注射用黄芪皂苷的制备方法技术

注射用黄芪皂苷的制备方法，对黄芪用含水乙醇回流提取后，除去乙醇的提取液再用乙醇进行沉淀和过滤，除去乙醇再加水低温沉淀，滤液经大孔吸附树脂吸附并用含水乙醇洗脱，洗脱液浓缩并调节至碱性后，用经水饱和的正丁醇萃取，最后对除去正丁醇后的萃取液用丙酮或乙醚沉淀并分离得到供注射剂用的黄芪皂苷沉淀物。该方法能较彻底地除去黄芪药材中的大量酚性和酸性物质，有效保证了注射用黄芪皂苷产品所配制的注射液的澄清度与颜色、鞣质、树脂、草酸盐等各项指标的合格和稳定。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及的是供注射剂用的黄芪皂苷的制备方法。
技术介绍
黄芪是一味传统的补气中药，已有药理研究表明，其中的主要有效成分黄芪皂苷能明显改善心肌梗塞犬的心肌收缩性能，增加冠脉流量，缩小心肌梗塞面积，减轻心肌损伤，对心功能有保护作用。已有研究表明，黄芪中的主要有效成分为黄芪皂苷，但含量较低，特别是其中的黄芪甲苷成分在药材中的含量仅约为0.04％，采用目前的传统提取方法使其富集纯化较为困难。公开号为CN1557329A的中国专利文献中报道有对黄芪皂苷的提取方法，采用的是先以常规水煎煮方式制取原料生药黄芪的水提取液，滤液经常用的大孔树脂，如平均孔径为0.02～0.03μm，比表面积≥400m2/g的D-201、AB-8、DM-301等型号的大孔吸附树脂进行吸附处理，吸附富集其中的皂苷成分。经水和含水乙醇溶液洗涤除杂后，用60％～95％的乙醇溶液解吸洗脱，除去乙醇后的洗脱液用水溶解，用正丁醇提取其中的黄芪总皂苷，并用氢氧化钠/钾、碳酸钠、饱和石灰水或氨水等pH≥10的碱水洗涤正丁醇提取溶，除去正丁醇后再用丙酮回流脱脂，分离后即可得到黄芪甲苷含量≥20％(重量)的黄芪皂苷，并可以按《药物分析杂志》1999，19(6)403～405和《中国药学杂志》2002，37(4)298～300的报导，用高效液相色谱法和蒸发光散射检测器，即HPLC-ELSD法测定所得到的黄芪皂苷提取物中的黄芪甲苷含量。试验结果显示，单纯以水提取黄芪皂苷的转移率低，且所得黄芪皂苷在澄明度、鞣质等多项指标上都不能符合注射用药物的要求。
技术实现思路
针对上述情况，本专利技术将提供一种注射用的黄芪皂苷的制备方法，使其既能除去大量的酚性、酸性物质及鞣质等，又能保持黄芪皂苷的稳定，满足供注射剂使用的黄芪皂苷所需的性能指标，保证其使用的安全性。本专利技术注射用黄芪皂苷的制备方法，是将药物原料黄芪用体积浓度为40％～95％，更好的是用60％～80％的含水乙醇回流提取。试验结果显示，提取所用的乙醇浓度过低，提取物中的水溶性杂质过多；乙醇浓度过高时则又会过多地增加提取物中的脂溶性杂质。与常规的水提取方式相比，用40～95％乙醇循环回流提取黄芪皂苷，黄芪皂苷的转移率更高，转移率可达92％以上，而单纯以水提取方式的转移率仅为71％，二者存在着明显差异(P＜0.01)。回流提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇体积含量至40％～95％，更好的是至乙醇含量达70％～90％进行沉淀和过滤。试验结果显示，将滤液调节至pH 6.0～11.0后，能有效地除去鞣质，其中优选调节至pH 8.0～10.0的范围进行沉淀过滤。将滤液调节至pH 6.0～8.0后，按原料药/水重量比为0.5～3/1的量，其中更好的是按原料药/水为1～2/1的量加水混合后，在保持不冻结的低温条件，其中优选在0℃～10℃条件下沉淀后过滤。滤液用制药生产中常用的大孔吸附树脂，如平均孔径为0.02～0.03μm，比表面积≥400m2/g的常用D-101、Diaion HP-20、D-201、AB-8、DM-301等型号的大孔吸附树脂进行吸附处理，再用浓度为50％～90％的含水乙醇解吸附洗脱并收集。试验结果显示，洗脱时所用乙醇浓度过低，洗脱液中会混有过多的水溶性杂质；乙醇浓度过高则可能会增大洗脱液中脂溶性杂质的量。将除去乙醇后的解吸附浓缩溶液调节pH至9.0～13.0后，用经水饱和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后丙酮和乙醚中的至少一种进行沉淀分离沉淀物，即为本专利技术所说可供注射剂用的黄芪皂苷。实验表明，上述制备方法中，经乙醇沉淀处理和调节至近中性的pH 6.0～8.0的提取液，并进一步加水混合并于低温下沉淀处理，对于保证使用时注射用黄芪皂苷溶液的澄清度都是重要和必须的。试验结果显示，加水混合前pH调节的偏酸或偏碱对黄芪甲苷的含量都会产生较明显的不利影响。而不再经水沉淀除杂处理的样品澄清度较差，经过水沉淀除杂处理的样品澄清度则能符合注射剂的标准要求。取相当于800g药材经乙醇沉淀的浓缩液，分别按黄芪药材/水为1/1、1.5/1、2/1和2.5/1等不同比例加水进行冷藏静置沉淀的试验结果如表1所示。由表1结果可见经加水沉淀除杂处理后的样品澄清度均可符合注射剂的标准要求，改变水量的多少对处理效果未见显著影响，但在操作上则有不同的影响。从水沉液过滤速度看，药材/水为1/1和1.5/1时，过滤速度较快，而当药材/水为2.0/1和2.5/1时，过滤则比较困难。因此进行水沉淀处理时的加入水量，一般以药材/水的比例为1～2/1，特别是以1～1.5/1时为佳。经水沉淀处理后的提取液继续用大孔树脂吸附处理时，改变吸附树脂的种类和/或型号，如在上述D-101、Diaion HP-20、D-201、AB-8、DM-301等多种非极性大孔吸附树脂和/或弱极性吸附树脂大孔吸附树脂进行选择的试验证明，其均可使用，且所得产品的质量及稳定性等都能符合要求。进一步，用大孔树脂进行吸附处理时，在用50％～90％的含水乙醇进行洗解吸附洗脱前，如能先用20％～50％的含水乙醇洗涤吸附树脂至洗涤液基本无色，则对进一步减少收集洗脱产物中的杂质，提高产品纯度和质量是有益的。试验显示，初步洗涤杂质用的乙醇浓度过低可使所得提取物中的杂质量多；乙醇浓度过高则会影响提取物中黄芪皂苷的收率。黄芪药材中存在的大量和主要的杂质成分是极性与黄芪皂苷接近的酚性和酸性物质，去除比较困难。因此上述制备方法中，在用水饱和正丁醇萃取前，将解吸附浓缩后的提取液用常用的碱或碱性化合物调节pH至碱性，可以使酚性和酸性杂质成盐，难溶于正丁醇而被除去，因而对于保证最终产品的质量和稳定性都是重要的。所说的碱或碱性化合物一般可以使用常用的一价金属的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐，最为常用的氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠，或是氨水等碱或碱性化合物。此步优选的pH值调节范围是10.0～12.0，然后再用水饱和的正丁醇萃取。试验显示，改变调节pH时所用碱的种类对结果并无实质性的影响。对经大孔吸附树脂吸附处理后的提取液分别用不同的碱调节pH后分别用水饱和正丁醇萃取完全，对黄芪皂苷和黄芪甲苷的保留率进行试验。试验结果如表2所示。表2的结果表明，萃取前的提取液用不同的碱或碱性化合物处理，对萃取后黄芪皂苷的保留率无明显差别。用碱度相对较弱的氨水和NaHCO3溶液处理时，萃取物中的黄芪甲苷含量相对偏低，而用0.5％和1％的NaOH溶液处理后，萃取物中黄芪甲苷的保留率明显提高。用1％Na2CO3溶液处理时，可以提高黄芪甲苷的含量，并且处理后碱性混合液的颜色也较浅。但这并非意味碱性过强总是有利的，因为碱性过强对所得提取物的溶解性可能会有不利影响。因此可优先选用Na2CO3调节pH。对萃取前的浓缩液不经上述的碱处理而直接用水饱和正丁醇提取的试验显示，所得的黄芪皂苷溶液在澄清度和颜色、鞣质、树脂、草酸盐等均难以达到有关中药注射液的技术指标和规定的要求，不能作为注射用原料。以未经碱处理直接萃取得到的样品的豚鼠试验则偶有过敏反应，而用萃取前经碱处理后所得到的样品进行的豚鼠试验均无过敏反应。同时，稳定性的考察试验也显示，以经碱处理过的原料制成的注射液，其安全性至少在2年内均符合要求。因此，萃取前进行碱处理对保证产品在用于注射剂时安全性本文档来自技高网...

