
技术介绍
随着人们对食品安全重视程度的提高，许多国家和地区纷纷采取多种生产质量管理规范，如良好农业规范(Good Agricultural Practices, GAP)、良好药品生产规范(Good Manufacture Practice, GMP)和危害分析及关键控制点(Hazard Analysis and Critical Control Point, HACCP)等，保障从“田园到餐桌”的食品安全供应链体系。我国科技部也于2002,2006年分别启动了 “十五”、“十一五”国家科技重大专项“食品安全关键技术”，强调建设和加强我国食品安全的支撑体系。真菌毒素作为影响食品安全的一大隐患，成为这次科技攻关的核心问题。目前用于控制食物链真菌毒素水平的方式有物理、化学的方法。加热、紫外照射和离子辐射等物理方法虽能破坏霉菌孢子活性，但不能完全有效地控制食品或饲料中真菌毒素的水平，而化学方法虽然能破坏真菌毒素，但也会对营养成分造成极大的破坏，并导致化学试剂残留对健康危害的不确定性。国外研究的热点是寻找生物技术的方法和手段替代上述物理化学方法来控制食品和饲料中的真菌毒素水平。近年来，采用微生物的方法控制食物链中的真菌毒素已被科学界所关注。许多学者试图通过微生物发酵的方法减少或消除谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的污染，并取得了一定的进展。本专利技术着力于益生菌降解真菌毒素的研究，是基于益生菌良好的生理功能，以乳酸菌、双歧杆菌和枯草芽孢杆菌为代表的益生菌可促进动物或人体原生微生物菌群生长而对宿主产生有益的影响，还具有抑制有害菌的生长、消除致癌因子、提高机体免疫力、降低胆固醇等重要生理功效，而且具有使用安全、无残留、不产生抗药性等优点。目前，国内外很少有关益生菌降解或清除真菌毒素的研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种枯草芽孢杆菌ZDY1982在降解真菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇中的应用，该枯草芽孢杆菌菌株具有很强的降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇的能力， 使用安全、无残留、不产生抗药性。本专利技术是这样来实现的，枯草芽孢杆菌ZDY1982在营养肉汤液体培养基中37°C、 180 rpm摇床培养12小时，可完全降解液体中脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素，降解产物为无毒性的产物，所述枯草芽孢杆菌ZDY1982保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏时间2010年 6月22日，保藏编号M2010153。产物可制备成酶制剂、活菌制剂、口服制剂或药品。1、消除液体培养基对间接竞争ELISA检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇干扰的方法 在大规模筛选降解菌株时，专利技术人发现MRS (Mann-Rogosa-Sharpe medium)培养基对间接竞争ELISA反应产生强烈的干扰。为消除培养基的干扰，专利技术人设计了一系列MRS稀释度实验，以纯水为参照物，实验结果显示经8倍稀释，MRS培养基的干扰可以忽略。2、菌株培养产物制备酶制剂的方法酶制剂是工业应用的添加剂之一，目前酶制剂有粉剂、片剂等，以枯草芽孢杆菌 ZDY1982培养物制成的酶制剂是利用生化分离的手段(包括各种分离柱、制备色谱等)将菌株代谢产物加以纯化得到较纯的毒素降解酶，制成干粉或通过压片等方式做成片剂产品。3、制备活菌制剂的方法在大规模工业处理污染物时，利用生物学方法获得的活菌株进行液体发酵处理来达到消除污染的效果是目前科学界非常感兴趣的应用。本专利技术获得的菌株可经过简单的培养而大量获得降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇的活菌体，在培养至菌体对数期(12到16小时)时，取出并添加部分营养装成活菌液体制剂或添加固形物制成固体活菌制剂。4、制备人体或动物体解毒的口服制剂或药品的方法目前许多厂家将枯草芽孢杆菌制成调节肠道的口服制剂，而不是专门用于排除误食入人体或动物体的脱氧雪腐镰刀菌烯醇。本专利技术获得菌株的一个重要的应用就是将液体培养获得的菌体在4000转离心10分钟，并用生理盐水洗涤3次后，添加到以脱脂奶粉等可食用蛋白粉和牛肉膏配成的营养液中制成菌悬液。本专利技术的优点是枯草芽孢杆菌ZDY1982可以在温和的条件下，利用生物合成和酶学途径将食物或饲料中污染的脱氧雪腐镰刀菌烯醇完全降解，并且可避免用物理或化学方法处理真菌毒素导致的降解不完全和营养成分被破坏的缺点。附图说明图1为菌株降解液体培养基中脱氧雪腐镰刀菌烯醇实验图。图2为菌体和上清液降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素实验图。