一种抗EGFR人源化抗体L3-H3及其编码基因与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗EGFR人源化抗体L3-H3及其编码基因与应用。该抗体由轻链和重链构成，所述重链由重链可变区和重链恒定区连接而成；所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：3中第1-145位所示；所述重链恒定区为人源抗体IgG1的重链恒定区；所述轻链的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。实验结果证实，本发明专利技术抗体具有良好的结合活性和抑制肿瘤细胞生长迁移能力；而国外市场上常见抗EGFR人-鼠嵌合抗体西妥昔单抗的亲和力1.1×10-9M。本发明专利技术的人源化抗体能更好与EGFR结合，从而保证了其抗肿瘤效应。本发明专利技术制备抗体的方法，能够同时表达轻链和重链，使轻链和重链的表达比例更接近1∶1，产生更高比率的相互匹配双链抗体。综上所述，本发明专利技术抗体及其制备方法在预防和/或治疗肿瘤的领域将有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种抗EGFR人源化抗体L3-H3及其编码基因与应用。
技术介绍
表皮生长因子受体(epidemic growth factor receptor，EGFR)是表皮生长因子基因(erbB)家族的一员，在约30％的人体肿瘤中过度表达，尤其是非小细胞型肺癌、头颈部鳞状细胞癌和结直肠癌等。国内外许多研究表明，针对EGFR的抗体可有效地在胞外通过阻断配体的结合来实现对EGFR信号转导途径的抑制，对多种由EGFR过度表达或/和突变所引起的人体肿瘤，尤其是头颈部鳞状细胞癌(80％～100％)，结直肠癌(25％～77％)，非小细胞型肺癌(40％～80％)等有较好的疗效。表皮生长因子受体成为目前研究较深入且倍受关注的肿瘤治疗靶点之一，应用基因工程研制抗EGFR的单克隆抗体，成为肿瘤免疫治疗的研究热点之一。2004、2006年，美国FDA先后批准了针对EGFR的鼠-人嵌合抗体西妥昔单抗(cetuximab)和全人抗体帕尼单抗(panitumumab)，用于结直肠癌治疗；2005年，抗EGFR的人源化抗体尼莫珠单抗(nimotuzumab)获得了我国药监局(SFDA)批准的一类新药证书，本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种抗体，由轻链和重链构成，所述重链由重链可变区和重链恒定区连接而成；所述重链可变区的氨基酸序列如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３中第１－１４５位所示；所述重链恒定区为人源抗体ＩｇＧ１的重链恒定区；所述轻链的氨基酸序列如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１所示。

【技术特征摘要】
1.一种抗体，由轻链和重链构成，所述重链由重链可变区和重链恒定区连接而成；所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：3中第1-145位所示；所述重链恒定区为人源抗体IgG1的重链恒定区；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于：所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。3.权利要求1或2所述抗体的编码基因；或，所述轻链的编码基因为如下I)、II)或III)所示：I)其核苷酸序列如SEQ ID NO：2中第85-726位所示或SEQ ID NO：2中第9-729位所示；II)在严格条件下与I)限定的DNA序列杂交且编码所述轻链的DNA分子；III)与I)限定的DNA序列具有70％以上的同源性且编码所述轻链的DNA分子；或，所述重链的编码基因为如下1)、2)或3)所示：1)其核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且编码所述重链的DNA分子；3)与1)限定的DNA序列具有70％以上的同源性且编码所述重链的DNA分子。4.含有权利要求3所述编码基因的重组载体、重组菌、重组细胞或表达盒。5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于：所述重组载体为按照包括如下步骤的方法制备得到的重组表达载体：将所述轻链的编码基因沿着从Nhe I酶切位点至EcoRI酶切位点的方向插在载体pIRES的Nhe I和EcoRI酶切位点间，得到重组载体，记作中间重组载体；将所述重链的编码基因沿着从Xba I酶切位点至Not I酶切位点的方向插在所述中间重组载体的Xba I和Not I酶切位点间，得到的重组载体即为目的重组表达载体。6.根据权利要求4所述的重组细胞，其特征在于：所述重组细胞是将权利要求5所述重组表达载体导入出发细胞得到的重组细胞；和/或...

【专利技术属性】
技术研发人员：靳彦文，戴维·威孚，米歇尔·瑞奇韦兹，曹诚，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所，
类型：发明
国别省市：11