糖基化/半乳糖基化肽、双官能接头和核苷酸单体/多聚体的缀合物以及相关的组合物和使用方法技术

一种式Ａ－Ｌ－Ｐ的缀合物，其中：Ａ代表与细胞表面受体结合的糖基化／半乳糖基化肽，Ｌ代表双官能接头，它不包含天然存在的氨基酸且与Ａ和Ｐ以区域专一性方式共价结合，而Ｐ代表包含至少一个核苷酸或其类似物的单体、同聚物或杂聚物，它以不依赖于序列的方式抑制核苷酸或核酸的细胞内生物合成，其中Ａ与Ｌ之间的共价键和Ｌ与Ｐ之间的共价键之任一或二者可以在细胞内被切割；一种包含这种缀合物的组合物；和一种抑制哺乳动物异常细胞增殖的方法；和一种抑制病毒在哺乳动物中复制的方法。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及化学确定的、结构均一的糖基化/半乳糖基化肽、双官能接头和核苷酸单体/多聚体的缀合物，包含此缀合物的组合物和使用方法，如用于抑制异常细胞增殖和抑制病毒复制。
技术介绍
核苷酸和核酸生物合成对于不受控的癌细胞增殖和病毒病原体复制都是基本的。核苷类似物选择性干扰核苷酸和核酸生物合成的能力使这些化合物成为理想的抗癌和抗病毒药。核苷类似物通过与核苷酸和核酸的天然存在的对应物竞争在核酸生物合成中涉及的酶结合位点而抑制核苷酸和核酸的合成(Perigaud等人，Nucleosides and Nucleotides(核苷和核苷酸)，11903(1992))，因而阻止核酸前体，包括核苷和核苷酸的形成。而且，往核酸分子中掺入类似物阻碍这些分子的复制和/或转录。因此，将核苷类似物施用于癌细胞可以抑制它们的增殖，而将这种类似物施用于病毒感染的细胞可以抑制感染病毒的复制。由于核苷类似物的尺寸较小且为静电中性，因此它们容易地横穿质膜，有利于传送至它们的细胞内靶位点。但是，核苷类似物的治疗作用大大受限于它们对将其转化为活性抑制剂的细胞内酶的依赖性。磷酸基与核苷酸类似物的糖残基附着是抑制核苷酸和核酸生物合成的必需步骤。在某些情况下，核苷类似物必须经过两步或更多步才能转化为活性代谢物，由此增加它们用作抑制剂所需的时间和该类似物转化为失活代谢物最终降低其有效性的机会。通过使用包含磷酸基的核苷酸类似物减轻了对用于转化成活性抑制剂的细胞内酶的依赖性。虽然与核苷类似物相比它们提供更为直接的作用方式，但将核苷酸类似物递送至细胞内部受到磷酸基的高度负电的严重阻碍。因此，期望一种将核苷酸类似物递送至它们的细胞内靶体的机理。Gmeiner等人(美国专利5,457,187)公开通过共价附着亲脂性或阳离子部分，包括胆固醇、乙基间隔的金刚烷、1，2-二十六烷基甘油和聚-L-赖氨酸而递送核苷酸类似物5-氟脱氧尿苷5′一磷酸。通过递送类似物作为均寡聚体进一步促进进入细胞。虽然这些缀合物提供一种将药物递送至细胞内的机理，但它们没有使核苷酸类似物靶向作用于特定的组织或细胞。如大部分药物一样，核苷酸类似物的临床应用由于它们不能到达靶细胞群和它们给非靶细胞施加毒性而受到限制。组织特异性药物靶向将不仅减少全身毒性，而且还通过富集靶细胞或组织中的药物而加强药物作用(Wadhwa等人，J.Drug Targeting 3111(1995))。因此需要组织特异性方式靶向核苷酸类似物。由此提出数种组织特异性药物靶向策略，以尝试克服这些问题。一种这样的策略，载体介导的药物靶向，包括共价或非共价结合药物与组织特异性靶向部分。在称为主动靶向的此策略的一个亚组中，靶向部分是被特异性受体识别的配体，所述受体主要处在靶位点。配体与受体结合导致受体介导的胞吞，其中药物-配体缀合物与受体一起被靶细胞内化。缀合物一旦处在细胞内便对切割配体和药物之间的键的细胞内酶易感，导致药物从缀合物中释放。通过这种方式实现将治疗剂递送至靶细胞群。配体定向的、受体介导的胞吞是几种药物靶向系统所依赖的基础。抗体或其片段、激素、细胞因子和其它可溶蛋白如胃泌素和转铁蛋白都已被用作递送药物至特定细胞群的靶向配体。例如，Myers等人(美国专利5,087,616)公开一种药物递送缀合物，其中通过与激素配体上皮生长因子结合而将药物道诺霉素特异性地递送至上皮细胞。此外，Gmeiner等人(美国专利5,663,321)公开通过与抗体或其片段结合而递送包括核苷酸类似物5-氟脱氧尿苷5′一磷酸的单体的均寡聚体。但是配体的性质并不总是蛋白质。糖部分用作已知为凝集素的受体家族的配体。这些受体依据它们的组织表达和配体特异性而不同。例如，Kupffer细胞上发现的凝集素对甘露糖具有特异性，而在肝内皮细胞上发现的凝集素选择性地与岩藻糖残基结合。