重楼皂苷I的制备方法及其抑制血管生长的用途技术

本发明专利技术涉及重楼皂苷Ｉ即（２５Ｒ）－Δ５（６）－烯－螺甾－３－Ｏ－｛α－Ｌ－呋喃阿拉伯糖（１→４）｝－［α－Ｌ－吡喃鼠李糖基（１→２）］－３－Ｏ－β－Ｄ－吡喃葡萄糖苷的制备方法及其抑制血管生成的用途，通过有剂溶剂提取重楼后，以硅胶及反相硅胶色谱法制备重楼皂苷Ｉ，可作为抗肿瘤药物应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种从重楼中提取分离得到的重楼皂苷I ，即(25R)-A5(6)-烯-螺 甾-3-(Ha-L-呋喃阿拉伯糖(1—4)Ha-L-吡喃鼠李糖基(1—2)]-3-0-P-D-吡喃葡萄 糖苷(CAS号为76296-72-5)的制备方法，及其在抑制血管生长方面的用途。
技术介绍
重楼(Rhizoma Paridis)，又称七叶一支花，是百合科重楼属植物的泛称,以 蚤休之名首载于《神农本草经》。重楼属植物全世界共有24种,我国种类最多， 拥有19种，其中西南各省区种类和资源极为丰富。常见的品种有华重楼、滇重 楼和七叶一支花。药用的有华重楼、云南重楼、七叶一支花、狭叶重楼、长药 隔重楼、海南重楼、凌云重楼、南重楼。《中国药典》2005年版中记载，重楼 白勺来、源应为云南重t娄Paris polyphylla Smith var. yunnanensis(Franch.) Hand. 一 Mazz.和七叶一枝花P. D phylla Smith var.chinensis( Franch. ) Hara的干燥根茎。 味苦，性微寒，有小毒，归肝经,具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊之功效,用于痈 疮、咽喉肿痛、毒蛇咬伤、跌打伤痛、凉风抽搐等症。(国家药典委员会.中华 人民共和国药典(2005年版) 一部，化学工业出版社，183.)至今尚未见关于 抑制血管方面的报道。(张树潘.重楼属植物的化学成分及其药理活性研究进展. 海峡药学，2007， 19 (6) : 4-7;康利平,马百平,张洁,等.重楼中甾体皂苷的分离 与结构鉴定.中国药物化学杂志,2G05,15(l):26-30;王羽，张彦军，高文远，等.滇重楼 的抗肿瘤活性成分研究.中国中药杂志，2007，32(14):1425-1428; HUANGYun， WANG Qiang,CUI Li~jian.Primary Comments on Chemotaxonomy of spp，Basedon Saponins Analysis.Journal of Chinese Phar-maceutical iences 2005,14(3): 176— 180.)肿瘤是目前危害人类健康的主要疾病之一。居各类疾病死亡率的第二位。 大量临床治疗证明，化疗和放疗在杀伤肿瘤细胞的同时，对正常细胞也有极大 的破坏效应。这些疗法使得人体的造血系统和免疫功能遭受严重的损害，极易 导致病人死亡。对血管的依赖性是一切肿瘤细胞所共有的，血管生成是肿瘤生 长和转移中的一个重要步骤，无论原发性肿瘤和继发性肿瘤， 一旦生长直径超 过2mm，都会有血管生成，随之将是肿瘤迅速生长，转移发生。(F。lkmaiU. what is the evidence that tumors are angiogenesis department J Natl Cancer Inst. 1990， 82:4-6.)目前对肿瘤的治疗主要有三大类药物，分别为细胞毒药物，放、化疗辅助 类药物，血管生长抑制剂。目前血管生长抑制剂是一类非常有前途的抗肿瘤药 物。在以鸡胚绒毛尿囊膜为模型，筛选对血管生长有抑制作用的化合物的实验中，从重楼中获得的重楼皂苷I一即(25R)-A5(6)-烯-螺甾-3-0-(a-L-呋喃阿拉伯 糖(1—4)Ha-L-吡喃鼠李糖基(1—2)]-3-0-P-D-吡喃葡萄糖苷表现出了较好的血 管生长抑制作用。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供重楼皂苷I的制备方法，及其在抑制血管生长方 面的用途。本专利技术涉及从重楼中提取分离得到的重楼皂苷I即(25R)-A5(6)-烯-螺甾 -3-(Ma-L-呋喃阿拉伯糖(1—4)Hct-L-吡喃鼠李糖基(1—2)]-3-Op-D-吡喃葡萄糖苷(化学结构如式l)的制备方法。<formula>formula see original document page 5</formula>式1重楼皂苷I的化学结构式其制备方法如下(l)取重楼，依次用6-15倍量的石油醚、乙酸乙酯、95%乙醇、80%乙醇、 60%乙醇、水进行超声提取，提取3-5次，每次20min-100min，过滤 后，上清液减压浓縮后得到各部位。