长柱重楼抗癌活性部位PFE-PT3的化学成分分离和鉴定方法技术

提供长柱重楼[Parisforrestii(Takht.)H.Li]抗癌活性部位PFE-PT3及其中的化学成分的提取和鉴定方法。采用色谱柱层析及半制备高效液相色谱的分离方法，以及质谱和核磁共振波谱的鉴定方法，从PFE-PT3中分离、鉴定出了重楼皂苷I、重楼皂苷II、重楼皂苷III、重楼皂苷V、重楼皂苷H、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(PGRR)、甲基原重楼皂苷I、甲基原重楼皂苷V、PariposideA和β-蜕皮激素。本发明专利技术首次阐明PFE-PT3的主要化学成分，通过提供的方法，可以简单、快速地从PFE-PT3中获取上述化学成分，用于建立PFE-PT3的质量控制标准。

【技术实现步骤摘要】

： 本专利技术属于天然产物提取分离
，尤其涉及长柱重楼抗癌活性部位 PFE-PT3的化学成分分离和鉴定方法。
技术介绍
： 长柱重楼为延龄草科重楼属植物，其根莖入 药，具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊的功效，用于治疗痈疽疮疡、无名肿毒、毒蛇咬伤、咽 喉肿痛、腮腺炎、扁桃体炎和大头瘟（朱兆云.云南天然药物图鉴.第6卷.昆明：云南 科技出版社，2010:127)。专利"一种治疗癌症的植物药及其制备方法与应用"（公布号： CN104706896A)公开了长柱重楼PFE-PT3部位具有显著抗癌活性，但其化学成分尚未见报 道。阐明PFE-PT3的化学物质基础，对建立PFE-PT3的质量控制标准，以及基于PFE-PT3的 新药研制具有重要意义。
技术实现思路
： 本专利技术针对现有技术存在了上述问题，提供长柱重楼抗癌活性部位PFE-PT3,以其为活性成分的药物组合物，以及PFE-PT3中的化学成分 的提取和鉴定方法。由于PFE-PT3具有显著的抗癌活性，但其化学成分不清楚，没有办法建 立质量控制标准。所以，本专利技术提供了一种PFE-PT3分离鉴定方法用于解决这个技术问题。 为了实现本专利技术的上述目的，本专利技术提供了如下的技术方案： 药物组合物，其中含有治疗有效量的长柱重楼正丁醇萃取部位PFE-PT3和药学上 可接受的载体，所述的PFE-PT3由下述方法制备而得：长柱重楼干燥根茎，粉碎后用95%乙 醇浸泡7天，过滤，滤渣继续提取，总共提取4次，合并滤液，回收溶剂，得浸膏，将浸膏用水 制成混悬液，用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取部位；乙酸乙酯萃取后的母 液，继续用正丁醇萃取，回收正丁醇，得正丁醇萃取部位即PFE-PT3。 药物组合物，其中含有治疗有效量的长柱重楼正丁醇萃取部位PFE-PT3和药 学上可接受的载体，所述的PFE-PT3中重楼皂苷I、重楼皂苷II、重楼皂苷III、重楼皂 苷V、重楼皂苷H、偏诺皂苷元-3-0-a -L-吡喃鼠李糖基-(1 - 4)_-P-D-吡喃葡萄糖苷（PGRR)、甲基原重楼皂苷I、甲基原重楼皂苷V、 Pariposide A和蜕皮激素总含量为10-95% (重量）。 药物组合物，其中含有治疗有效量的长柱重楼正丁醇萃取部位PFE-PT3和药 学上可接受的载体，所述的PFE-PT3中重楼皂苷I、重楼皂苷II、重楼皂苷III、重楼皂 苷V、重楼皂苷H、偏诺皂苷元-3-0-a -L-吡喃鼠李糖基-(1 - 4)_-P-D-吡喃葡萄糖苷（PGRR)、甲基原重楼皂苷I、甲基原重楼皂苷V、 Pariposide A和蜕皮激素是从长柱重楼正丁醇萃取部位PFE-PT3分离得到，步骤为： (1)PFE-PT3经硅胶柱层析用10:1，5:1，3:1，1:1的氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱 划段，得到Fr.A、Fr.B、Fr.C和Fr.D等4个部分； (2)取Fr.B部分经C1S反相硅胶柱层析，10:90 - 100:0的甲醇-7jc，得到Fr.Bi、 Fr.B2、Fr.B3、Fr.B4、Fr.B5和Fr.B6等 6 个部分； (3)取Fr.B3部分，过LH-20凝胶柱层析，甲醇洗脱后，再用硅胶柱层析5:1的氯 仿-甲醇洗脱得到0 _蜕皮激素； (4)取Fr.B4部分，用半制备高效液相色谱纯化得到甲基原重楼皂苷I，和甲基原 重楼皂苷V; (5)取Fr.B5部分，用半制备高效液相色谱纯化得到PariposideA、重楼皂苷II、 重楼皂苷III、重楼皂苷I和重楼皂苷V; (6)取Fr.B6部分，半制备高效液相色谱纯化得到化合物PGRR和重楼皂苷H; 其中，（4)所述的半制备高效液相色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，Zorbax 38-(：18色谱柱，色谱柱大小9.4\25〇111111，洗脱剂为甲醇-水，比例72 :28，流速211117111111;(5) 所述的半制备高效液相色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，ZorbaxSB-Cls色谱柱，色谱柱大 小9. 