黄芪总黄酮及总皂苷的提取方法技术

本发明专利技术提供从黄芪中提取总黄酮及总皂苷方法，其具体步骤为：将黄芪和10%～95%v/v的乙醇置于回流装置中，进行加热回流，得到提取液；提取液经过滤除渣后，再减压蒸馏回收乙醇至无醇味，得到浓缩液；将浓缩液用水稀释，稀释液过聚酰胺柱后，再依次用水、10%～95%v/v的乙醇洗脱聚酰胺柱，洗脱液先减压蒸馏回收乙醇，接着用乙酸乙酯萃取，减压蒸馏回收萃取液中的乙酸乙酯后，得到总黄酮；收集稀释液过聚酰胺柱时的流出液，流出液再用D-101大孔树脂进行吸附处理，然后依次用水、10%～95%v/v的乙醇洗脱D-101大孔树脂，洗脱液先减压蒸馏回收乙醇，接着用正丁醇萃取，减压蒸馏回收萃取液中的正丁醇后，得到总皂苷。该方法简单易行、污染少，所用试剂可回收再利用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药提取领域，具体涉及。
技术介绍
黄苗为豆科植物蒙古黄苗或膜荚黄苗的干燥根。是一味重要的中药药材，其具有补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌功能，用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，痈疽难溃，久溃不敛，血虚萎黄，内热消渴，慢性肾炎，蛋白尿，糖尿病。由于中药药材中所含成分十分复杂，对中药药材中有效成分的有效提取和分离成为现代中药研究的关键与如提。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供从黄芪中提取出总黄酮和总皂苷的方法。本专利技术实现上述目的的技术方案如下，，具体步骤依次如下(1)将黄芪和体积浓度为10% 95%的乙醇置于回流装置中，进行加热回流，得到提取液；(2)提取液经过滤除渣后，再减压蒸馏回收乙醇至无醇味，得到浓缩液；(3 )将浓缩液用水稀释，稀释液过聚酰胺柱后，再依次用水、体积浓度为10% 95%的乙醇洗脱聚酰胺柱，洗脱液先减压蒸馏回收乙醇，接着用乙酸乙酯萃取，减压蒸馏回收萃取液中的乙酸乙酯后，得到总黄酮；(4)收集步骤(3)中稀释液过聚酰胺柱时的流出液，流出液再用D-101大孔树脂进行吸附处理，然后依次用水、体积浓度为10% 95%的乙醇洗脱D-101大孔树脂，洗脱液先减压蒸馏回收乙醇，接着用正丁醇萃取，减压蒸馏回收萃取液中的正丁醇后，得到总皂苷。有益效果本专利技术采用醇提法及柱分离法从黄芪中成功提取分离出总黄酮和总皂苷，每公斤药材可提取出23. 5克的黄芪总黄酮和19. 7克的黄芪总皂苷，该方法简单易行、 污染少，所用试剂可回收再利用。具体实施例方式以下结合实施例对本专利技术作进一步说明。实施例I黄芪总黄酮提取取黄芪药材，润湿后切制成厚度为2 3mm的饮片，晾干，称取6. 5 kg，加入70%乙醇， 加热回流提取3次，每次lh，第一次加8倍量的乙醇，后两次加6倍量乙醇，合并三次提取液，滤过，滤液静置24 h，滤去沉淀，滤液减压蒸馏回收乙醇至无醇味，放冷，用蒸馏水稀释至I: I (v/v),然后上聚酰胺(购自河北沧州宝恩化工有限公司)柱，上柱液浓度lg/ml，上柱速度2BV/h，然后水洗，接着用70%乙醇洗，洗脱液回收乙醇后，用等体积的乙酸乙酯萃取5次，合并乙酸乙酯萃取液，减压蒸馏回收乙酸乙酯，残留物干燥，得152. 75g产物I。产物I的鉴定称取O. 2g的产物1，置于圆底烧瓶中，加入乙醇30 mL，加热回流提取20min，滤过，滤液蒸干，残渣加O. 3%氢氧化钠溶液15 mL使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH至5 6,用乙酸乙酯15 mL振摇提取,分取乙酸乙酯液,用铺有适量无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液蒸干，残渣用乙酸乙酯I mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材2g， 置于圆底烧瓶中，加入乙醇30 mL，加热回流提取20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加O. 3%氢氧化钠溶液15 mL使溶解,滤过,滤液用稀盐酸调节pH至5 6，用乙酸乙酯15 mL振摇提取，分取乙酸乙酯液，用铺有适量无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液蒸干，残渣用乙酸乙酯I mL 使溶解，作为对照药材溶液。