重楼总皂苷在制备抗癌药辅助药物的应用制造技术

本发明专利技术公开了重楼总皂苷在制备抗癌药辅助药物的应用。试验研究结果证明：重楼总皂苷与化疗药物联合用药，可以增强化疗药物的疗效，降低化疗药物的剂量，起到了明显的杀伤肿瘤细胞的作用，并具有降低化疗药物毒性的作用，可以和化疗药物联合应用，因此重楼总皂苷可以制备成为抗癌药物的辅助药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及重楼总皂苷的用途。
技术介绍
癌症是当今世界上死亡率最高的疾病之一。目前临床使用的抗癌药物虽然具有很 好的杀死癌细胞的作用，但杀伤癌细胞的同时，对某些正常组织也有一定的损害，使化学治 疗药物应用受到了限制，所以研究具有减毒增效作用，预防和治疗放化疗引起的副作用的 抗癌辅助药物，是非常有意义的。人们对重楼总皂苷及其药理活性进行了深入的研究，关于重楼总皂苷的抗肿 瘤作用的文献报道越来越多。中国中药杂志，2008,33(16) :2057-2060公开了滇重楼 皂苷对10种肿瘤细胞株的细胞毒谱及构效关系研究；王羽等在中国中药杂志，2007， 32(14) 1425-1428)发表了滇重楼的抗肿瘤活性成分研究；程志祥等对重楼总皂苷作用 人肝癌细胞系HepG2的细胞毒性作用及蛋白组学进行了研究；石小枫等观察发现重楼总皂 苷水溶液灌胃及腹腔注射均能明显抑制荷瘤小鼠瘤组织的生长，延长肿瘤的倍增时间，核 酸同位素前体掺入实验表明，重楼总皂苷能干扰H22瘤细胞形成DNA、RNA,同时还能干扰荷 瘤小鼠脾组织DNA、RNA的生物合成。中国专利03135589. 7,200610052223. 8公开了重楼总 皂苷的制备方法，2008100520922也公开了以重楼总皂苷为有效成分的药物制剂及其制备 方法。重楼中的皂苷类成分是抗肿瘤作用的有效成分，经体内外实验研究，具有明显的 杀伤肿瘤细胞的作用，并对细胞免疫和体液免疫有增强作用，但目前重楼总皂苷作为抗癌 辅助药物，用于降低化疗药物的剂量，减小化疗药物的毒副作用的研究较少。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术中的不足，提供一种重楼总皂苷在制备抗癌药辅助 药物的应用。本专利技术的第二个目的是提供重楼总皂苷与药学可接受的辅料制成的制剂在制备 抗癌药辅助药物的应用。本专利技术的技术方案概述如下重楼总皂苷在制备抗癌药辅助药物的应用。重楼总皂苷与药学可接受的辅料制成的制剂在制备抗癌药辅助药物的应用。所述抗癌药为顺钼、环磷酰胺、氟尿嘧啶或丝裂霉素。试验研究结果证明重楼总皂苷与化疗药物联合用药，可以增强化疗药物的疗效， 降低化疗药物的剂量，起到了明显的杀伤肿瘤细胞的作用，并具有降低化疗药物毒性的作 用，可以和化疗药物联合应用，因此重楼总皂苷可以制备成为抗癌药物的辅助药物。具体实施例方式下面的实施例可以使本领域的技术人员理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。下面通过具体实施例对本专利技术作进一步的说明。实施例1将重楼粉碎至颗粒状，然后加入体积浓度为70 %的乙醇水溶液，重楼与乙醇水溶液 的加入比为Ig 細1，加热回流提取3次，每次1小时，合并提取液并浓缩至25°C相对密度为 1. 00 ；上述浓缩液加入50倍体积的体积浓度为10%的乙醇水溶液中并分散均勻，离心，上清 液通过DlOl大孔吸附树脂柱进行吸附(干树脂重量重楼药材重量=1 4)，之后用体积 浓度为10%的乙醇水溶液对树脂柱洗脱，再用体积浓度为70%的乙醇水溶液进行洗脱，收集 70%的乙醇水溶液的洗脱液，浓缩、干燥、粉碎、过筛而得到粉末状重楼总皂苷。实施例2将重楼粉碎至颗粒状，然后加入体积浓度为60%的乙醇水溶液，重楼与乙醇水溶 液的加入比为Ig 10ml，混合物加热回流提取2次，每次3小时，合并提取液并浓缩至 25°C相对密度为0. 92 ；上述浓缩液加入10倍体积的体积浓度为20%的乙醇水溶液中并分 散均勻，离心，上清液通过DlOl大孔吸附树脂柱进行吸附(干树脂重量重楼药材重量= 1 4)，之后用体积浓度为30%的乙醇水溶液对树脂柱洗脱，再用体积浓度为90%的乙醇 水溶液进行洗脱，收集90%的乙醇水溶液洗脱液，浓缩、干燥、粉碎、过筛而得到粉末状重楼 总皂苷。