【技术保护点】
注射用黄芪皂苷的制备方法，其特征是将药物原料黄芪用体积浓度为４０％～９５％的含水乙醇回流提取，提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇体积含量至４０％～９５％进行沉淀和过滤，滤液调节至ｐＨ６．０～１１．０后沉淀过滤，将滤液调节至ｐＨ６．０～８．０后，按原料药／水重量比为０．５～３／１的量加水混合，在保持不冻结的低温条件下沉淀后过滤，滤液用大孔吸附树脂吸附，以５０％～９０％浓度的含水乙醇解吸附洗脱并收集，将除去乙醇后的解吸附浓缩溶液调节ｐＨ至９．０～１３．０后，用经水饱和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后用丙酮和乙醚中的至少一种进行沉淀，分离沉淀物为供注射剂用的黄芪皂苷。

【技术特征摘要】
1.注射用黄芪皂苷的制备方法，其特征是将药物原料黄芪用体积浓度为40％～95％的含水乙醇回流提取，提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇体积含量至40％～95％进行沉淀和过滤，滤液调节至pH6.0～11.0后沉淀过滤，将滤液调节至pH6.0～8.0后，按原料药/水重量比为0.5～3/1的量加水混合，在保持不冻结的低温条件下沉淀后过滤，滤液用大孔吸附树脂吸附，以50％～90％浓度的含水乙醇解吸附洗脱并收集，将除去乙醇后的解吸附浓缩溶液调节pH至9.0～13.0后，用经水饱和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后用丙酮和乙醚中的至少一种进行沉淀，分离沉淀物为供注射剂用的黄芪皂苷。2.如权利要求1所述的注射用黄芪皂苷的制备方法，其特征是所说的黄芪原料回流提取所用的含水乙醇的浓度为60％～80％。3.如权利要求1所述的注射用黄芪皂苷的制备方法，其特征是所说的除去乙醇后的回流提取液重新加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：程志鹏，梁隆，胡思玉，余启波，张德奎，
申请(专利权)人：四川科伦药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]