吸取对照药材溶液、供试品溶液各10 L，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(10:1)为展开剂，展开，取出晾干，置氨蒸气熏后，置紫外光灯(365nm)下检视,确定为黄苗总黄酮。产物I中总黄酮的测定芦丁对照品溶液的制备精密称取105°c下干燥至恒重的芦丁对照品50 mg，置于干燥的25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置于IOOml容量瓶中， 加水至刻度，摇勻，即得(每Iml含无水芦丁 O. 2mg)备用。实配浓度为O. 2198mg/ml。芦丁标准曲线的绘制精密量取上述芦丁对照品溶液0、1、2、3、4、6、8mL，分别至25mL容量瓶中，各加水至8ml，分别加人5%亚硝酸钠溶液lmL，摇匀放置6分钟，加人 10%硝酸铝溶液lmL，放置6分钟，加人IN (4%)氢氧化钠溶液10mL，再加水至刻度，放置15分钟，置比色皿中，在波长500 nm处测定吸光度。数据经回归处理得回归方程为 A=Il. 66035C+0. 0062, r2=0. 99839。精密度试验精密吸取黄芪总黄酮样品溶液，测定吸光度，以吸光度计算，黄芪总黄酮RSD为2. 63%。稳定性试验取总黄酮样品溶液，每15分钟测一次吸光度，连续2h考察其稳定性， 结果表明2h内显色均稳定，可进行含量测定。回收率测定精密称取黄芪总黄酮40mg，加入一定量的芦丁对照品，用甲醇定容于25mL容量瓶中，摇匀。按含量测定的方法，测定，计算回收率。芦丁平均回收率为96. 8%， RSD 为 2. 85% (n=5)。产物I中总黄酮含量的测定精密吸取黄芪总黄酮样品溶液，按标准曲线法操作， 根据回归方程测其含量，得产物I中总黄酮的含量为O. 558g/g。实施例2黄芪总皂苷的提取将实施例I过聚酰胺柱时的流出液继续上D-IOl大孔树脂(购自河北沧州宝恩化工有限公司)柱，上柱液浓度lg/ml，上柱速度2BV/h，然后水洗，接着用70%乙醇洗，洗脱液减压蒸馏回收乙醇后，用等体积的正丁醇萃取5次，合并正丁醇萃取液，减压蒸馏回收正丁醇，残留物干燥，得128. 05g产物2。产物2的鉴定称取O. Ig的产物2，置于圆底烧瓶中，加入甲醇40 mL，加热回流提取I h，滤过，滤液置于装有5 g中性氧化铝(100-120目)的玻璃柱中，用40%甲醇100 mL 洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣用30 mL水溶解，用正丁醇振摇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次20mL，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇O. 5 mL溶解，作为供试品溶液。另精密称取黄芪甲苷对照品I. 5 mg，精密加入I mL甲醇，制成每I mL含1.5 mg的对照品溶液，作为对照品溶液。用移液管精密量取三氯甲烷、甲醇和水，按照三氯甲烷-甲醇-水(13:7:2)的体积比混合，分取下层液，到入层析缸中，层析盖涂抹凡士林， 密闭，饱和60 min，作为展开剂。精密吸取黄芪甲苷对照品溶液、供试品溶液各2 L，分别点于同一硅胶G薄层板上。将点好样的薄层板放入层析缸中，展开剂没过层析板5 _，展开至距薄层板前沿4 cm处时，将薄层板取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，确认所得产物2为黄芪总皂苷。产物2中总皂苷含量的测定黄芪甲苷对照品溶液的制备精密称取105°C下干燥至恒重的黄芪甲苷对照品12.5 mg,置于干燥的25 mL容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。实配浓度为 O. 532mg/ml。黄芪甲苷标准曲线的绘制精密吸取上述黄芪甲苷对照品溶液O. 15、0. 30、0.45、 O. 60,0. 75 mL，分别置于具塞试管中，分别加入无水乙醇O. 75 mL，再分别加入O. 75 mL8%香草醒一浓硫酸试剂，置于冰浴中加入7. 5ml体积分数为72%的硫酸摇匀，放入62°C的恒温水浴中保温20分钟，取出，流水冷却5 min，摇匀。在30分钟内，于波长544 nm处测定吸光度，随行空白。数据经回归处理得回归方程为A=21. 102C+0. 0298，r=0. 9993。精密度试验精密吸取黄芪总皂苷样品本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李金田，景明，李娟，张毅，刘永琦，刘光炜，苏韫，李雪燕，蔺兴遥，
申请(专利权)人：甘肃中医学院，
类型：发明
国别省市：