4X250mm，洗脱剂为乙腈-水，比例50:50,流速2mL/min; (6)所述的半制备高效液相 色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，ZorbaxSB-Cls色谱柱，色谱柱大小9. 4X250mm，洗脱剂 为乙腈-水，比例40:60，流速211117111；[11。 本专利技术还提供了长柱重楼提取物正丁醇萃取部位PFE-PT3中重楼皂苷I、重 楼皂苷II、重楼皂苷III、重楼皂苷V、重楼皂苷H、偏诺皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖 基-(1 - 4)--P-D-吡喃葡萄糖苷（PGRR)、甲基原重楼皂 苷I、甲基原重楼皂苷V、PariposideA和蜕皮激素总含量为10-95% (重量），其从长 柱重楼正丁醇萃取部位PFE-PT3中分离得到，步骤为： (1)PFE-PT3经硅胶柱层析用10:1，5:1，3:1，1:1的氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱 划段，得到Fr.A、Fr.B、Fr.C和Fr.D等4个部分； (2)取Fr.B部分经C1S反相硅胶柱层析，10:90 - 100:0的甲醇-7K，得到Fr.B!、 Fr.B2、Fr.B3、Fr.B4、Fr.B5和Fr.B6等 6 个部分； (3)取Fr.B3部分，过LH-20凝胶柱层析，甲醇洗脱后，再用硅胶柱层析5:1的氯 仿-甲醇洗脱得到0 _蜕皮激素； (4)取Fr.B4部分，用半制备高效液相色谱纯化得到甲基原重楼皂苷I，和甲基原 重楼皂苷V; (5)取Fr.B5部分，用半制备高效液相色谱纯化得到PariposideA、重楼皂苷II、 重楼皂苷III、重楼皂苷I和重楼皂苷V; (6)取Fr.B6部分，半制备高效液相色谱纯化得到化合物PGRR和重楼皂苷H; 其中，（4)所述的半制备高效液相色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，Zorbax 38-(：18色谱柱，色谱柱大小9.4\25〇111111，洗脱剂为甲醇-水，比例72 :28，流速211117111111;(5) 所述的半制备高效液相色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，ZorbaxSB-Cls色谱柱，色谱柱大 小9. 4X250mm，洗脱剂为乙腈-水，比例50:50,流速2mL/min; (6)所述的半制备高效液相 色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，ZorbaxSB-Cls色谱柱，色谱柱大小9. 4X250mm，洗脱剂 为乙腈-水，比例40:60，流速211117111；[11。 -种长柱重楼正丁醇萃取部位PFE-PT3的化学成分分离鉴定方法，从长柱重 楼正丁醇萃取部位PFE-PT3分离得到重楼皂苷I、重楼皂苷II、重楼皂苷III、重楼皂 苷V、重楼皂苷H、偏诺皂苷元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基-(1 - 4)_-P-D-吡喃葡萄糖苷（PGRR)、甲基原重楼皂苷I、甲基原重楼皂苷V、 PariposideA和銳皮激素，步骤为： (1)PFE-PT3经硅胶柱层析用10:1，5:1，3:1，1:1的氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱 划段，得到Fr.A、Fr.B、Fr.C和Fr.D等4个部分； (2)取Fr.B部分经C1S反相硅胶柱层析，10:90 - 100:0的甲醇-7K，得到Fr.B!、 Fr.B2、Fr.B3、Fr.B4、Fr.B5和Fr.B本文档来自技高网...

【技术保护点】
药物组合物，其中含有治疗有效量的长柱重楼正丁醇萃取部位PFE‑PT3和药学上可接受的载体，其特征在于所述的PFE‑PT3由下述方法制备而得：长柱重楼干燥根茎，粉碎后用95％乙醇浸泡7天，过滤，滤渣继续提取，总共提取4次，合并滤液，回收溶剂，得浸膏，将浸膏用水制成混悬液，用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取部位；乙酸乙酯萃取后的母液，继续用正丁醇萃取，回收正丁醇，得正丁醇萃取部位即PFE‑PT3。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王跃虎，牛红梅，杨珺，罗吉凤，梅任强，杨永平，李恒，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53