已深入地研究了脱唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)，这是一种主要在肝细胞表面发现的凝集素，目的在于将治疗剂递送至肝。由于它介导与实际上任何含有末端半乳糖或乙酰半乳糖胺残基的实体之间的高度亲合相互作用而不管该实体的尺寸或结构，因而ASGPR是一种用于药物递送的模型系统。Wu等人的开拓性工作(J.Biol.Chem.2624429(1987))证明与连接脱唾液酸血清类粘蛋白(含半乳糖/乙酰半乳糖胺的蛋白)的聚-L-赖氨酸静电复合的反义寡核苷酸通过与ASGPR的直接的相互作用而被有效和特异性地摄入人肝癌细胞。但是，由于反义寡核苷酸与靶向部分非共价结合，有理由推断所得的缀合物的生物稳定性小于共价结合的情况。已将通过使用ASGPR的组织特异性药物靶向应用于核苷酸类似物的递送。例如，Groman等人(美国专利5,554,386)公开一种包含核苷酸类似物araAMP和多糖阿拉伯半乳聚糖的缀合物，该缀合物与ASGPR结合以将药物递送至肝细胞。但是由于多糖含有多个药物结合位点，这种缀合物的合成会产生缀合物的非均匀混合物，其中每一缀合物中的核苷酸类似物的数目随每批而变化。因此，缀合物的IC50也将随每批而各不相同，从而很难确定施用剂量。Rohlff等人(Cancer Research(癌症研究)591268(1999))公开一种药物-配体缀合物OGT719，其中单一的半乳糖部分与核苷类似物，5-氟尿嘧啶共价结合。虽然此药物缀合物在动物模型中表现为有效，但根据Lee等人的研究(Biochemistry(生物化学)234255(1984))，预测它与ASGPR微弱地结合，在Lee等人的研究中含有三个或四个以特定的构象排列的半乳糖残基的配体与ASGPR结合的亲合力比单一残基大得多。期望高亲合力结合的缀合物，从而可以施用较低剂量的缀合物以实现目标治疗效果。在全盘考虑的情况下，期望有一种能够经过配体定向的、受体介导的胞吞而以组织特异性的方式将核苷酸类似物递送至它们的细胞内靶体的缀合物。构成该缀合物的组分应该彼此共价结合以具有最大的生物稳定性。该缀合物应该是化学确定的和结构均一的，从而可以确定单一的IC50。该缀合物还应该以高度亲合力与靶向受体结合。具有这些性能的缀合物将具有改进的治疗指数。本专利技术的一个目的是提供这样一种缀合物。从本文提供的详细描述中可以明显看出这一目的和其它的目的和优点，以及另外的专利技术特征。专利技术概述本专利技术提供一种化学确定的、结构均一的式A-L-P的缀合物，其中A代表与细胞上的细胞表面受体结合的糖基化/半乳糖基化肽，L代表双官能接头，它不包含天然存在的氨基酸并以区域专一性方式与A和P共价结合，和P代表包含至少一个核苷酸或其类似物的单体、同聚物或杂聚物，其以不依赖于序列的方式抑制核苷酸或核酸的细胞内生物合成，其中A与L之间的共价键和L与P之间的共价键之任一或二者可以在细胞内被切割。当A被糖基化时，细胞表面受体在构成肝脏的细胞上。当A被半乳糖基化时，细胞表面受体为脱唾液酸糖蛋白受体。还提供包含这种缀合物的组合物。本专利技术还提供一种抑制需要这种抑制的哺乳动物中的异常细胞增殖的方法。所述方法包括给哺乳动物施用异常细胞增殖抑制量的上述缀合物或包含该缀合物的组合物，由此抑制哺乳动物的异常细胞增殖。本专利技术还提供一种抑制哺乳动物中病毒复制的方法。所述的方法包括给哺乳动物施用病毒复制抑制量的上述缀合物或包含该缀合本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种化学确定的、结构均一的式Ａ－Ｌ－Ｐ的缀合物，其中：Ａ代表与构成肝脏的细胞上的细胞表面受体结合的糖基化肽，Ｌ代表双官能接头，它不包含天然存在的氨基酸并以区域专一性方式与Ａ和Ｐ共价结合，和Ｐ代表包含至少一个核苷酸或其 类似物的单体、同聚物或杂聚物，其中该核苷酸或其类似物以不依赖于序列的方式抑制核苷酸或核酸的细胞内生物合成，其中Ａ与Ｌ之间的共价键和Ｌ与Ｐ之间的共价键之任一或二者可以在细胞内被切割。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：POP措，R杜夫，S戴蒙德，
申请(专利权)人：细胞工厂治疗公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]