【技术实现步骤摘要】
粮食中三种真菌毒素及禾谷镰刀菌的多重PCR检测方法
本专利技术涉及一种粮食中三种真菌毒素及禾谷镰刀菌的多重PCR检测方法，属于生 物技领域。
技术介绍
禾谷镰刀菌广泛分布于世界范围的温暖潮湿地区，它可以引起麦类作物的根腐、 苗腐和穗腐，也能引起玉米的穗腐和茎基腐。禾谷镰刀菌侵染小麦，引起小麦的赤霉病，是 我国东北麦区和长江流域最主要的病害，近年来还有扩大蔓延的趋势。在粮食储藏过程中， 尤其是在夏季高温潮湿的环境中，禾谷镰刀菌生长速度快，毒素会随着菌体的生长不断的 累积。毒素累积量超过国家标准后粮食就不能被人畜食用，失去商品价值，需要另作处理。 因此会造成巨大的经济损失。种子带菌是合谷镰刀菌侵染禾谷类作物的一种重要方式，播 种染菌种子增加了禾谷类作物感染赤霉病的几率，这会对粮食产量产生直接影响。 禾谷镰刀菌不同菌株（不同采集地、寄主、感染部位）产生毒素的种类和能力有很 大的差异。但主要有两大类：单端孢霉烯族毒素化合物（Trichothecenes)和玉米赤霉烯酮 (ZEN)。 单端孢霉烯族毒素的基本结构为四环的倍半萜，其上的环氧集团是毒性的主要来 源。根据特异功能基团的不同有A、B、C、D四种类型。A型和B型为天然污染的单端孢霉烯 族毒素化合物。B型化合物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON)与雪腐镰刀菌烯醇（NIV)为其主 要两种毒素。单端孢霉烯族毒素化合物的急性中毒症状表现为呕吐、恶心、眩晕、便血、手足 发麻等。慢性中毒有基因毒性、细胞毒性和免疫毒性。 玉米赤霉烯酮（ZEN)又称F-2毒素。是一种表现类雌性激素样作用的真菌...
【技术保护点】
一种粮食中三种真菌毒素及禾谷镰刀菌的多重PCR检测方法，其特征在于，检测步骤包括：将待检测粮食研磨成粉，用CTAB法提取总DNA；以所提DNA作为模板进行多重PCR扩增；PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测是否有目标条带从而确定所检测粮食中是否被禾谷镰刀菌侵染以及是否含有脱氧雪腐镰刀烯醇(DON)、雪腐镰刀烯醇(NIV)、玉米赤霉烯酮(ZEN)。
【技术特征摘要】
1. 一种粮食中三种真菌毒素及禾谷镰刀菌的多重PCR检测方法，其特征在于，检测步 骤包括：将待检测粮食研磨成粉，用CTAB法提取总DNA ;以所提DNA作为模板进行多重PCR 扩增；PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测是否有目标条带从而确定所检测粮食中是否被禾 谷镰刀菌侵染以及是否含有脱氧雪腐镰刀烯醇（DON)、雪腐镰刀烯醇（NIV)、玉米赤霉烯酮 (ZEN)。2. 如权利要求1所述的粮食中三种真菌毒素及禾谷镰刀菌的多重PCR检测方法，其特 征在于，所述的检测方法具体步骤如下： 1) 、粮食样品的前处理：粮食样品20000rpm粉碎lmin ; 2) 、总DNA的提取： a. 取样品粉末于离心管中，CTAB提取缓冲液，轻轻摇动使粉末均匀分散于缓冲液中， 65°C 水浴 20min ; b. 冷却至室温后，加入苯酚：氯仿：异戊醇，苯酚：氯仿：异戊醇比例25 :24 :1，混匀， 10, OOOrpm 离心 lOmin ; c. 吸取b步骤上层水相，加入1/10体积的10% CTAB-0. 7M NaCl，混匀，再加入等体积 的氯仿：异戊醇，氯仿：异戊醇比例24:1，混勻，10, OOOrpm离心lOmin ; d. 吸取c步骤上层水相，加入等体积的冰冻异丙醇，轻轻摇动，出现白色DNA絮状沉淀， 4, OOOrpm离心lOmin，倒掉上清，加入70 %乙醇浸泡DNA，其间换洗70 %乙醇2-3次； e. 倒掉70%乙醇.用滤纸吸干多余的水分，风干； f. 用TE缓冲液溶解DNA.加入RNaseA至终浓度为20μ8/ιΛ后，37°C条件下保温 30min，-2(TC 保存； 3...
【专利技术属性】
技术研发人员：王海鸥，曹宇星，宋歌，杨帆，
申请(专利权)人：北京科技大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
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