同时检测谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和伏马菌素B1金花纳米颗粒免疫层析试纸条的制备方法技术

一种同时检测谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和伏马菌素B1金花纳米颗粒免疫层析试纸条的制备方法，包括(1) DON单克隆抗体-金花纳米颗粒标记物和FB1单克隆抗体-金花纳米颗粒标记物的制备； (2) 金标结合物释放垫的处理；(3) 硝酸纤维素膜的包被；（4）试纸条的制作等步骤。本发明专利技术特异性，灵敏度高；检测结果形象、直观；操作简便、快速；易于大范围推广应用。广泛适用于粮食收购现场检测、食品安全检测、海关检疫等需求。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种同时检测谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和伏马菌素B1金花纳米颗粒免疫层析试纸条的制备方法，其特征是包括如下步骤：(1) DON单克隆抗体‑金花纳米颗粒标记物和FB1单克隆抗体‑金花纳米颗粒标记物的制备：a.向两个锥型瓶中分别加入5‑10 mL的60‑70 nm的金花纳米颗粒溶液，然后分别加入适量K2CO3溶液调节溶液的pH为5.5‑7.5；b.分别取0.1‑20 μL的浓度为5 mg/mL DON抗体和2 mg/mL FB1抗体，稀释30‑50倍后，然后分别逐渐加入到步骤（a）的金花纳米颗粒溶液中，快速搅拌反应60 min；c.分别加入BSA，终浓度为1.0%，反应30 min；d.分别加入PEG‑20000，终浓度为0.1%，反应30 min；e.反应后分别采用10000 rpm离心60 min；f.弃去上清，沉淀分别采用含5%蔗糖、1%BSA、0.5%PEG‑20000、2%海藻糖PBS溶液的金子稀释液复溶； (2) 金标结合物释放垫的处理：将金标结合物释放垫放入含0.5%BSA、5%蔗糖、0.5%PEG‑20000 的浓度为0.01 M的PBS溶液中浸泡30 min，37℃真空干燥；将步骤（1）制备的DON单克隆抗体‑金花纳米颗粒标记物和FB1单克隆抗体‑金花纳米颗粒标记物混合均匀，然后采用喷金机均匀的喷入到金标结合物释放垫上，喷量为10‑15 μL/cm，37℃真空干燥；(3) 硝酸纤维素膜的包被：将浓度为0.1‑1.0 mg/mL的DON‑MBSA和浓度为0.1‑1.0 mg/mL的偶联的检测抗原喷在硝酸纤维素膜上，喷量为0.5‑1.0 μL/cm，分别作为DON和FB1的检测线，两者间距为4‑7 mm；在距离DON检测线4‑7 mm处喷浓度为1‑2 mg/mL羊抗鼠Ig G，作为质控线，喷量为0.5 ‑1.0 μL/cm；37℃真空干燥，密封；（4）试纸条的制作：将上述喷有DON检测抗原、FB1检测抗原和羊抗鼠IgG的硝酸纤维素膜粘贴在PVP底板上；在底板的质控线一端为吸附垫，另一端为样品垫，NC膜两端分别与样品吸附垫和金标垫相互交叠连接，金标垫上压有样品垫；以宽度为3‑4 mm/条切条后即为同时检测DON和FB1的试纸条。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄志兵，许杨，李燕萍，任文洁，季艳伟，何庆华，涂追，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：江西;36