实施例3将重楼粉碎至颗粒状，然后加入体积浓度为80%的乙醇水溶液，重楼与乙醇水溶 液的加入比为Ig 8ml，加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液并浓缩至25°C相对密 度为0. 97;上述浓缩液加入30倍体积的水中并分散均勻，离心，上清液通过DlOl大孔吸附 树脂柱进行吸附(干树脂重量重楼药材重量=1 4)，之后用水对树脂柱洗脱，再用体积 浓度为80%的乙醇水溶液进行洗脱，收集80%的乙醇水溶液洗脱液，浓缩、干燥、粉碎、过 筛而得到粉末状重楼总皂苷。实施例4本实验以人肺腺癌细胞株A549为试验对象，应用四氮甲唑蓝(MTT)实验和流式细 胞仪等技术，研究重楼总皂苷协同顺钼对肿瘤细胞的生长、增殖的抑制作用，说明重楼皂苷 与低剂量化疗药联合应用抗肿瘤具有减毒增效的作用。1、重楼总皂苷(实施例1制备)对肿瘤细胞的周期阻滞作用及与化疗药物联合应 用对肿瘤细胞的杀伤作用。1. 1细胞培养将人肺腺癌细胞株A549常规培养于含10 %小牛血清RPM1-1640完全培养基中，置 CO2培养箱(37°C，5% CO2)中培养，培养细胞至生长对数期。1. 2抗肿瘤活性测定MTT法检测细胞抑制率将2 X IO5个/ml细胞接种于96孔培养板内，分为4个组。重楼总皂苷单独用药组向孔中分别加入不同浓度的重楼总皂苷水溶液(20、50、 100、150μ g/ml)。重楼总皂苷与顺钼联合用药组每孔加入不同浓度重楼总皂苷水溶液(20、50、 100、150mg/ml)和 3 μ g/ml 顺钼水溶液；顺钼单独用药组3 μ g/ml顺钼水溶液；另设对照组0. 二甲基亚砜。每组做8个复孔，常规培养48h，加入MTT 20 μ 1/孔(5mg/ml) 3h，测定前弃上清而 后按照上述分组加入各自的溶液100 μ 1/孔，置旋涡振荡器5min，溶解后用全自动酶标仪 测定每孔光密度(A值)，计算细胞生长抑制率，实验重复6次。以重楼总皂苷浓度为横坐 标，细胞抑制率为纵坐标，绘制细胞增殖抑制曲线，并测定药物半数抑制浓度(IC5tl)。细胞生 长抑制率(％)=(对照组A值-实验组A值)/对照组A值X100%，并由此得到IC5tl药 物半数抑制率，IC50 =细胞生长抑制率为50%的药物浓度。1. 3流式细胞仪检测细胞凋亡常规培养A549细胞48h，加入MTT 20 μ 1/孔(5mg/ml) 3h，弃上清后按照1. 2中分 组加入各自的溶液100 μ 1/孔(或者写按照1. 2方法处理细胞)，在药物作用细胞7 后收 集细胞，用磷酸盐缓冲液洗2次，加入70% (V/V)冷乙醇，4°C固定Mh以上，随后清洗细胞 加入碘化丙啶(PI)染液，孵育30min，进行DNA染色，采用流式细胞仪分析细胞周期和凋亡 率。统计学方法采用t检验做组间显著性分析。2 结果2. 1单独用重楼总皂苷对肺癌细胞的抑制作用对照组细胞呈正常的对数生长，而不同浓度的重楼总皂苷对肺癌细胞的生长均有 明显抑制作用，其作用强度呈现对浓度的依赖关系。2. 2重楼总皂苷与顺钼协同抗肿瘤作用重楼总皂苷与顺钼联合用药优于重楼总皂苷和顺钼单独使用。重楼总皂苷的IC5tl值由单独应用时的950μ g/ml下降到重楼总皂苷和顺钼(3 μ g/ ml)联合应用时的650 μ g/ml，杀伤率提高了 1.46倍。顺钼的单独应用的IC5tl值由7. 0 μ g/ ml,降低为联合应用时的3. 2 μ g/ml，杀伤率提高2. 2倍。结果显示联合应用有明本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．重楼总皂苷在制备抗癌药辅助药物的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高文远，王洁银，满淑丽，武珊珊，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：12