(2)将步骤(1)得到的取乙酸乙酯部位用适量乙醇分散后，1-3倍量的硅 胶拌样，10-50倍量硅胶装柱，上样，依次用石油醚、石油醚乙酸乙 酉旨、乙酸乙酯、乙酸乙酯乙醇、乙醇洗脱得到重楼皂苷I即(2511)-/\5(6)-烯-螺甾-3-0-KL-呋喃阿拉伯糖(1—4)}--3-0-P-D-吡喃葡萄糖苷粗品。 (3)将步骤(2)得到的重楼皂苷I粗品用硅胶、反相硅胶法进行进一步 纯化。得到式(1)所示的重楼皂苷I即(25R)-△5(6)-烯-螺甾-3-0-{a-L-呋喃阿拉伯糖 (1—4"--3-0+D-口比喃葡萄糖苷 纯品。其实施例如下实施例1重楼皂苷I即(25R)-A5(6)-烯-螺甾-3-(Ha-L-呋喃阿拉伯糖 (1—4)Ha-L-吡喃鼠李糖基(1—2)]-3-0-P-D-吡喃葡萄糖苷的制备取2kg重楼，依次用10倍量的石油醚、乙酸乙酯、95%乙醇、80%乙醇、60%乙醇、水分3次超声提取，每次30min,过滤后，上清液减压浓缩后得 到各部位。收集乙酸乙酯提取物，在硅胶(200 300目)柱上，先用石油醚洗脱， 然后用体积比为l: l的石油醚、乙酸乙酯、乙醇的混合液洗脱。收集用体积比 为l: l的石油醚、乙酸乙酯、乙醇的混合液洗脱后得到的洗脱液，减压浓縮， 得到粗品，用硅胶、反相硅胶法进行进一步纯化结晶，得到10克单体化合物， 经结构解析，确定结构为重楼皂苷I。重褛皂苷I物理性质及波谱数据如下无色透明针晶或白色粉末，易溶于氯仿、甲醇。ESI-MS分子量:854.466分子式C"H7 016ESI-MS (m/z ): 855 ( M+) ， 722 ( M-Arb ) ， 576 ( M-Arb-Rha ) ， 415 (M-Arb-Rha-Glu)， 397 (M-Arb-Rha- Glu-H20)， 379 (M-Arb-Rha-Glu-2H20)， 283， 271， 253， 251， 213， 199， 173， 159， 147， 139， 129， 107， 93， 85， 69， 55 (100%)。'HNMR (DMS0-d6) Sppm: 5.391 (1H， d， J二5.0Hz)， 5,245 (1H， d， J二5, 4 Hz), 2.43,2.15 (H-l)， 1.8 (H—2)， 3.48 (H-3)， 1.8 (H-4)， 5.336 (1H， br， H-6)， 1.53 (H-8)， 0.9 (H-9)， 4.88 (H-IO)， 1.5 (H-ll)， 1.16 (H-12)， 1.8(H-13)， 1.14 (H-14)， 1.93,1.90 (H-15， 17)， 4.27 (H-16)， 3.4 (H-17)， 0.739 (s， H-18)， 0.964 (H—19)， 3.8 (H-20)， 1.82 (H-20)， 0.915 (d， J=6. 7 Hz' H—21)， 本文档来自技高网...

【技术保护点】
重楼皂苷Ⅰ即（２５Ｒ）－Δ５（６）－烯－螺甾－３－Ｏ－｛α－Ｌ－呋喃阿拉伯糖（１→４）｝－［α－Ｌ－吡喃鼠李糖基（１→２）］－３－Ｏ－β－Ｄ－吡喃葡萄糖苷（化学结构如下所示），其特征在于其制备方法如下：　（１）取重楼，依次用６－１５倍 量的石油醚、乙酸乙酯、９５％乙醇、８０％乙醇、６０％乙醇、水进行超声提取，提取３－５次，每次２０ｍｉｎ－１００ｍｉｎ，过滤后，上清液减压浓缩后得到各部位。　（２）将步骤（１）得到的取乙酸乙酯部位用适量乙醇分散后，１－３倍量的硅胶拌样， １０－５０倍量硅胶装柱，上样，依次用石油醚、石油醚：乙酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸乙酯：乙醇、乙醇洗脱得到重楼皂苷Ⅰ即（２５Ｒ）－Δ５（６）－烯－螺甾－３－Ｏ－｛α－Ｌ－呋喃阿拉伯糖（１→４）｝－［α－Ｌ－吡喃鼠李糖基（１→２）］－３－Ｏ－β－Ｄ－吡喃葡萄糖苷粗品。　（３）将步骤（２）得到的重楼皂苷Ⅰ粗品用硅胶、反相硅胶法进行进一步纯化。得到式（１）所示的重楼皂苷Ⅰ即（２５Ｒ）－Δ５（６）－烯－螺甾－３－Ｏ－｛α－Ｌ－呋喃阿拉伯糖（１→４）｝－［α－Ｌ－吡喃鼠李糖基（１→２） ］－３－Ｏ－β－Ｄ－吡喃葡萄糖苷纯品。　＊＊＊。...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：毕葳，雷海民，李强，
申请(专利权)人：雷海民，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]