图3为枯草芽孢杆菌ZDY1982上清液热处理后降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇实验图。具体实施例方式实施例1 1.将待测菌株从保藏的冻干管中分别接至平板上活化2次，37°C培养18小时取出备用；2.将活化好的待测菌株接入MRS或营养肉汤(NB)液体培养基，并根据文献模拟成 lyg/mL的食品污染模型。在37°C、厌氧或180 rpm摇床培养12小时，培养液于3000 rpm 离心15分钟，上清液备用；3.用预先调成微碱性的超纯水进行8倍稀释，并确定其pH值为中性；4.用间接竞争ELISA试剂盒对所有待测菌株的培养液进行检测；5.实验结果如图1所示横坐标为测试菌株编号(1号为枯草芽胞杆菌ZDY1982;2号为枯草芽胞杆菌KM ；3号为地衣芽胞杆菌；4号为鼠李糖乳杆菌；5号为保加利亚乳杆菌；6 号为嗜酸乳杆菌2c菌株；7号为纤维二糖乳杆菌；8号为卷曲乳杆菌；9号为发酵乳杆菌；10 号为嗜酸乳杆菌12 菌株；11号为德氏乳杆菌；12号为嗜酸乳杆菌160b菌株；13号为植物乳杆菌)，同时设NB培养基+脱氧雪腐镰刀菌烯醇为对照组14号；MRS培养基+脱氧雪腐镰刀菌烯醇为对照组15号。纵坐标为测试样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的残留浓度。ND表示没有检测到样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的残留浓度(ng/mL)。从图1可以看出1号枯草芽胞杆菌ZDY1982中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的残留浓度低于检测限，说明其有强烈的降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇作用。实施例2:1.将芽孢杆菌分别于37°C，180 rpm振荡培养12 h,4000 rpm离心10 min分离上清液和菌体。2.上清液用0.22 μ m微滤膜过滤，收集过滤液；3.菌体用生理盐水洗涤两次，以清除残留的上清液，最后用生理盐水悬浮，使得菌体浓度为 101° CFU/mL ；4.分别取过滤除菌的上清液和菌悬液980μ L，并分别加入50 yg/mL的脱氧雪腐镰刀菌烯醇水溶液20 μ L，使得脱氧雪腐镰刀菌烯醇终浓度为1 μ g/mL, 37°C静止温育3 h 和14 h取样；5.用间接竞争ELISA试剂盒检测样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的残留浓度；6.实验结果如图2所示横坐标表示测试菌株编号(1号为枯草芽胞杆菌ZDY1982；2 号为地衣芽胞杆菌；3号为蜡样芽孢杆菌；代表上清液，代表菌体)，同时设三个对照组 (水+脱氧雪腐镰刀菌烯醇为对照组4 ；NB培养基为对照组5 ；NB培养基+脱氧雪腐镰刀菌烯醇为对照组6)。纵坐标为测试样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的残留浓度(ng/mL)。ND表示没有检测到样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的残留浓度。从图2中可以看出，枯草芽孢杆菌 ZDY1982的上清液()中脱氧雪腐镰刀菌烯醇残留浓度低于ELISA本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种枯草芽孢杆菌ＺＤＹ１９８２在降解真菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇中的应用，其特征是枯草芽孢杆菌 ＺＤＹ１９８２在营养肉汤液体培养基中３７℃、１８０ ｒｐｍ摇床培养１２小时，可完全降解液体中脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素，降解产物为无毒性的产物，所述枯草芽孢杆菌ＺＤＹ１９８２保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏时间２０１０年６月２２日，保藏编号：Ｍ２０１０１５３。
【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌ZDY1982在降解真菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇中的应用，其特征是枯草芽孢杆菌ZDY1982在营养肉汤液体培养基中37°C、180 rpm摇床培养12小时， 可完全降解液体中脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素，降解产物为无毒性的产物，所述枯草芽...
【专利技术属性】
技术研发人员：魏华，程波财，万翠香，曾明，徐锋，陈廷涛，许恒毅，郭亮，杨史良，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：36
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